bank darah 5 ~ sakitx.blogspot.com

yaitu deteksi

antibodi dan deteksi virus . RNA virus HIV dapat di deteksi menggunakan Nucleic Acid Test

(NAT) sekitar 11 hari setelah terinfeksi. Pemeriksaan skrining antibodi HIV dipakai untuk

diagnosis primer yang diikuti dengan tes konfirmasi jika hasil positif/reaktif pada hal hasil

pemeriksaan skrining. Selain metode ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) dan juga

dipakai pemeriksaan partikel aglutinasi. Tes ELISA yang disetujui mengandung antigen HIV-

1 kelompok M, khususnya HIV-1 M: B, kelompok O dan HIV-2. Tergantung pada pabrikan,

antigen yang diturunkan dari reverse transcriptase dan protein p24 ditambahan dalam sistem

pemeriksaan. Selain itu, pemeriksaan bergantung pada respon imun dan titer antibodi. Infeksi

dapat dideteksi secara serologis setelah 3 minggu tapi biasanya setelah 4-5 minggu. Dalam

kasus yang jarang terjadi, orang yang terinfeksi HIV dengan imunosupresi lengkap

kemungkinan antibodi HIV-negatif, tetapi mereka memiliki gejala klinis khas HIV dan titer virus

yang terukur dalam darah.

Langkah pertama untuk mendiagnosis HIV/AIDS adalah anamnesis secara keseluruhan

kemudian ditemukan adanya faktor resiko dan menemukan temuan klinis pada pemeriksaan

fisik. Tes diagnostik untuk HIV yang sampai sekarang masih dipakai adalah ELISA (enzyme-

linked immunoabsorbent assay), rapid test, Western Blot, dan PCR (Polymerase chain

reaction) dengan sampel whole blood, dried bloodspots, saliva dan urin.

Rapid test disarankan untuk kasus kecelakaan kerja bagi petugas yang terpapar darah

penderita HIV/AIDS atau pada penderita yang kemungkinan tidak mau datang kembali untuk

menyampaikan hasil tes HIV. Tes ELISA merupakan pemeriksaan yang umum dilakukan karena

praktis dan sensitifitasnya tinggi. Rekomendasi WHO jika tes ELISA dengan 3 reagen yang

berbeda hasilnya postif semua atau rapid test dengan 3 reagen hasilnya positif semua maka

tidak dianjurkan tes Western Blot (WB). Berikut ini adalah algoritma untuk pemeriksaan HIV

pada donor

 Pemeriksaan HIV 1/2 Metode Rapid Tet

Prinsip :

Pemeriksaan rapid tes ini merupakan uji kualitatif untuk mendeteksi antibodi spesifik

untuk HIV 1 (IgG, IgM, IgA) termasuk subtipe O dan atibodi HIV-2 dalam serum, plasma

atau darah lengkap. Pada bagian tes (T) membaran strip dilekatkan antigen

recombinant HIV-1 capture antigen (gp41, p24) pada daerah garis tes 1 dan antigen

recombinant HIV-2 capture antigen (gp36) pada daerah garis tes 2. Antigen

recombinan HIV-1/2 (gp41, p24 and gp36) dan colloid gold conjugate di bagian well

sampel akan berikatan dengan antibodi HIV1/2 pada sampel dan bergerak pada

membran kromatografi menuju daerah tes (T), sehingga apa bila ada antibodi HIV

1/2 akan membentuk garis nyata berwarna ungu pada daerah tes (T) yang merupakan

ikatan komplek antigen – antibodi – antigen gold partikel dengan spesisfisistas dan

sensitivitas yang tinggi . Kelebihan Antigen recombinan HIV-1/2 (gp41, p24 and gp36)

dan colloid gold conjugate akan terus bergerak menuju area kontrol (C) yang telah

dilapisi antibodi HIV1/2 rekombinan, sehingga berikatan dan membentuk garis merah

pada area kontrol yang menunjukkan hasil pemeriksaan valid. Hasil reaktif harus

dikonfirmasi menggunakan pemeriksaan HIV metode ELISA atau Western Blot.

Alat dan Bahan :

4) HIV 1/2 Rapid test ( test strip , diluent dan pipet kapiler)

5) Mikropipet (10 µL, 20 µL)

6) Tip kuning

7) Timer

8) Sampel pasien (serum atau plasma atau darah lengkap)

Cara kerja :

1) Siapakan alat dan bahan yang diperlukan,kemudian simpan pada suhu kamar.

2) Buka kemasan kit pemeriksaan pada permukaan yang datar dan kering.

3) Untuk sampel menggunakan pipet kapiler, dipipet 20µL sampel darah dan

masukkan ke dalam sampel well (S). Untuk sampel yang menggunakan mikropipet,

dipipet 10 µL untuk serum atau plasma dan jika menggunakan sampel darah

dipipet 20 µL , kemudian masukkan kedalam sampel well (S)

4) Tambahkan 4 tetes larutan diluent secara vertikal ke dalam sampel well (S).

Perhatian: jika meneteskan tidak vertikal maka akan mempengaruhi keakuratan

hasil, dianjurkan hanya 4 tetes, apabila berlebih (5-6 tetes) akan mempengaruhi

terbentuknya garis menjadi tidak jelas. .

5) Baca hasil pengamatan 10-20 menit. Peringatan : jangan membaca hasil lebih dari

20 menit

Interpretasi Hasil

- Negatif : hanya terbentuk satu garis pada daerah kontrol (C).

- Positif :

b) Positif HIV-1 : Terbentuk dua garis ungu, satu garis di daerah tes 1 (T1)

dan satu garis di daerah kontrol (C).

c) Positif HIV-2 : Terbentuk dua garis ungu, satu garis di daerah tes 2 (T2)

dan satu garis di daerah kontrol (C).

- Invalid : Tidak terbentuk garis pada daerah kontrol (C).

Catatan : apabila terbentuk 3 garis yaitu di daerah Tes 1 (T1), Tes 2 (T2) dan kontrol

(C), maka harus dikonfirmasi dengan western Blot untuk penentuan jenis virus.

 Pemeriksaan HIV 1/2 Metode ELISA

Prinsip :

Gambar Prinsip pemeriksaan HIV 1/2 metode ELISA

Test Microlisa HIV merupakan test berbasis Indirect ELISA. Protein HIV envelope gp41,

gp 120 untuk HIV-1, dan gp 36 untuk HIV-2 yanga merupakan epitop imunodominan

dilekatkan pada sumur mikrotiter. Sampel dan kontrol ditambahkan ke dalam sumur

dan di inkubasi. Apabila pada sampel ada antibodi HIV-1 dan HIV 2 maka akan

berikatan dengan antigen spesifik yang telah dilekatkan pada permukaan sumur. Plate

kemudian dicuciuntuk menghilangkan komponen yang tidak berikatan. Horseradish

peroxidase (HRP) konjugat dan antihuman IgG ditambahkan ke dalam setiap well.

Konjugat akan berikatan dengan komplek HIV antigen-antibody yang terbentuk.

Selanjutnya larutan substrat yang mengandung kromogen dan hidrogen peroksida

ditambahkan pada setiap sumur dan diinkubasi. Warna biru yang terbentuk sebanding

dengan jumlah antibodi HIV-1 dan atau antibodi HIV-2 yang ada pada sampel.

Kemudian perubahan warna yang terbentuk dihentikan oleh stop solution. Warna yang

terbentuk dibaca pada ELISA reader dengan panjang gelombang 450 nm. Apabila

sampel tidak mengandung antibodi HIV-1 dan atau antibodi HIV-2, maka tidak akan

terbentuk warna biru pada sumur.

Alat dan bahan :

1) ELISA Kit untuk deteksi antibodi HIV-1/2

2) Mikropipet

3) Timer Elisa

4) reader Elisa

5) Washer ELISA

6) Inkubator370C

7) Vortex

8) Sarung tangan

9) Tisu atau kertas saring

10) Sampel (serum atau plasma)

Cara kerja

1) Dipipet 100 µl sample diluent dan masukkan ke sumur A-1 well sebagai blank.

2) Dipipet 100 µl kontrol negatif dan masukkan ke setiap sumur dengan nomor B-1 dan

C-1. Perhatian : negatif kontrol siap dipakai tidak perlu diencerkan.

3) Dipipet 100 µl Positif kontrol dan masukkan pada sumur D-1, E-1 & F-1. Perhatian :

negatif kontrol siap dipakai tidak perlu diencerkan.

4) Dipipet 100 µl sample diluent dan masukkan ke setiap sumur dimulai dari G-1 diikuti

dengan penambahan sampel sebanyak 10µl.

5) Tutup plate.

6) Inkubasi pada 37°C ± 2°C selama 30 menit ± 2 menit.

7) Selama inkubasi siapkan larutan pencuci (wash buffer) dan larutan kerja konjugat

spesifik.

8) Keluarkan plate dari inkubator dan cuci 5 kali dengan larutan pencuci (wash buffer)

9) Tambahkan 100 µl larutan HRP konjugat pada setiap sumur dari mulai A-1.

10) Tutup plate

11) Inkubasi pada 37°C ± 2°C selama 30 menit ± 2 menit

12) Buang dan cuci seperti prosedur no 8

13) Tambahkan 100 µl TMB substrat pada setiap sumur dari mulai A-1

14) Inkubasi pada suhu ruang (20 - 30ºC) selama 30 menit pada keadaan gelap

15) Tambahkan 100 µl of larutan stop pada setiap sumur.

16) Baca absorban pada panjang gelombang 450 nm dalam waktu 30 menit pada ELISA

READER setelah blanking sumur A-1.

Tes validitas :

1) Nilai absorban Blanko harus lebih kecil dari 0,100

2) Nilai absorban Negatif kontrol harus < 0,150

3) Nilai absorban Positif kontrol ha> 0,50

Interpretasi Hasil

1) Spesimen dengan absorbansi kurang dari (<) nilai cut-off dinyatakan negatif.

2) Spesimen dengan nilai absorbansi lebih besar atau sama dengan () nilai cut-off

dinyatakan positif.

Topik 3

Hepatitis C

A. STRUKTUR DAN MORFOLOGI

Hepatitis C adalah jenis yang paling berbahaya dari semua jenis virus hepatitis, karena

infeksi ini biasanya tidak menimbulkan gejala sampai di tahapan akhir infeksi kronis.

Kebanyakan orang tidak menyadari bahwa mereka terinfeksi hepatitis sampai akhirnya

menderita kerusakan hati permanen beberapa tahun kemudian, saat dilakukan tes medis

rutin.

Pada tahun 1980-an timbul sejumlah kasus hepatitis yang menyebar melalui transmisi

parenteral. Virus ini tidak dapat dikatagorikan dalam kelompok atau tipe virus hepatitis yang

ada saat itu, yaitu virus hepatitis A, B dan Delta. Seiring dengan perkembangan teknologi,

ditemukanlah metode isolasi dan karakterisasi RNA virus. Virus ini kemudian dikenal dengan

virus hepatitis C dan merupakan penyebab dominan kasus infeksi akibat virus hepatitis non A

dan non B (NANBH). Hepatitis C adalah peradangan hati yang disebabkan oleh virus hepatitis

C (hepatitis C virus/HCV), yaitu virus yang bergenom RNA untai tunggal dan dikatagorikan ke

dalam kelompok Flaviviridae . Dalam perjalanan penyakitnya hepatitis C dapat menjadi infeksi

akut dan infeksi kronis, dimana dari infeksi kronis ini dapat berkembang menjadi fibrosis

dan kanker hati . Hepatitis C juga berpotensi menjadi kejadian luar biasa (KLB). Oleh sebab itu

penyakit hepatitis C masih termasuk dalam masalah kesehatan utama di indonesia.

Patogenesis infeksi HCV hingga memicu hepatitis C tidak lepas dari peran struktur

genom yang dimilikinya. Sekitar 9600 nukleotida menyusun sebuah Untranslated Region dan

Open Reading Frame (ORF). Open Reading Frame akan mengkode sejumlah protein fungsional

yang berperan dalam membentuk struktur virus serta berperan dalam patogenesis infeksi,

terutama dalam hal mekanisme replikasi virus dalam sel inang. Struktur genom virus hepatitis

C, partikel HCV (virion) terdiri berukuran 40-70 nm. Virion terdiri dari bagian inti (core) yang

mengandung materi genetik berupa satu untai RNA yang dikelilingi oleh lapisan protein

pelindung dengan struktur ikosahedral yang disebut nukleokapsid. Pada bagian luar

nukleokapsid ada lapisan lipid dan glikoprotein yang membentuk struktur envelop. Open

Reading Frame mengkodekan sekitar 3000 asam amino, poliprotein ini kemudian menjadi 10

protein fungsional pascatranslasi melalui proses yang melibatkan sejumlah proteinase milik

sel inang dan virus.

Gambar 5.18 Genom Virus Hepatitis C

Pada bagian ujung terminal 5’ dan 3’ ada daerah yang disebut Untraslated Region

(UTR). Daerah ini tidak mengkodekan protein apapun, namun berperan penting dalam inisiasi

traskripsi dan translasi. Bagian yang terletak di ujung 5’ disebut daerah 5’UTR, sedangkan yang

terletak di ujung 3’ disebut 3’UTR. poliprotein post tranlasi terdiri dari protein struktural

(terletak di dekat ujung amino) dan protein non struktural (terletak di dekat ujung karboksil).

protein struktural adalah protein yang berperan dalam pembentukan struktur virus, yaitu

protein core, E1, E2 dan P7. protein non struktural terdiri dari NS2, NS3, NS4 dan NS5.

Beberapa dari protein ini akan dipotong menjadi protein berukuran kecil yang berperan dalam

replikasi virus. rantai poliprotein yang terbentuk akan dipotong melalui mekanisme yang

disebut chopping. pemotongan ini dilakukan oleh sejumlah protease.

B. CARA PENULARAN

Pada biasanya cara penularan HCV adalah parental. Semula penularan HCV

dihubungkan dengan transfusi darah atau produk darah, melalui jarum suntik. Tetapi setelah

ditemukan bentuk virus dari hepatitis, makin banyak laporan mengenai cara penularan

lainnya, yang biasanya mirip dengan cara penularan HBV, yaitu:

1) Penularan horizontal

Penularan HCV terjadi terutama melalui cara parental, yaitu tranfusi darah atau

komponen produk darah, hemodialisa, dan penyuntikan obat secara intravena.

2) Penularan vertikal

Penularan vertikal adalah penularan dari seseorang ibu pengidap atau penderita

Hepatitis C kepada bayinya sebelum persalinan, pada saat persalinan atau beberapa saat

persalinan.

Jika masuk ke dalam darah maka HCV akan segera menuju hepatosit (sel hati) dan dan

juga sel limfosit B. Hanya dalam sel hati HCV bisa berkembang biak. sebab sulitnya

membiakkan HCV pada kultur, juga tidak adanya model binatang non-primata telah

memperlambat lajunya riset HCV. Berikut ini adalah daur hidup HCV (Gambar 5.11).

Gambar 5.19. Siklus hidup virus hepatitis C

Melalui gambar skematis di atas, proses siklus kehidupan HCV digambarkan secara alur

skematis.

1) HCV masuk ke dalam hepatosit dengan mengikat suatu reseptor permukaan sel yang

spesifik. Reseptor ini belum teridentifikasi secara jelas, namun protein permukaan CD8+

adalah suatu HCV binding protein yang memainkan peranan dalam masuknya virus. Salah

satu protein khusus virus yang dikenal sebagai protein E2 menempel pada reseptor site di

bagian luar hepatosit.

2) Kemudian protein inti dari virus menembus dinding sel dengan suatu proses kimiawi

dimana selaput lemak bergabung dengan dinding sel dan selanjutnya dinding sel akan

melingkupi dan menelan virus serta membawanya ke dalam hepatosit. Di dalam

hepatosit, selaput virus (nukleokapsid) melarut dalam sitoplasma dan keluarlah RNA virus

(virus uncoating) yang selanjutnya mengambil alih peran bagian dari ribosom hepatosit

dalam membuat bahan-bahan untuk proses reproduksi.

3) Virus dapat membuat sel hati memperlakukan RNA virus seperti miliknya sendiri. Selama

proses ini virus menutup fungsi normal hepatosit atau membuat lebih banyak lagi

hepatosit yang terinfeksi kemudian menbajak mekanisme sintesis protein hepatosit

dalam memproduksi protein yang dibutuhkannya untuk berfungsi dan berkembang biak.

4) RNA virus dipergunakan sebagai cetakan (template) untuk memproduksi masal

poliprotein (proses translasi).

5) Poliprotein dipecah dalam unit-unit protein yang lebih kecil. Protein ini ada 2 jenis yaitu

protein struktural dan regulatori. Protein regulatori memulai sintesis kopi virus RNA asli.

6) Sekarang RNA virus mengopi dirinya sendiri dalam jumlah besar (miliaran kali) untuk

menghasilkan bahan dalam membentuk virus baru. Hasil kopi ini adalah bayangan cermin

RNA orisinil dan dinamai RNA negatif. RNA negatif lalu bertindak sebagai cetakan

(template) untuk memproduksi serta RNA positif yang sangat banyak yang merupakan

kopi identik materi genetik virus.

7) Proses ini berlangsung terus dan memberikan kesempatan untuk terjadinya mutasi

genetik yang menghasilkan RNA untuk strain baru virus dan subtipe virus hepatitis C.

Setiap kopi virus baru akan berinteraksi dengan protein struktural, yang kemudian akan

membentuk nukleokapsid dan kemudian inti virus baru. Amplop protein kemudian akan

melapisi inti virus baru.

8) Virus dewasa kemudian dikeluarkan dari dalam hepatosit menuju ke pembuluh darah

menembus membran sel.

Keluaran dan derajat keparahan dari infeksi virus hepatitis bergantung pada jenis virus,

jumlah virus dan faktor dari host.

C. GEJALA KLINIS

Manifestasi klinis hepatitis virus C dikenal mulai dari hepatitis akut, fulminan, kronis,

yang dapat berkembang menjadi sirosis atau kanker hati.

1) Infeksi Akut

Umumnya infeksi akut HCV tidak memberi gejala atau hanya bergejala minimal. Hanya

20-30% kasus yang menunjukkan tanda-tanda hepatitis akut 7 – 8 minggu (berkisar 2 – 26

minggu) setelah terjadinya paparan.

Infeksi virus hepatitis terbagi 3 fase, yaitu fase prodormal, fase ikterik, dan fase

convalescent. Pada fase prodormal, onset terjadi pada hari 1-14, namun rata-rata timbul pada

hari 5-7 setelah paparan. Keluhan yang sering yaitu malaise, fatique, mual dan muntah,

kehilangan selera makan, demam , gejala flu , dan kebanyakan pasien mengeluh adanya nyeri

pada perut kanan atas.

Pada fase ikterik, gejala yang sering ditimbulkan yaitu warna kuning pada mukosa sklera

pada awalnya dan berlanjut pada perubahan warna pada kulit. Durasi ikterik bervariasi,

biasanya antara 4 hari sampai beberapa bulan, namun rata-rata 2-3 minggu. Urin menjadi

gelap, feses berwarna seperti dempol (pucat). Selama fase ini, setengah penderita

menunjukkan gejala gatal-gatal.

Pada fase convalescent, kebanyakan gejala di atas menghilang (resolve). Ikterik tidak

ditemukan, warna pada kulit, urin dan feses kembali ke warna yang semula. Kembalinya nafsu

makan dan adanya peningkatan berat badan menunjukkan sudah adanya tahap

penyembuhan.

Umumnya secara klinik gejala HCV akut lebih ringan daripada hepatitis virus akut

lainnya. Masa inkubasi HCV terletak antara HAV dengan HBV, yaitu sekitar 2 – 26 minggu,

dengan rata-rata 8 minggu. Pada penderita hepatitis akut ditemukan Anti HCV positif pada

75,5% HNANB pasca-tranfusi, 35% pada HNANB sporadik dan hanya 2,4 pada HBV. Sebagian

besar penderita yang terserang HCV akut akan menjurus menjadi kronis.

RNA virus hepatitis C dapat terdeteksi sebelum gejala muncul, namun level dari viremia

pada 6 bulan pertama dapat dorman dan tidak terdeksi walaupun orang ini sedang

dalam infeksi yang persisten. Gejala awal yang ditunjukkan tergantung dari usia saat

terjadinya paparan, sistem imun penderita, adanya penyakit hati sebelumnya dan tingkat

inokulasi virus.

Level serum dari enzim hati seperti alanin aminotransferase (ALT) meningkat 10 kali

lebih tinggi dari pada normal, kemudian menurun, dan untuk orang dengan infeksi yang

persisten didapatkan kadar ALT naik turun (fluktuatif). Serum bilirubin juga dapat meningkat

setelah beberapa minggu gejala pertama muncul, namun akhirnya kembali ke level yang

normal. Secara garis besar, angka mortalitas pada infeksi akut tergolong rendah.

2) Infeksi Kronis

Infeksi akan menjadi kronik pada 70 – 90% kasus dan sering kali tidak menimbulkan

gejala apapun walaupun proses kerusakan hati berjalan terus. Adapun kriteria dari hepatitis

kronis adalah naiknya kadar transaminase serum lebih dari 2 kali nilai normal, yang

berlangsung lebih dari 6 bulan. Hilangnya HCV setelah terjadinya hepatitis kronis sangat jarang

terjadi. Jangka waktu dimana berbagai tahap penyakit hati berkembang sangat bervariasi.

Diperlukan waktu 20 – 30 tahun untuk terjadinya sirosis hati yang sering tejadi pada 15 – 20%

pasien hepatitis C kronis. Progresivitas hepatitis kronik menjadi sirosis hati tergantung

beberapa faktor resiko yaitu: asupan alkohol, ko-infeksi dengan virus hepatitis B atau Human

Immunodeficiency Virus (HIV), jenis kelamin laki-laki, usia tua saat terjadinya infeksi dan kadar

CD4+ yang sangat rendah. Bila telah terjadinya sirosis, maka risiko terjadinya karsinoma

hepatoselular adalah sekitar 1-4% pertahun. Karsinoma hepatoseluler dapat terjadi tanpa

diawali dengan sirosis, namun hal ini jarang terjadi.

3) Hepatitis C Fulminan

Hepatitis fulminan jarang terjadi. ALT (alanine amino-transferase) meninggi sampai

beberapa kali diatas batas atas normal tetapi biasanya tidak sampai lebih dari 1000 U/L.

Selain memiliki manifestasi hepatik, ada beberapa manifestasi ektrahepatik HCV yang penting

a) Mixed Cryoglobulinaemic vasculitis

Pada 50% pasien HCV biasanya terdeteksi cryoglobulin pada serum darah, dan

Kriopresipitat biasanya mengandung sejumlah besar antigen dan antibodi HCV, namun

hanya sebagian kecil pasien (10-15%) yang memiliki gejala. Gejala-gejala biasanya terkait

dengan vaskulitis, yaitu lemah, atralgia dan purpura.

b) Membranoproliferative glomerulonephritis

Pada kasus ini, telah terjadi peranan dari persarafan dan otak sehingga gejala yang

timbul lebih berat.

c) Poliarteritis Nodosa

d) Papular Acrodermatitis (Gianotti syndrome)

D. METODE PEMERIKSAAN

Penegakan diagnosis pada hepatitis virus C berdasarkan uji serologi untuk memeriksa

antibodi dan Uji HCV RNA.

1) Uji serologi

Uji serologi yang berdasarkan pada deteksi antibodi telah membantu mengurangi risiko

infeksi terkait transfusi. Sekali pasien pernah mengalami serokonversi, biasanya hasil

pemeriksaan serologi akan tetap positif, namun kadar antibodi anti-HCV akan menurun

secara gradual sejalan dengan waktu pada sebagian pasien yang infeksinya mengalami reaksi

spontan.

Antibodi terhadap HCV biasanya dideteksi dengan metode enzyme immunoassay yang

sangat sensitif dan spesifik. Enzyme immunoassay generasi k-3 yang banyak dipergunakan

saat ini mengandung protein core dan protein struktural-struktural yang dapat mendeteksi

keberadaan antibodi dalam waktu 4-10 minggu infeksi. Antibodi anti-HCV masih tetap dapat

terdeteksi selama terapi maupun setelahnya tanpa memandang respon terapi yang telah

dialami, sehingga pemeriksaan anti-HCV tidak perlu dilakukan kembali apabila sudah pernah

dilakukan sebelumnya. Uji immunoblot rekombinan (recombinant immunoblot assay, RIBA)

dapat dipakai untuk mengkonfirmasi hasil uji enzyme immunoassay yang

positif. Penggunaan RIBA untuk mengkonfirmasi hasil hanya direkomendasikan untuk setting

populasi resiko rendah seperti pada bank darah. Namun dengan tersedianya metode enzyme

immunoassay yang sudah diperbaiki dan uji deteksi RNA yang lebih baik saat ini, maka

konfirmasi denga RIBA telah menjadi kurang diperlukan.

2) Uji HCV RNA

HCV RNA dapat terdeteksi dan diukur dengan teknik amplifikasi termasuk reverse

transcription polymerase chain reation (RT-PCR). Genotip HCV dapat dinilai dengan analisis

phylogenetic dari rantai nukleotida atau deteksi mutasi point spesifik subtipe pada RT-PCR

amplifikasi RNA. HCV RNA dideteksi dalam waktu 2 minggu infeksi dan juga dipakai untuk

konfirmasi terjadinya infeksi akut. Bagaimanapun uji HCV RNA yang rutin tidak dianjurkan

secara langsung karena standarisasi uji ini yang masih rendah.

3) Biopsi Hati

Biopsi hati secara umum direkomendasikan untuk penilaian awal seorang pasien dengan

infeksi HCV kronis. Biopsi berguna untuk menentukan derajat beratnya penyakit (tingkat

fibrosis) dan menentukan derajat nekrosis dan inflamasi.1 Pemeriksaan ini juga bermanfaat

untuk menyingkirkan kemungkinan adanya penyebab hati yang lain, seperti fitur

alkoholik, non-alcoholic steatohepatits (NASH), hepatitis autoimun, penyakit hati drug-

induced atau overload besi.

 Pemeriksaan HIV 1/2 Metode Rapid Tet

Prinsip : Pemeriksaan rapid tes ini merupakan uji kualitatif untuk mendeteksi antibodi

spesifik untuk HCV dalam serum atau plasma. Pada bagian sampel (S) membran strip

dilekatkan antigen recombinant HCV dan colloid gold conjugate yang berikatan dengan

antibodi HCV pada sampel, kemudian bergerak pada membran kromatografi menuju

daerah tes (T) yang telah dilekatkan antigen rekombinan HCV(antigen HCV Core, NS3, NS4,

NS5), sehingga apabila ada antibodi HCV pada sampel akan membentuk garis nyata

berwarna ungu pada daerah tes (T) yang merupakan ikatan komplek antigen – antibodi –

antigen gold partikel dengan spesisfisistas dan sensitivitas yang tinggi . Kelebihan Antigen

recombinan HCV dan colloid gold conjugate akan terus bergerak menuju area kontrol (C)

yang telah dilapisi antibodi HCV rekombinan, sehingga berikatan dan membentuk garis

merah pada area kontrol yang menunjukkan hasil pemeriksaan valid.

Alat dan Bahan :

 HCV Rapid test ( test strip , diluent dan pipet kapiler)

 Mikropipet (10 µL)

 Tip kuning

 Timer

 Sampel pasien (serum atau plasma)

Cara kerja :

1) Siapakan alat dan bahan yang diperlukan,kemudian simpan pada suhu kamar.

2) Buka kemasan kit pemeriksaan pada permukaan yang datar dan kering.

3) Untuk sampel menggunakan pipet kapiler atau mikropipet, dipipet 10µL sampel

darah dan masukkan ke dalam sampel well (S).

4) Tambahkan 3 tetes larutan diluent secara vertikal ke dalam sampel well (S).

5) Baca hasil pengamatan 5-20 menit. Peringatan : jangan membaca hasil lebih dari 20

menit

Interpretasi Hasil

- Negatif : hanya terbentuk satu garis pada daerah kontrol (C).

- Positif : Terbentuk dua garis ungu, satu garis di daerah tes (T) dan satu garis di

daerah kontrol (C).

Derajat warna yang terbentuk pada hasil positif

- Invalid : Tidak terbentuk garis pada daerah kontrol (C).

 Pemeriksaan HCV Metode ELISA

Prinsip :

Test Microlisa HIV merupakan test berbasis Indirect ELISA. Protein recombinant HCV

Core, protein NS3 dan sintetis peptida yang memiliki segmen antigenik, NS4 and NS5

regions dari virus hepatitis C dilekatkan pada sumur mikrotiter. Sampel dan kontrol

ditambahkan ke dalam sumur dan di inkubasi. Apabila pada sampel ada antibodi

HCV maka akan berikatan dengan antigen spesifik yang telah dilekatkan pada

permukaan sumur. Plate kemudian dicuciu ntuk menghilangkan komponen yang tidak

berikatan. Horseradish peroxidase (HRP) konjugat dan antihuman IgG ditambahkan ke

dalam setiap well. Konjugat akan berikatan dengan komplek HCV antigen-antibodi

yang terbentuk. Selanjutnya larutan substrat yang mengandung kromogen dan

hidrogen peroksida ditambahkan pada setiap sumur dan diinkubasi. Warna biru yang

terbentuk sebanding dengan jumlah antibodi HCV yang ada pada sampel.

Kemudian perubahan warna yang terbentuk dihentikan oleh stop solution. Warna yang

terbentuk dibaca pada ELISA reader dengan panjang gelombang 450nm / 630 nm.

Apabila sampel tidak mengandung antibodi HCV, maka tidak akan terbentuk warna

biru pada sumur.

Alat dan bahan :

a. Reagen ELISA untuk deteksi antibodi HCV

b. Mikropipet

c. Timer Elisa

d. reader Elisa

e. Washer ELISA

f. Inkubator370C

g. Vortex

h. Sarung tangan

i. Tisu atau kertas saring

j. Sampel (serum atau plasma)

Cara Kerja :

1) Siapkan alat dan bahan yang dibutuhkan. Simpan pada suhu kamar sebelum

dipakai .

2) Beri label setiap well. Label diberikan pada satu sumur (A1) sebagai blanko dan

dua sumur (B1 & C1) sebagai negatif kontrol dan tiga sumur (D1, E1 & F1) sebagai

positif kontrol

3) Tambahkan 100µl positif dan negatif kontrol (langsung dipakai )sesuai label

pada sumur.

4) Tambahkan 100 µl larutan pengencer pada setiap sumur untuk sampel

5) Tambahkan 10µl sampel pada sumur yang ada larutan pengencer tadi dan

homogenkan

6) Tutup mikroplate dan inkubasi pada suhu kamar (25-30°C) selama 30 menit

7) Cuci mikroplate sebanyak 5 kali dengan penambahan 300µl setiap sumur dengan

larutan buffer pencuci. Hati-hati jangan sampai kontaminasi

8) Tambahkan 100µl larutan HRP konjugat pada setiap sumur.

9) Tutup mikroplate dan inkubasi pada suhu kamar (25-30°C) selama 30 menit

10) Cuci mikroplate sebanyak 5 kali dengan penambahan 300µl setiap sumur dengan

larutan buffer pencuci. Hati-hati jangan sampai kontaminasi.

11) Tambahkan 100µl larutan TMB substrat pada setiap sumur.

12) Tutup mikroplate dan inkubasi pada suhu kamar (25-30°C) selama 30 menit

(keadaan gelap)

13) Hentikan reaksi dengan penambahan 100ul of the stop solution pada setiap

sumur.

14) Baca absorban pada panjang gelombang 450nm/630nm dalam waktu 30 menit

pada ELISA READER Dipipet 100 µl sample diluent dan masukkan ke sumur A-1 well

sebagai blank.

Tes validitas :

4) Nilai absorban Blanko harus lebih kecil dari 0,150

5) Nilai absorban Negatif kontrol harus < 0,250

6) Nilai absorban Positif kontrol harus > 0,60

Interpretasi Hasil

1) Spesimen dengan absorbansi kurang dari (<) nilai cut-off dinyatakan negatif.

2) Spesimen dengan nilai absorbansi lebih besar atau sama dengan () nilai cut-off

dinyatakan positif.

Topik 4

Sifilis

A. STRUKTUR DAN MORFOLOGI

Sifilis merupakan penyakit kronis dan bersifat sistemik yang disebabkan oleh treponema

palidum. Angka kejadian sifilis mencapai 90% dinegara-negara berkembang. World Health

Organization (WHO) memperkirakan sebesar 12 juta kasus baru terjadi di afrika, Asia Selatan,

Asia Tenggara, Amerika Latin dan Caribbean. Angka kejadian Sifilis di Indonesia berdasarkan

laporan Survey Terpadu dan Biologis Perilaku (STBP) tahun 2011 Kementrian Kesehatan RI

terjadi peningkatan angka kejadian Sifilis di tahun 2011 dibandingkan tahun 2007.

Treponema pallidum merupakan spesies treponema dari famili Spirochaeta, ordo

Spirochaetales, taksonomi dapat dilihat pada tabel 21.

Tabel 20. Taksonomi Treponema pallidum

TINGKATAN NAMA

Kingdom Bacteria

Phylum Spirochaetes

Ordo Spirochaetales

Family Spirochaetaceae

Genus Treponema

Species T. Pallidum

Subspecies Pallidum

Treponema pallidum berbentuk spiral, gram negatif dengan panjang kisaran 11 µm

dengan diameter antara 0,09 – 0,18 µm. ada dua lapisan, sitoplasma merupakan lapisan

dalam mengandung mesosom, vakuol ribosom dan bahan nukleoid, lapisan luar yaitu bahan

mukoid.

Gambar Struktur Treponema pallidum

B. CARA PENULARAN

Treponema palidum masuk melalui selaput lendir yang utuh, atau kulit yang mengalami

abrasi, menuju kelenjar limfe, kemudian masuk ke dalam pembuluh darah, dan diedarkan ke

seluruh tubuh. Biasanya dapat ditularkan melalui hubungan sekseual (membran mukosa atau

uretra), kontak langsung dengan lesi atau luka yang terinfeksi, transfusi darah dan juga dari

ibu yang menderita sifilis ke janin yang dikandung melalui plasenta pada stadium akhir

kehamilan.

Setelah beredar beberapa jam, infeksi menjadi sistemik walaupun tanda-tanda klinis dan

serolois belum jelas. Sekitar satu minggu setelah terinfeksi Treponema palidum, ditempat

masuknya akan timbul lesi primer berupa ulkus. Ulkus akan muncul selama satu hingga lima

minggu dan kemudian menghilang. Uji serologis masih akan negatif ketika ulkus pertama kali

muncul dan baru akan reaktif setelah satu sampai empat minggu berikutnya. Enam minggu

kemudian, timbul erupsi seluruh tubuh pada sebagian kasus sifilis sekunder dan ruam ini akan

hilang kisaran dua sampai enam minggu, karena terjadi penyembuhan spontan. Perjalanan

penyakit menuju ke tingkat laten, dimana tidak ditemukan tanda-tanda klinis, kecuali hasil

pemeriksaan serologis yang reaktif. Masa laten dapat berlangsung bertahun-tahun atau

seumur hidup.

C. GEJALA KLINIS

Stadium sifilis dalam perjalanannya dibagi menjadi tiga stadium yaitu sifilis stadium

primer, sekunder dan tersier yang terpisah oleh fase laten dimana waktu bervariasi, tanpa

tanda klinis infeksi. Interval antara stadium primer dan sekunder berkisar dari beberapa

minggu sampai beberapa bulan. Interval antara stadium sekunder dan tersier biasanya lebih

dari satu tahun.

 Sifilis Primer

Lesi awal sifilis berupa papul yang muncul di daerah genitalia kisaran tiga minggu setelah

kontak seksual. Papul membesar dengan ukuran 0,5 – 1,5 cm kemudian mengalami ulserasi,

membentuk ulkus. Ulkus sifilis yang khas berupa bulat, diameter 1-2 cm , tidak nyeri, dasar

ulkus bersih tidak ada eksudat, teraba indurasi, soliter tetapi dapat juga multipel. Hampir

sebagian besar disertai pembesaran kelenjar getah bening inguinal medial unilateral atau

bilateral. Gambaran chancre sifilis primer dapat dilihat pada gambar .

Gambar chancre sífilis primer pada penis

Chancre sífilis primer sering terjadi pada genitalia, perineal, atau anus dikarenakan

penularan paling sering melalui hubungan seksual, tetapi bagian tubuh yang lain dapat juga

terkena. Ulkus jarang terlihat pada genitalia eksterna wanita, karena lesi sering pada vagina

atau serviks. Dengan menggunakan spekulum, akan terlihat lesi di serviks berupa erosi atau

ulserasi yang dalam. Tanpa pengobatan lesi primer akan sembuh spontan dalam waktu 3

sampai 6 pekan. Diagnosis banding sifilis primer yaitu ulkus mole yang disebabkan

Haemophilus ducreyi, limfogranuloma venereum, trauma pada penis, fixed drug eruption,

herpes genitalis.

 Sifilis Sekunder

Manifestasi akan timbul pada beberapa minggu atau bulan, muncul gejala sistemik

berupa demam yang tidak terlalu tinggi, malaise, sakit kepala, adenopati, dan lesi kulit atau

mukosa. Lesi sekunder yang terjadi merupakan manifestasi penyebaran Treponema pallidum

secara hematogen dan limfogen. Manifestasi klinis sifilis sekunder dapat berupa berbagai

ruam pada kulit, selaput lendir, dan organ tubuh. Lesi kulit biasanya simetris, dapat berupa

makula, papula, folikulitis, papuloskuamosa, dan pustul, jarang disertai keluhan gatal. Lesi

dapat ditemukan di trunkus dan ekstermitas, termasuk telapak tangan dan kaki. Papul

biasanya merah atau coklat kemerahan, diskret, diameter 0,5 – 2 cm, biasanya berskuama

tetapi kadang licin. Lesi vesikobulosa dapat ditemukan pada sifilis kongenital.

Kondiloma lata merupakan istilah untuk lesi meninggi (papul), luas, putih atau abu-abu

di daerah yang hangat dan lembab. Lesi sifilis sekunder dapat muncul pada waktu lesi sifilis

primer masih ada. Diagnosis sifilis sekunder ditegakkan berdasarkan hasil pemeriksaan

serologis yang reaktif dan pemeriksaan lapangan gelap positif. Treponema pallidum banyak

ditemukan pada lesi selaput lendir atau basah seperti kondiloma lata.

Ruam kulit pada sifilis sekunder sukar dibedakan dengan pitiriasis rosea, psoriasis,

terutama jika berskuama, eritema multiforme dan erupsi obat. Diagnosis sifilis sekunder

cukup sulit. Pada biasanya diagnosis ditegakkan berdasarkan kelainan khas lesi kulit sifilis

sekunder ditunjang dengan pemeriksaan serologis.

 Sifilis Laten

Sifilis laten yaitu apabila pasien dengan riwayat sifilis dan pemeriksaan serologis reaktif

yang belum mendapat terapi sifilis dan tanpa gejala atau tanda klinis. Sifilis laten terbagi

menjadi dini dan lanjut, dengan batasan waktu kisaran satu tahun. Dalam perjalanan penyakit

sifilis akan melalui tingkat laten, selama bertahun-tahun atau seumur hidup. Tetapi

bukan bearti penyakit akan berhenti pada tingkat ini, sebab dapat berjalan menjadi sifilis

tersier.

 Sifilis Tersier

Sifilis tersier terdiri dari tiga grup sindrom yang utama yaitu neurosifilis, sifilis

kardiovaskular, dan sifilis benigna lanjut. Pada perjalanan penyakit neurosifilis dapat

asimptomatik dan sangat jarang terjadi dalam bentuk murni. Pada semua jenis neurosifilis,

terjadi perubahan berupa endarteritis obliterans pada ujung pembuluh darah disertai

degenerasi parenkimatosa yang mungkin sudah atau belum menunjukkan gejala saat

pemeriksaan.

Sifilis kardiovaskular disebabkan terutama karena nekrosis aorta yang berlanjut ke

katup. Tanda-tanda sifilis kardiovaskuler adalah insufisiensi aorta atau aneurisma, berbentuk

kantong pada aorta torakal. Bila komplikasi ini telah lanjut, akan sangat mudah dikenal.

Sifilis benigna lanjut atau gumma merupakan proses inflamasi proliferasi granulomatosa

yang dapat memicu destruksi pada jaringan yang terkena. Disebut benigna sebab jarang

memicu kematian kecuali bila menyerang jaringan otak. Gumma mungkin terjadi akibat

reaksi hipersensitivitas infeksi Treponema palidum. Lesi sebagian besar terjadi di kulit dan

tulang. Lesi pada kulit biasanya soliter atau multipel, membentuk lingkaran atau setengah

lingkaran, destruktif dan bersifat kronis, penyembuhan di bagian sentral dan meluas ke

perifer. Lesi pada tulang biasanya berupa periostitis disertai pembentukan tulang atau osteitis

gummatosa disertai kerusakan tulang. Gejala khas ialah pembengkakan dan sakit. Lokasi

terutama pada tulang kepala, tibia, dan klavikula. Pemeriksaan serologis biasanya reaktif

dengan titer yang tinggi.

 Sifilis Kongenital

Penyakit yang ditularkan kepada janin dalam uterus dari ibu yang positif menderita

sifilis. Infeksi sifilis terhadap janin dapat terjadi pada setiap stadium sifilis dan setiap masa

kehamilan. Dahulu beberapa pendapat menyatakan infeksi tidak dapat terjadi sebelum janin

berusia 18 minggu, karena lapisan Langhans yang merupakan pertahanan janin terhadap

infeksi sebelum atrofi. Tetapi kenyataannya dengan pengamatan menggunakan mikroskop

elektron dapat ditemukan Treponema pallidum pada janin berusia 9-10 minggu.

D. METODE PEMERIKSAAN

ada dua jenis uji serologi untuk diagnosis Treponema pallidum, yaitu :

6) Uji non-treponemal, merupakan uji yang paling sering dilakukan adalah sebagai

berikut

- Uji Venereal Disease Research Laboratory (VDRL)

- Uji Rapid Plasma Reagin.

Kedua pemeriksaan ini dipakai untuk mendeteksi antobodi terhadap antigen yang

terdiri dari kardioplin, kolesterol dan lesitin yang sudah terstandarisasi.

7) Uji treponemal, terdiri dari :

- Treponema pallidum Haem Aglutination (TPHA)

- Treponema pallidum Particle Agglutination (TP-PA)

- Flouresencent Treponemal Antibody Absorption (FTA-ABS)

- Micro Hemagglutination Assay for antibodies to Treponema pallidum (MHA-TP)

- Treponemal Enzyme Immuno Assay (EIA) untuk deteksi imunoglobulin G (IgG),

imunoglobulin G dan M (IgG dan IgM) atau imunoglobulin M (IgM)

Pemeriksaan ini mendeteksi antibodi terhadap antigen treponemal dan memilki

sensitivitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan uji nontreponemal terutama sifilis

lanjut.

 Pemeriksan VDRL / RPR

Pemeriksaan Venereal Disease Research Laboratory (VDRL) / Serum atau

Cerebrospinal Fluid (RPR) merupakan satu-satunya pemeriksaan laboratorium untuk

neunurosipilis yang disetujui oleh Centers for Disease Control. Pemeriksaan VDRL serum

bisa memberikan hasil negatif palsu pada tahap late sipilis dan kurang sensitif dari RPR.

Pemeriksaan VDRL merupakan pemeriksaan penyaring atau Skrining Test, dimana apabila

VDRL positif maka akan dilanjutkan dengan pemeriksaan TPHA (Trophonema Phalidum

Heamaglutinasi). Hasil uji serologi tergantung pada stadium penyakit misalnya pada infeksi

primer hasil pemeriksaan serologi biasanya menunjukkan hasil non reaktif. Troponema

palidum dapan ditemukan pada chancre. Hasil serologi akan menunjukan positif 1-4

minggu setelah timbulnya chancre. Dan pada infeksi sekunder hasil serelogi akan selalu

pisitif dengan titer yang terus meningkat. Pasien yang terinfeksi bakteri treponema akan

membentuk antibody yang terjadi sebagai reaksi bahan-bahan yang dilepaskan karena

kerusakan sel-sel. Andibody ini disebut reagin.

a. Tujuan : Untuk mendeteksi adanya antibody nontreponema atau Reagin.

b. Metode Pemeriksaan : Slide

c. Prinsip Pemeriksaan : Adanya antibody pada serum pasien akan bereaksi dengan

antigen yang terdiri dari kardioplin, kolesterol dan lesitin yang sudah terstandarisasi

membentuk flokulasi ( gumpalan) atau aglutinasi.

d. Spesimen Pemeriksaan : Serum atau cairanotak

e. Alat dan Bahan Pemeriksaan

1. Slide pemeriksaan berlatar belakan putih

2. Mikroskop

3. Mikropipet

4. Tip kuning

5. Rotator

6. Timer

7. Batang pengaduk

f. Cara Kerja

a) Kualitatif

o Siapkan alat dan bahan yad dibutuhkan.

o Ke dalam lingkaran slide dipipet 50 ul serum.

o Tambahkan 50 ul atau 1 tetes antigen (reagen VDRL ).

o Homogenkan dengan batang pengaduk.

− Putar pada rotator kecepatan 100 rpm selama 4-8 menit.

− Amati ada tidaknya flokulasi.

b) Kuantitatif

o Siapkan alat dan bahan yang dibutuhkan.

o Lakukan pengenceran berseri pada slide dengan cara 50 ul serum + 50 ul saline

dihomogenkan kemudian hari campuran ini dipipet 50 ul dan diletakkan

pada lingkaran ke dua pada slide yang sama kemudian tambahkan 50 ul salin dan

homogenkan kembali lalu lakukan hal yang sam seperti pada lingkaran pertama

sampai lingkaran terakhir dima pada pengenceran terakhir hasil pengenceran

dibuang sebanyak 50 ul. Maka hasil pengenceran adalah 1/2 , 1/4 , 1/8, 1/16,

1/32, 1/64, 1/128.

o Kepada masing-masing pengenceran tambahkan 1 tetes ( 50 ul ) antigen VDRL (

reagen).

o Kemudian dihomogenkan dan diputar dengan rotator kecepatan 100 rpm selam

5-8 menit.

o Amati ada tidaknya flokulasi setiap pengenceran dan tentukan titer

pemeriksaannya ( yaitu pengenceran trerakhir yang masih menunjukkan

flokulasi )

g. Interpretasi Hasil

c) Kualitatif

Hasil pengamatan cukup menyebutkan non-reaktif, reaktif lemah atau reaktif

Gambar . Interpretasi hasil Pemeriksaan VDRL

Keterangan :

REAKTIF : Bila tampak gumpalan sedang atau besar

REAKTIF LEMAH: Bila tampak gumpalan kecil-kecil

NON REAKTIF : Bila tidak tampak flokulasi/gumpalan

d) Kuantitatif

Tentukan titernya (amati pngenceran trakhir yang masih menunjukkan flokulasi),

misalnya 1/64.

 Pemeriksaan TPHA

1) Tujuan : Untuk mendeteksi adanya antibody terhadap Treponema palidum dalam

serum dan plasma pasien secara kualitatif dan semi-kuantitatif

2) Metode Pemeriksaan : Hemaaglutinasi tidak langsung (indirek hemaaglutinasi)

3) Prinsip Pemeriksaan : adanya antibodi Treponema palidum akan bereaksi dengan

antigen treponemal yang menempel pada eritrosit ayam kalkun/ domba sehingga

terbentuk aglutinasi dari eritrosit-eritrosit ini .

Gambar .Prinsip Uji TPHA

4) Spesimen Pemeriksaan : Serum

5) Alat dan Bahan Pemeriksaan

1) Mikroplate tipe U

2) Mikropipet (25µL , 75µl dan 100µL)

3) Automati vibrator

4) Reagen kit TPHA (R1 : Test sel - R2 : Control sel - R3 : Diluent - R4 : Control positif

- R5 : Control negatif)

6) Cara Kerja

e) Kualitatif

a) Alat dan bahan disiapkan

b) Setiap komponen kit dan sampel dikondisikan pada suhu kamar.

c) Semua reagen dihomogenkan perlahan.

d) Diluents ditambahkan sebanyak 190 µl dan sampel ditambahkan sebanyak 10µl

pada sumur 1 lalu dihomogenkan

e) Campuran pada sumur 1 dipipet sebanyak 25 µl dan ditambahkan pada sumur 2

dan 3

f) Control sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur 2 lalu dihomogenkan.

g) Test sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur 3 lalu dihomogenkan

h) Sumur diinkubasi pada suhu ruang selama 45 – 60 menit.

i) Aglutinasi yang terjadi diamati.

j) Sampel yang menunjukan hasil aglutinasi positif dilanjutkan ke uji semi kuantitatif.

Catatan : control positif dan negatif selalu disertakan dalam setiap uji tanpa perlu

diencerkan.

f) Kuantitatif

o Alat dan bahan disiapkan.

o Setiap komponen kit dan sampel dikondisikan pada suhu kamar.

o Semua reagen dihomogenkan perlahan.

o Sumur mikrotitrasi disiapkan dan diberi label no. 1 sampai 8.

o Pengenceran sampel dibuat pada sumur yang berbeda dengan sumur mikrotitrasi

dengan mencampur 190 µl diluents dan 10 µl sampel

o Sumur mikrotitrasi no. 1 dikosongkan

o Sumur mikrotitrasi no. 2 – 8 ditambahkan 25µl diluent

o Pada sumur mikrotitrasi no. 1 dan 2 ditambahkan 25 µl sampel yang telah

diencerkan.

o Campuran pada sumur 2 dipipet 25 µl dan ditambahkan pada sumur 3, lalu

dihomogenkan. Begitu seterusnya sampai sumur 8.

o Campuran pada sumur 8 dipipet 25 µl dan dibuang

o Control sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur mikrotitrasi no. 1 lalu

dihomogenkan.

o Tes sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur mikrotitrasi no. 2-8 lalu

dihomogenkan.

o Sumur diinkubasi pada suhu ruang selama 45 – 60 menit.

o Aglutinasi yang terjadi dibaca, dan ditentukan titernya

7) Interpretasi Hasil

g) Kualitatif

Hemaglutinasi positif ditandai dengan adanya bulatan berwarna merah dipermukaan

sumur, hasil negatif terlihat seperti titik berwarna merah di tengah dasar sumur.

Derajat hemaglutinasi :

+4 : bulatan merah merata pada seluruh permukaan sumur

+3 : bulatan merah ada di sebagian besar permukaan sumur

+2 : bulatan merah yang terbentuk tidak besar dan tampak seperti cincin

+1 : bulatan merah kecil dan tampak cincin terang

+/- : tampak cincin dengan warna bulatan merah yang samar

- : Tampak titik berwarna merah didasar sumur

Gambar 5.24 Derajat Hemaglutinasi pemeriksaan TPHA

h) Kuantitatif

Titer : pengenceran tertinggi yang masih menunjukkan aglutinasi

Sumur 1 2 3 4 5 6 7 8

Titer Control

cell

1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 1/5120

Glosarium

Open Reading Frame (ORF) : bagian dari susunan DNA yang siap ditranslasikan tanpa kodon

stop, sehingga protein yang dihasilkan dalam jumlah besar (overexpression.

Nucleid Acid Test (NAT) : teknik molekuler yang dipakai untuk menyaring darah donor

dengan tujuan mengurangi infeksi yang ditularkan lewat transfusi darah pada pasien.

Colodial gold conjugate : merupakan molekul yang tersusun dari beberapa partikel koloid

emas yang bermuatan negatif dan memiliki afinitas kuat untuk beberapa protein yang

cenderung bermuatan positif, pH netral atau fisiologis.

Bab 6

PEMERIKSAAN IMUNOHEMATOLOGI

(PEMERIKSAAN PRE TRANSFUSI)

Transfusi darah merupakan ilmu tentang golongan darah manusia dalam hubungannya

dengan proses pemindahan darah / komponen-komponen darah dari donor kepada resipien.

Dalam bab ini akan dibahas tentang pemeriksaan Imunohematologi atau yang lebih dikenal

sebagai pemeriksaan pre-transfusi, diantaranya pemeriksaan golongan darah ABO & Rhesus,

Crossmatch, Coomb’s Test, skrining dan identifikasi antibodi. Tujuan pemeriksaan pre-

transfusi adalah memilih darah atau komponen darah yang kompatibel, sehingga dapat

menyelamatkan jiwa seseorang dengan tidak merusak darah pasien atau merugikan pasien.1

Selama pemeriksaan ada beberapa hal yang harus diperhatikan dalam pemeriksaan

pretransfusi, antara lain :

A. Sampel darah pasien.

Apabila pasien memerlukan transfusi darah, maka pasein harus diambil darah sekitar

5-10 mL yang dimasukkan ke dalam tabung kering untuk mendapatkan serum / plasma

yang cukup banyak sebagai bahan pemeriksaan pre-transfusi. Selain itu sampel harus

diberi pengenal yang jelas, meliputi nama pasien, tanggal lahir pasien dan nomor

registrasi/barcode pasien. Kemudian dikirim secepatnya ke laboratorium bersamaan

dengan formulir permintaan darah.

Pengambilan sampel darah pasien dengan pemberian label yang benar merupakan hal

kritis yang perlu diperhatikan. Apabila ada contoh darah pasien yang tidak memiliki

identitas yang jelas, maka harus mengambil contoh darah pasien baru untuk

mengabsahkan identitas pasien. Selain itu sampel darah pasien tidak boleh hemolisis,

karena dapat mengganggu pemeriksaan pre transfusi.

B. Formulir permintaan darah

Formulir permintaan darah harus ditandatangani oleh dokter yang merawt pasien.

Formulir permintaan darah berisikan informasi sebagai berikut :

1) Tanggal permintaan

2) Nama lengkap pasien

3) Tanggal lahir atau usia

4) Jenis kelamin

5) Nomor registrasi rumah sakit

6) Ruang rawat / bangsal

7) Alamat pasien

8) Diagnosis pasien

9) Golongan darah apabila sudah diketahui.

10) Keberadaan setiap antibodi, apabilah telah diketahui

11) Riwayat transfusi sebelumnya

12) Riwayat reaksi transfusi.

13) Jumlah dan jenia darah atau produk darah yang dibutuhkan.

14) Tanggal dan waktu dibutuhkan.

15) Tanda tangan dokter yang meminta darah.

Catatan : Lakukan konfirmasi identitas sampel darah pasien di bank darah.

C. Penyimpanan sampel darah

Sampel darah pasien dan donor harus ditutp dan disimpan dengan baikpada suhu 2-6°C

minimal 7 hari setelah transfusi, tujuannya untuk pemeriksaan ulang apabila ada laporan

terjadinya reaksi transfusi.

D. Pendataan

Setiap permintaan darah dan pemeriksaan darah harus ada pendataan yang lengkap, agar

dapat dilakukan penelusuran kembali bila dibutuhkan sewaktu-waktu.

E. Pemeriksaan pre transfusi

pemeriksaan pre-transfusi pada sampel darah donor dan pasien yang meliputi

pemeriksaan golongan darah ABO & Rhesus, Crossmatch, Coomb’s Test, skrining dan

identifikasi antibodi

Pada Bab ini mahasiswa akan melalukan praktikum Imunohematologi, untuk itu

mahasiswa diwajibkan mematuhi tata tertib Praktikum di laboratorium, sebagai berikut

:Larangan :

a) Dilarang makan, minum, dan merokok selama praktikum di laboratorium.

b) Dilarang membuang sampah ke dalam wastafel / meja kerja dan di dalam ruangan

laboratorium.

c) Dilarang membawa telepon genggam / handphone selama praktikum, kecuali memakai

cover / plastik disposible.

Kewajiban :

a) Praktikan harus menggunakan alat pelindung diri (APD) selama praktikum di

laboratorium.

b) Praktikan harus mengisi daftar hadir dan melaporkan hasil pengamatan kepada dosen /

asisten pengawas praktikum.

c) Praktikan harus melaporkan setiap kerusakan alat yang dipakai dan menggantinya

dengan spesifikasi yang sesuai.

d) Bersihkan sisa praktikum pada setiap meja / wastafel tempat Anda bekerja.

e) Peralatan yang telah selesai dipakai dikembalikan pada dosen pengawas dalam keadaan

bersih dan kering.

f) Setiap kelompok praktikum diwajibkan membawa kain lap bersih / tisu, kertas label, dan

spidol permanen.

g) Untuk persiapan sebelum praktikum dan pengawasan alat setelah praktikum, dosen

pengawas akan dibantu oleh kelompok piket yang bertugas secara bergantian setiap

minggunya.

Topik 1

Persiapan Alat, Reagensia dan Sampel

A. PERSIAPAN ALAT

Peralatan yang diperlukan untuk pemeriksaan imunohematologi / pretransfusi,

diantaranya :

1. Sentrifuse untuk pemisahan darah menggunakan tabung reaksi (table top centrifuge).

2. Sentrifuse untuk pemeriksaan golongan darah metode tabung (serological centrifuge).

3. Sentrifuse untuk pemeriksaan metode gel tes (gel test centrifuge).

4. Inkubator 37°C (waterbath atau dry incubator)

5. Inkubator 37° untuk pemeriksaan gel tes

6. Lemari es (refrigerator)

7. Tabung reaksi ukuran 12 x 7,5 mm

8. Rak tabung reaksi

9. Pipet pasteur plastik

10. Blood Grouping Plate (BGP)

11. Coomb gel tes

12. Pipet adjustable ukuran 200 – 1000 µL

13. Pipet adjustable ukuran 5 – 50 µL

14. Tissue

15. Objek glass

16. Mikrokop

17. Tips kuning

18. Tip Biru

19. Label

20. Spidol permanen

21. Kontainer / wadah penampung

22. Sarung tangan

23. Masker

24. Jas laboratorium

25. Gunting

26. Kantung plastik limbah.

B. PERSIAPAN REAGENSIA

Bahan dan Reagen yang diperlukan untuk pemeriksaan imunohematologi / pretransfusi,

diantaranya :

a. Sampel darah pasien

b. Sampel darah donor

c. Anti-A

d. Anti-B

e. Anti-D IgM

f. Anti-D IgG

g. Bovine albumin 22% dan 6%

h. Anti Human Globulin / Serum Coombs

i. Larutan saline (0,9%)

j. Aquadest

k. Larutan alseiver

l. Low Ionic Strenght Saline (LISS) : Larutan garam faali 0,2% dan larutan sukrosa 7%

m. Desinfektan (hipochlorit 0,5%)

n. Detergen

C. PERSIAPAN SAMPEL

Preparasi contoh darah harus dilakukan sebelum melakukan pemeriksaan lebih lanjut

untuk mendapatkan hasil pemeriksaan yang optimal. Ada beberapa hal yang harus

diperhatikan dalam hal ini, diantaranya :

1) Pemisahan serum / plasma dari sel darah

1) Prinsip : Darah sitrat / darah EDTA dengan pemutaran akan terjadi pemisahan

antara plasma dan sel-sel darah.

2) Tujuan : Memisahkan plasma dari sel-sel darah

3) Kegunaan :

1) Persiapan pembuatan suspensi darah

2) Persiapan penentuan antigen golongan darah

4) Cara Kerja :

-- Siapkan contoh darah dengan antikoagulan EDTA dalam tabung.

-- Sentrifugasi darah dalam tabung dengan kecepatan 3000 rpm selama 2 menit.

-- Siapkan 1 tabung yang bersih untuk menampung plasma.

-- Pisahkan plasma sebanyak-banyaknya dari sel darah merah pekat dan masukan

ke dalam tabung yang sudah disiapkan.

-- Beri identitas pada masing-masing tabung sel darah merah pekat dan plasma

Gambar 6.1 Skema pemisahan serum/plasma daeri sel darah merah

2) Pencucian sel darah merah

5) Prinsip : Dengan penambahan larutan saline (NaCl 0,9%) dan pemutaran maka

antibodi di sekitar sel darah merah akan hilang..

6) Tujuan :

1. Menghilangkan sisa protein pada sel darah merah

2. Menghilangkan sel-sel darah yang rapuh

3. Menghilangkan auto cold antibody

4. Menghilangkan formasi Rouleaux

7) Kegunaan :

1. Persiapan pembuatan suspensi darah

2. Persiapan penentuan antigen golongan darah

8) Cara Kerja :

a) Lakukan pencucian sel darah merah pekat dengan mengambil ± 8 tetes dan

masukan kedalam tabung reaksi 12 x 75 mm.

b) Tambahkan NaCl 0,9% (saline) sebanyak ± 4,5ml atau sampai ¾ tabung kedalam

sel darah merah pekat tadi.

c) Tutup tabung dengan parafilm, kocok dengan perlahan agar larutan menjadi

homogen.

d) Sentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 2 menit.

e) Buka penutup parafilm dan buang supernatan dengan menggunakan pipet

(pencucian ke 1).

f) Lakukan pencucian sebanyak 3 kali dengan mengulangi langkah ke b hingga ke e

sesuai kebutuhan.

g) Sel darah merah yang sudah dicuci merupakan suspensi 100 %.

Gambar 6.2 Skema pencucian sel darah merah

3) Pembuatan suspensi sel darah merah

Sel darah merah yang sudah dicuci kemudian dibuat suspensi yang sesuai kebutuhan,

yaitu :

Tabel 21. Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah

% Suspensi

Suspensi

SEL DARAH

MERAH

100%

Medium

(Larutan Saline)

Penggunaan

(1/20)

1 bagian a) bagian a) Pemeriksaan golongan darah (tube

test)

b) Pemeriksaan silang serasi

(crossmatching)

10%

(1/10)

1 bagian 9 bagian Pemeriksaan golongan darah ABO (slide

test/bioplate)

40%

(2/5)

1 bagian 3 bagian Pemeriksaan golongan darah rhesus

(slide test/ bioplate)

4) Untuk pembuatan Test Sel Golongan darah A,B,O untuk pemeriksaan antibodi pada serum,

dilakukan pooling dari darah donor suspensi 100% yang telah diketahui golongan darahnya :

1 Test Sel A => Dibuat dari 3 golongan darah A yang di pooling sama banyak (A1, A2, A3),

kemudian dibuat suspensi 5% dan 10% .

2 Test Sel B => Dibuat dari 3 golongan darah B yang di pooling sama banyak (B1, B2, B3),

kemudian dibuat suspensi 5% dan 10%.

3 Test Sel O => Dibuat dari 3 golongan darah O yang di pooling sama banyak (O1, O2, O3),

kemudian dibuat suspensi 5% dan 10%.

Tabel 22. Cek List Perawatan Contoh Darah

Memisahkan serum/plasma dengan sel darah merah

Contoh darah dalam tabung

↓

Putar 3000 rpm selama 2 menit

↓

Hasil → supernatan dan sedimen sel

↓

Siapkan 2 tabung beri label

↓

Pisahkan supernatan (plasma/serum) kedalam tabung

↓

Serum jernih dan sek darah merah pekat

↓

Sel darah merah pekat

Pencucian sel darah merah pekat dengan saline

Sel darah merah pekat dengan ambil ± 8 tetes

↓

Tambahkan NaCl 0,9% (saline) sebanyak ± 4,5mL atau sampai ¾ tabung

↓

Tutup tabung dengan parafilm

↓

kocok perlahan agar larutan homogeny (bolak balik tabung)

↓

Putar 3000 rpm selama 2 menit

↓

Buka penutup →buang supernatan saline (pencucian I)

↓

Lakukan pencucian sebanyak 3 kali dengan mengulangi point 2-6

↓

Hasil →sel darah merah pekat 100% yang bebas protein/globulin (WPRC)

5) PembuatanCOOMB’S CONTROL CELLS (CCC)

COOMB’S CONTROL CELLS (CCC) adalah suspensi sel darah merah golongan O Rhesus

positif yang sudah disensitasi (dicoated) oleh anti –D IgG ( inkomplit).

1. Tujuan :

a) Dapat menguji reagen Coomb’s Serum, masih valid/ invalid

b) Dapat menguji hasil negative dari pemeriksaan uji silang, Direct Coomb’s Test dan

indirect Comb’s Test, hasil negative ini valid/invalid.

2. Prinsip : Antigen + antibodi D IgG (inkomplit)→ Antigen sensitasi ( coated ) antibodi D

inkomplit

3. Metoda: Tube test

4. Pembuatan Coomb’s Control Cells :

-- Nyalakan dan atur suhu inkubator pada 37⁰C.

-- Siapkan reagensia pada suhu kamar sebelum dipakai dan disimpan kembali pada

suhu 2⁰C - 8⁰C setelah dipakai .

-- Siapkan contoh darah yang memakai antikoagulan golongan O Rhesus positif.

-- Pembuatan suspensi sel 5%, 40% dari darah golongan O Rhesus positif

-- Pemeriksaan titer anti-D IgG ( inkomplit )

a) Siapkan 10 tabung reaksi masing-masing tabung beri indentitas : ½, ¼, 1/8, 1/16,

1/32, 1/64, 1/128, 1/256, 1/512, 1/1024

b) Tabung 1 s/d 10 teteskan saline sebanyak 2 tetes.

c) Isi tabung no.1 teteskan anti-D IgG sebanyak 2 tetes.

d) Kocok perlahan dengan menggunakan pipet, ambil 2 tetes campuran masukan

kedalam tabung no.2

e) Lakukan pemindahan enceran berkala sampai tabung no.10, pada tabung no. 10

buang 2 tetes enceran anti-D tsb.

f) Kocok semua tabung hingga cairan tercampur

g) Inkubasi pada suhu 37⁰C selama 15 menit semua tabung

h) Angkat semua tabung, putar 3000rpm selama 15”, baca hasil reaksi.

i) Tabung yang hasilnya negative dicuci sebanyak 3x dengan saline

j) Pada pencucian terakhir buang supernatant sebanyak banyaknya.

k) Tambahkan 2 tetes comb’s serum (AHG).

l) Kocok perlahan hingga cairan tercampur

m) Putar 3000rpm Selama 15”, baca hasil reaksi

Tabel 23. Lembar hasil titer anti – D IgG ( inkomplit ).

Tabung

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

½ ¼ 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024

37⁰C

selama 15

menit

neg Neg Neg Neg Neg Neg Neg Neg Neg Neg

Hasil

(contoh)

4+ 4+ 3+ 3+ 2+ + + Neg Neg Neg

a) Membuat enceran anti –D IgG yang dipakai adalah dengan hasil kekuatan titer : 2. Yaitu

pada titer 32.

b) Suspensi yang dipakai adalah suspensi 40% agar tidak telalu banyak dalam

penetesan.

Tabel 24. Modifikasi Suspensi Sel Darah Merah Untuk Pembuatan CCC

Suspensi sel darah merah

( modifikasi )

Enceran anti-D IgG dengan saline

5% 32 → 1 tetes anti-D IgG + 31 saline

10 % 16 → 1 tetes anti-D IgG + 15 saline

40% f) → 1 tetes anti-D IgG + 7 saline

− Buatlah suspensi sel O Rh positif (yang sudah dicuci 1 kali) menjadi 40% dalam saline

− Buat pengenceran anti –D (IgG) dengan titer 1:7 dalam saline.

− Kedalam enceran anti –D, tambahkan suspensi sel O Rh positif 40% sebanyak 4 tetes.

− Kocok perlahan hingga tercampur, inkubasi 37⁰C selama 15 menit (coated/sensitasi).

− Putar 2 menit 3000rpm kemudian supernatant dibuang.

− Cuci selnya dengan saline sebanyak 3x .

− Endapan sel darah merah dibuat suspensi 5% → Coomb’s Control Cells (CCC) akan

diperoleh 32 tetes CCC dengan perhitungan sebagai berikut :

P1 . V1 = P 2 . V 2

40% . 4 tetes = 5% . V 2

V 2 = 32 tetes

− Jika saline yang tersisa di tabung sekitar 3 tetes, maka saline yang ditambahkan

sebanyak 29 tetes.

- VALIDASI REAGEN

Pereaksi atau sering disebut juga reagensia (inggris : reagent) adalah suatu zat

yangberperan dalam suatu reaksi kimia atau diterapkan untuk tujuan analisis. Istilah reagen

jugadipakai untuk menunjuk pada zat kimia dengan kemurnian yang cukup untuk sebuah

analisisatau percobaan. Sebelum dipakai untuk analisis, suatu reagen harus melalui proses

validasi dahulu untuk mengetahui kualitas dari reagen ini . Validasi reagen adalah suatu

tindakanyang dilakukan untuk menunjukan tingkat kevalidan atau kesahihan suatu reagen.

Validasi reagen merupakan salah satu pemantapan mutu internal. Pemantapan mutu internal

adalah kegiatan pencegahan dan pengawasan yang dilaksanakan oleh setiap laboratorium

secara terus-menerus agar diperoleh hasil pemeriksaan yang tepat.

Uji validitas reagen adalah suatu langkah pengujian yang dilakukan terhadap isi

(content)dari suatu reagen, dengan tujuan untuk mengukur ketepatan reagen yang dipakai

dalam suatu pemeriksaan. Untuk mengetahui apakah tes itu valid atau tidak harus dilakukan

melalui pengujian dari reagen itu sendiri agar hasil dari pemeriksaan dapat berlangsung

dengan baik dan benar. Dengan melakukan uji validitas reagen juga bermanfaat untuk

mengetahui kondisi reagen.

Jadi, tujuan validasi reagen adalah untuk menguji validitas suatu reagen sehingga dapat

diketahui kualitas dari reagen sebelum dipakai untuk pemeriksaan dan juga untuk

menetapkan reagen yang dipakai valid atau invalid sehingga diperoleh hasil pemeriksaan

yang akurat. Oleh karena itu, validitas reagen penting dilakukan sebelum melakukan

pemeriksaan menggunakan reagen ini .

Dalam praktikum ini, dilakukan uji validitas reagen, khususnya reagen yang dipakai

pada pemeriksaan golongan darah untuk tujuan transfusi darah. Uji kualitas reagen harus

dilakukan pada:

a) Setiap kali batch larutan kerja (working solution) dibuat.

b) Setiap minggu

c) Bila sudah mendekati masa kadaluarsa

d) Bila ditemukan/terlihat tanda tanda kerusakan ( timbul kekeruhan, perubahan warna,

timbul endapan)

e) Bila ada kecurigaan hasil pemeriksaan

Reagen yang akan divalidasi dalam praktikum ini adalah

1. antisera A,B dan D

2. test sel ABO

3. Bovine Albumin 22%

4. Comb’s Serum

5. CCC ( Comb’s Control Cell)

Sebelum memulai proses validasi, masing-masing reagen harus diperhatikan terlebih

dahulu nomor batch dan tanggal kadaluarsanya. Nomor Batch atau bets (lot) adalah

penandaan yang terdiri dari angka atau huruf atau gabungan keduanya, yang merupakan

tanda pengenal suatu bets, yang memungkinkan penelusuran kembali riwayat lengkap

pembuatan bets ini , termasuk seluruh tahap produksi, pengawasan dan distribusi.

Sedangkan tanggal kadaluarsa merupakan gambaran dari stabilitas reagen dalam

penyimpanan. Stabilitas reagen merupakan kemampuan suatu produk reagen untuk bertahan

dalam batas yang ditetapkan sepanjang periode penyimpanan dan penggunaan. Sifat

karakteristiknya sama dengan yang dimilikinya pada saat produk dibuat. Kestabilan reagen

dapat dilihat dari beberapa hal dengan suatu perubahan dalam penampilan fisik seperti

warnanya. Sedangkan dalam hal lain perubahan kimia dapat terjadi yang tidak bisa dibuktikan

sendiri dan hanya bisa dibuktikan melalui analisis kimia. Nomor batch dan tanggal kadaluarsa

masing-masing reagen dicatat pada form validasireagen. Bila tanggal kadaluarsa reagen telah

lewat, maka validasi tidak dilakukan lagi, karena dapat dipastikan reagen ini

Topik 2

Pemeriksaan Golongan Darah ABO

dan Rhesus

A. PRINSIP PEMERIKSAAN

ANTIGEN + ANTIBODI  AGLUTINASI/HOMOGEN/SENSITASI.

B. TEKNIK REVERSE & FORWARD GROUPING

1 Cell grouping/typing => memeriksa antigen sel

darah merah dengan cara menambahkan anti-A,

anti-Bdan anti-D

2 Serum grouping/typing => memeriksa antibodi

dalam serum/plasma dengan cara

mereaksikannya dengan sel golongan A,B,dan O.

3 Auto Kontrol => memeriksa antibodi dalam

serum dengan cara mereaksikannya dengan sel

darah merahnya sendiri.

C. METODE PEMERIKSAAN

Metode pemeriksaan golongan darah abo dan rhesus, antara lain :

A. Metode slide card

B. Metode bioplate

C. Metode tabung

D. Pemeriksaan WEAK D (jika hasil pemeriksaan rhesus tabung negatif)

D. PROSEDUR

1. Pemeriksaan golongan darah abo dan rhesus metode slide test

1. Tujuan :

Untuk menetapkan ada/tidaknya antigen pada sel darah merah (cell grouping).

2. Alat dan Bahan :

− Sampel Darah

− Larutan NaCl 0,85 %

− Batang pengaduk /toothpick

− Antisera-A, Antisera-B, Antisera D, Bovine Albumin 6%

− Test Sel suspensi 10% untuk golongan darah ABO dan Test Sel suspensi 40% untuk

golongan darah rhesus

− Slide test

3. Cara kerja

1. Biarkan reagensia pada suhu kamar sebelum dipakai dan simpan kembali pada

suhu 2º-8ºC setelah dipakai .

2. Siapkan contoh darah dengan antikoagulan yang akan diperiksa.

3. Lakukan perawatan contoh darah yang akan diperiksa mulai dari pemisahan

plasma dari sel darah merah (sel darah merah), pencucian hingga pembuatan

suspensi sel 10% dan 40%

4. Siapkan lembar kerja pemeriksaan golongan darah ABO dan Rhesus.

5. Siapkan slide test yang bersih dan kering, beri indentitas pada bagian atas tiap-

tiap kotak berturut-turut :

Anti-A, anti-B, anti-D

6. Isi masing-masing Kotak dengan :

1. Kotak 1 : 2 tetes anti-A + 1 tetes sel 10%

2. Kotak 2 : 2 tetes anti-B + 1 tetes sel 10%

3. Kotak 3 : 2 tetes anti-D + 1 tetes sel 40%

4. Kotak 4 : 2 tetes Bovine albumin 6% + 1 tetes sel 40%

7. Aduk rata dan melebar dengan batang pengaduk

8. Digoyang membentuk angka 8, baca reaksi

4. Pembacaan hasil

-- Bila pada pemeriksaan sel darah merah sampel terjadi :

-- Aglutinasi ada antigen pada sel darah merah

-- Negatif aglutinasi / Homogen tidak ada antigen pada sel darah merah

Aglutinasi Positif AglutinasiNegatif

-- Interpretasi Hasil :

Anti-A Anti-B

Golongan

Darah

Anti-D BA 6% Golongan Darah

Aglutinasi

Positif

Aglutinasi

Negatif

Aglutinasi

Positif

Aglutinasi

Negatif

Rh Positif (D+)

Aglutinasi

Negatif

Aglutinasi

Positif

Aglutinasi

Negatif

Aglutinasi

Negatif

Rh Negatif (D-)

Aglutinasi

Positif

Aglutinasi

Positif

Aglutinasi

Negatif

Aglutinasi

Negatif

2. Pemeriksaan golongan darah abo dan rhesus metode bioplate

1. Tujuan :

Untuk menetapkan ada/tidaknya antigen pada sel darah merah (cell grouping) dan

untuk menetapkan ada/tidaknya antibodi dalm serum/plasma (serum grouping).

2. Alat dan Bahan :

1. Sampel suspensi 10% dan 40%

2. Larutan NaCl 0,85 %

3. Tabung Reaksi

4. Antisera-A, Antisera-B, Antisera D, Bovine Albumin 6%

5. Test Sel 10% A,B dan O

6. Bioplate

7. Sentrifuge

8. Pipet Tetes

3. Cara kerja

1. Biarkan reagensia pada suhu kamar sebelum dipakai dan simpan kembali pada

suhu 2º-8ºC setelah dipakai .

2. Siapkan contoh darah dengan antikoagulan yang akan diperiksa.

3. Lakukan perawatan contoh darah yang akan diperiksa mulai dari pemisahan

plasma dari sel darah merah (sel darah merah), pencucian hingga pembuatan

suspensi sel 10% dan 40%.

4. Siapkan lembar kerja pemeriksaan golongan darah ABO dan Rhesus

5. Siapkan bioplate yang bersih dan kering, beri indentitas pada bagian atas tiap-tiap

well berturut-turut :

Anti-A, anti-B, sel A, sel B, sel O, AK (auto kontrol), Anti-D dan BA 6%

1. Isi masing-masing well dengan :

i. Well 1 : 2 tetes anti-A + 1 tetes sel 10%

ii. Well 2 : 1 tetes anti-B + 1 tetes sel 10%

iii. Well 3 : 1 tetes sel A 10% + 2 tetes serum/plasma

iv. Well 4 : 1 tetes sel B 10% + 2 tetes serum/plasma

v. Well 5 : 1 tetes sel O 10% + 2 tetes serum/plasma

vi. Well 6 : 1 tetes sel 10% + 2 tetes serum/plasma

vii. Well7 : 1 tetes sel 40% + 2 tetes anti-D

viii. Well 8: 1 tetes sel 40% + 2 tetes BA 6%

2. Campurkan isi tiap Well dengan cara menggoyangkan bioplate ke arah depan dan

belakang sambil memperhatikan reaksi yang terjadi

3. Baca hasil reaksi.

4. Pembacaan hasil

o Bila pada pemeriksaan sel darah merah specimen terjadi :

-- Aglutinasi : ada antigen pada sel darah merah

-- Homogen : tidak ada antigen pada sel darah merah

o Bila pada pemeriksaan plasma specimen terjadi :

o Aglutinasi : ada antibodi didalam plasma/serum

o Homogen : tidak ada antibodi didalam plasma/serum

o Tentukan derajat aglutinasi sesuai dengan hasil reaksi yang terjadi.

4+ : Semua sedimen bersatu, cairan jernih.

3+ : Sedimen terpecah → 3-4 segmen, cairan jernih.

2+ : Gumpalan lebih banyak dan kasar, cairan agak keruh.

1+ : Gumpalan sangat banyak dan halus, cairan keruh tampak

berwarna kemerah-merahan.

± : Sepintas masih terlihat seperti gumpalan halus

dengan cairan keruh. Aglutinasi jelas → mikroskopis

neg : tidak ada aglutinasi / homogen

o Interpretasi Hasil

Anti –

Well 1

Anti –B

Well 2

Test

Sel A

Well

Test

Sel B

Well

Test

Sel O

Well 5

Well 6

Golongan

Darah

Anti-

Golongan

Darah

Neg Neg + + Neg Neg O

+ Neg

Rh Positif

(D+) + Neg Neg + Neg Neg A

Neg + + Neg Neg Neg B

Neg Neg

Rh Negatif

(D-) + + Neg Neg Neg Neg AB

Keterangan : (+) = Positif/terjadi penggumpalan/aglutinasi

(Neg) = Negatif/tidak terjadi penggumpalan/homogen

3. Pemeriksaan golongan darah abo dan rhesus metode tabung (tube test)

1. Tujuan :

Untuk menetapkan ada/tidaknya antigen pada sel darah merah (cell grouping) dan

untuk menetapkan ada/tidaknya antibodi dalm serum/plasma (serum grouping).

2. Alat dan Bahan :

1. Sampel suspensi 5%

2. Test sel 5% A,B,O

3. Antisera A , Antisera B

4. Larutan NaCl 0,85 %

5. Tabung Serologi

6. Mikroskop

7. Tabung Sentrifuge

8. Pipet Tetes

9. Rak Tabung

10. Sentrifuge

3. Cara Kerja :

1. Biarkan reagensia pada suhu kamar sebelum dipakai dan simpan kembali pada suhu

2º-8ºC setelah dipakai .

2. Siapkan contoh darah dengan antikoagulan yang akan diperiksa.

3. Lakukan perawatan contoh darah yang akan diperiksa mulai dari pemisahan plasma

dari sdm (sel darah merah), pencucian hingga pembuatan suspensi sel 5%.

4. Siapkan lembar kerja pemeriksaan golongan darah ABO.

5. Siapkan 6 (enam) buah tabung serologi untuk masing-masing mahasiswa/ kelompok

yang sudah ditandai.

6. Isi masing-masing tabung dengan :

a. Tabung 1 : 2 tetes anti-A + 1 tetes sel 5%

b. Tabung 2 : 2 tetes anti-B + 1 tetes sel 5%

c. Tabung 3 : 1 tetes sel A 5% + 2 tetes serum/plasma

d. Tabung 4 : 1 tetes sel B 5% + 2 tetes serum/plasma

e. Tabung 5 : 1 tetes sel O 5% + 2 tetes serum/plasma

f. Tabung 6 : 1 tetes sel 5% + 2 tetes serum/plasma

g. Tabung 7 : 1 tetes sel 5% + 2 tetes anti-D

h. Tabung 8 : 1 tetes sel 5% + 2 tetes BA 6%

7. Kocok perlahan agar homogen.

8. Sentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 detik.

9. Goyangkan tabung dengan perlahan dan perhatikan adanya aglutinasi secara

makroskopis bila diperlukan dengan menggunakan mikroskop (perbesaran

objektif 10 x).

4. Pembacaan hasil

 Perhatikan supernatan semua tabung, apakah ada hemolise atau tidak.

 Bacalah satu persatu hasil reaksinya dengan mengoyang perlahan tabung dan

memutarnya kita perhatikan sedimennya :

-- Ciri-ciri positif : Sedimen bersatu dan tepinya tidak merata

-- Ciri-ciri negatif : Sedimen selnya padat dan tepinya bulat + rata

 Dinyatakan negatif bila sedimen tersuspensi kembali dengan mudah

(homogen).

 Dinyatakan positif bila sedimen tidak mudah tersuspensi kembali

(bergumpal-gumpal).

o Tentukan derajat aglutinasi sesuai dengan hasil reaksi yang terjadi.

4+ : Semua sedimen bersatu, cairan jernih.

3+ : Sedimen terpecah → 3-4 segmen, cairan jernih.

2+ : Gumpalan lebih banyak dan kasar, cairan agak keruh.

1+ : Gumpalan sangat banyak dan halus, cairan keruh tampak

berwarna kemerah-merahan.

± : Sepintas masih terlihat seperti gumpalan halus

dengan cairan keruh. Aglutinasi jelas → mikroskopis

neg : tidak ada aglutinasi / homogen

o Interpretasi Hasil

Anti –

Well 1

Anti –B

Well 2

Test

Sel A

Well

Test

Sel B

Well

Test

Sel O

Well 5

Well 6

Golongan

Darah

Anti-

Golongan

Darah

Neg Neg + + Neg Neg O

+ Neg

Rh Positif

(D+) + Neg Neg + Neg Neg A

Neg + + Neg Neg Neg B

Neg Neg

Rh Negatif

(D-) + + Neg Neg Neg Neg AB

Keterangan : (+) = Positif/terjadi penggumpalan/aglutinasi

(Neg) = Negatif/tidak terjadi penggumpalan/homogen

*Catatan : Apabila pada metode tabung hasil pengamatan menunjukkan Rh negatif,

maka harus dilanjutkan ke pemeriksaan Weak D (Du)

Keuntungan Metode Tabung (Tube)Rekomendasi pemeriksaan golongan darah di

Laboratorium karena Aglutinasi lemah dapat dibaca (karena lebih sensitif).

4. Pemeriksaan golongan darah rhesus WEAK D (DU)

a. Dasar Teori :

Rhesus adalah suatu faktor yang ada pada sel darah merah, ditemukan

pertama kali oleh Landsteiner dan Wiener pada tahun 1940 melalui injeksi darah merah

kera Macaccus rhesus ke tubuh kelinci.

Landsteiner dan Wiener menerangkan bahwa bila sel darah merah (eritrosit)

seseorang memiliki Rhesus antigen (antigen D atau Rh), maka orang ini

dinyatakan sebagai Rhesus – positive. Bila ia tidak memiliki Rhesus antigen (antigen D

atau Rh0) dinyatakan Rhesus – negative.

b. Prinsip :

Antigen + Antibodi → Aglutinasi /sensitasi/hemolisis.

c. Tujuan :

Untuk menemukan adanya antigen (antigen D atau Rh) di dalam sel darah merah

(eritrosit).

d. Alat dan Bahan :

-- Sampel suspensi 5%

-- Larutan NaCl 0,85 %

-- Bovine Albumin 6 %

-- Anti-Rh serum (Anti D Monoclonal/Duoclonal, IgM/IgG)

-- Sentrifuge

-- Pipet Tetes

-- Tabung Reaksi

-- Rak Tabung

-- Mikroskop

-- Sentrifuge

-- Waterbath

a. Cara Kerja :

1. Biarkan reagensia pada suhu kamar sebelum dipakai dan simpan kembali pada

suhu 2º-8ºC setelah dipakai .

2. Siapkan contoh darah dengan antikoagulan yang akan diperiksa.

3. Lakukan perawatan contoh darah yang akan diperiksa mulai dari pemisahan plasma

dari sdm (sel darah merah), pencucian hingga pembuatan suspensi sel 5%.

4. Siapkan 2 tabung beri label : Tab I, Tab II

5. Masing-masing tabung teteskan 1 tetes supensi 5% ery X

6. Tab I tambahkan 2 tetes anti D IgG.

7. Tab II tambahkan 2 tetes Bovine Albumin 6%

8. Kocok perlahan kedua tabung hingga tercampur rata

9. Putar 3000 rpm selama 15 detik

10. Baca reaksi → makrokopis, bila hasil negative

11. Cuci kedua tabung 3 kali dengan saline

12. Buang supernatant terakhir sampai bersih

13. Tambahkan masing-masing 2 tetes coomb’s serum

14. Kocok perlahan kedua tabung hingga tercampur rata

15. Putar 3000 rpm selama 15 detik.

16. Baca reaksi makroskopis dan mikrokopis → catat hasil

e. Pembacaan hasil

1. tidak ada aglutinasi : tidak ada antigen D pada sel darah merah

2. Ada aglutinasi : ada antigen D pada sel darah merah

3. Kesimpulan apabila Dunegatif maka golongan darah Rhesus negatif, apabila

Dupositif pada pasien disimpulkan golongan darah Rh negatif dan Dupositif pada

darah donor disimpulkan golongan darah Rh positif.

4. Hasil tes Dunegatif, harus di validasi dengan di teteskan 1 tetes sel uji coombs

(Coombs Control Cells = CCC) ke tabung 1 dan tabung 2. Kemudian putar 3000 rpm

15 detik atau 1000 rpm 1 menit.Hasil pengamatan menunjukkan :

-- Hasil positif menunjukan bahwa pemeriksaan benar dan berlaku.

-- Hasil negatif menunjukan bahwa pemeriksaan tidak benar, tidak berlaku dan

harus di ulang.

Topik 3

Pemeriksaan Uji Silang Serasi (Crossmatch)

Pemeriksaan reaksi silang (Cross Match) diperlukan sebelum melakukan transfusi darah

untuk melihat apakah darah pasien / resipien sesuai dengan darah donor. Pemeriksaan Cross

Match ini sangat perlu untuk mencegah reaksi transfuse dengan memastikan penderita tidak

mengandung antibody yang reaktif terhadap antigen pada sel darah merah donor dan

bermanfaat bagi pasien.

Pada reaksi silang mayor (Mayor Cross Match) adalah memeriksa ketidakcocokan oleh

karena adanya antibody dalam serum pasien terhadap antigen sel darah merah donor.

Pada uji silang serasi minor (Minor Cross Match) adalah untuk memastikan

ketidakcocokan oleh karena adanya antibody dalam serum donor terhadap antigen sel darah

merah pasien.

Pada pemeriksaan auto adalah mereaksikan antara sel darah merah pasien dengan

serumnya untuk mengetahui apakah ada autoantibodi atau tidak untuk melihat reaksi

autoimun.

Uji silang serasi dilakukan dalam fase dan medium yang berbeda karena jenis antibody

golongan darah memiliki karakter yang berbeda.

a. Fase I : fase suhu kamar (20⁰C – 25⁰C) dalam medium saline, mendeteksi antibody

komplet yang bersifat IgM (cold antibody)

b. Fase II : fase inkubasi pada suhu 37⁰C dalam medium bovine albumin, pada fase ini

antibody inkomplet dapat mengikat sel darah merah

c. Fase III : fase antiglobulin test, semua antibody inkomplet yang telah diikat pada sel

darah merah (pada fase II) akan beraglutinasi (positif) dengan baik setelah penambahan

Coombs serum.

Untuk validasi hasil pemeriksaan maka sample ini setelah fase 3 direaksikan

dengan Coombs Control Cell (CCC) bila hasilnya di fase III negatif maka ditambah dengan CCC

hasilnya positif.

B. PRINSIP

Antigen + Antibodi → Aglutinasi / hemolisis/ sensitasi.

C. TUJUAN

Untuk mengetahui apakah sel darah merah donor bisa hidup didalam tubuh pasien dan

untuk mengetahui ada tidaknya antibody komplet (tipe IgM) maupun antibody inkomplet

(tipe IgG) dalam serum pasien (mayor) maupun dalam serum donor yang melawan sel pasien

(minor).

D. ALAT DAN BAHAN

1. Tabung Serologi

2. Pipet Tetes

3. Waterbath (suhu 370C)

4. Sentrifuge

5. Kaca Objek

6. Mikroskop

7. Salin (NaCl 0,9 %)

8. Bovine Albumin 22 %

9. Serum Coombs (Anti Human Globulin)

10. Sel Uji Coombs (Control Cell Coombs)

11. Contoh Darah Pasien dan Contoh Darah Donor

E. PERSIAPAN KERJA

1. Nyalakan dan atur suhu incubator/waterbath pada 37⁰C

2. Biarkan reagensia pada suhu kamar sebelum dipakai dan disimpen kembali

pada suhu 2-8⁰C setelah dipakai .

3. Siapkan contoh darah dengan antikoagulan yang akan diperiksa.

4. Lakukan perawatan contoh darah yang akan diperiksa mulai dari pemisahan

plasma dari sdm, pencucian hingga pembuatan suspensi sel.

5. Siapkan ceklist dan lembar kerja pemeriksaan uji silang serasi.

6. Catat tanggal penerimaan sampel, indentitas sampel, tanggal pemeriksaan.

F. PROSEDUR KERJA

1) Ambil 3 buah tabung reaksi 12x75mm beri indentitas tabung ini : mayor,

minor dan AK (auto control).

2) Masukan kedalam masing-masing tabung

1. Mayor : 2 tetes plasma pasien + 1 tetes sdm donor susp 5%

2. Minor : 2 tetes plasma donor + 1 tetes sdm pasien susp 5%

3. Auto control : 2 tetes plasma pasien + 1 tetes sdm pasien susp 5%

3) Kocok perlahan semua tabung hingga homogen, sentrifugasi 3000rpm selama 15

detik.

4) Baca reaksinya terhadap hemolysis dan atau aglutinasi secara makroskopis.

5) Hasil fase I :

-- Hemolysis : Negatif → lanjutkan fase II

-- aglutinasi : Negatif → lanjutkan fase II

-- Hemolysis : positif → tidak cocok ( Inkompatibel )

-- aglutinasi : positif → tidak cocok ( Inkompatibel )

6) Tambahkan ke dalam masing-masing tabung 2 tetes bovine albumin 22%

7) Kocok perlahan hingga homogen

8) Inkubasi pada suhu 37⁰C selama 15 menit.

9) Sentrifugasi tabung dengan kecepatan 3000rpm selama 15 detik.

10) Baca reaksi terhadap hemolysis dana atau aglutinasi secara makroskopis.

11) Hasil fase II :

o Hemolysis : Negatif → lanjutkan fase II

o aglutinasi : Negatif → lanjutkan fase II

o Hemolysis : positif → tidak cocok ( Inkompatibel )

o aglutinasi : positif → tidak cocok ( Inkompatibel )

12) Masing – masing tabung Mayor, Minor dan Auto control dicuci dengan saline

sebanyak 3x.

13) Pada pencucian terakhir, buang supernatant sebersih bersihnya.

14) Tambahkan masing-masing tabung dengan anti human globulin (Coombs serum)

sebanyak 2 tetes.

15) Kocok perlahan isi tabung hingga homogen, sentrifugasi 3000rpm selama 15 detik.

16) Baca reaksi terhadap hemolysis dana atau aglutinasi secara makroskopis dan

mikroskopis.

17) Hasil fase III :

1. Hemolisis : Negatif → cocok ( kompatibel )

2. Aglutinasi : Negatif → cocok ( kompatibel )

3. Hemolisis : positif → tidak cocok ( Inkompatibel )

4. Aglutinasi : positif → tidak cocok ( Inkompatibel )

18) Hasil uji silang serasi yang negative harus divalidasi terlebih dahulu dengan CCC.

Kepada masing-masing tabung tambahkan 2 tetes CCC, sentrifugasi 3000 rpm selama

15 detik.

Catatan : hasil validasi dengan CCC harus memberikan reaksi 2+, jika hasil negatif

maka pemeriksaan uji silang serasi harus diulang (tidak valid).

19) Kesimpulan apabila hasil uji silang serasi kompatibel berarti darah donor bisa

ditransfusikan ke pasien dan apabila hasil uji silang serasi inkompatibel darah donor

tidak bisa di transfusikan ke pasien.

Topik 4

Pemeriksaan Coomb’s Test

Percobaan Coombs mencari adanya antiglobulin. Jika semacam antibodi melekat pada

eritrosit yang mengandung antigen, maka antibodi yang spesifik terhadap antigen itu mungkin

memicu eritrosit-eritrosit bergumpal (aglutinasi). Globulin merupakan antibodi

penghalang (blocking antibodies) atau antibodi tak lengkap (incomplete antibodies). Pada

konsentrasi tinggi antibodi ini melapisi eritrosit tetapi tidak dapat mengaglutinasikannya

dalam larutan salin.

Anti human globulin akan bereaksi dengan setiap globulin manusia. sebab itu penting

bahwa semua globulin bebas harus dibuang dari sel darah merah dengan pencucian yang

bersih sebelum penambahan anti human globulin. Sisa globulin serum dalam larutan akan

bergabung dengan anti human globulin mengakibatkan anti human globulin tidak mampu lagi

mengaglutinasi sel yang telah disensitisasi, dan memicu suatu tes Coombs negatif yang

salah (false negative).

Tes Coombs langsung (Direct Coombs Test / DCT) dipakai untuk mendeteksi antibodi

atau komplemen pada permukaan sel darah merah dimana sensitisasi telah terjadi secara

invivo. Reagen anti human globulin ditambahkan pada sel darah merah yang telah dicuci dan

aglutinasi menunjukkan tes positif.

Tes Coombs tidak langsung (Indirect Coombs Test / ICT) dipakai untuk mencari

adanya antibodi irregular (inkomplit) dalam serum. Terlebih dahulu dilakukan pelapisan

eritrosit-eritrosit normal bergolongan O (atau eritrosit-eritrosit yang golongannya sesuai

dengan serum yang diperiksa) dengan serum yang diketahui atau tersangka mengandung

antibodi penghalang. Langkah berikutnya ialah membuktikan adanya antibodi ini

dengan menggunakan Serum Coombs.

A) TES COOMBS LANGSUNG (DIRECT COOMBS TEST)

-- Prinsip :

Antigen + Antibodi Inkomplit (pada eritrosit pasien) + Serum Coombs serum →

Aglutinasi (+).

-- Tujuan :

Untuk mendeteksi antibodi yang coated (melekat / menyelimuti) pada eritrosit pasien

dan terjadi secara invivo (di dalam tubuh).

-- Alat dan Bahan :

a. Tabung Serologi

b. Pipet Tetes

c. Sentrifuge

d. Kaca Objek

e. Mikroskop

f. Medium Salin (NaCl 0,9 %)

g. Serum Coombs (Anti Human Globulin)

h. Contoh Darah Pasien

-- Cara Kerja :

a. Siapkan suspensi eritrosit 5 % dalam salin dari contoh darah pasien.

b. Sediakan 2 buah tabung, isi masing-masing tabung dengan 1 tetes suspensi eritrosit

5 % (pasien).

c. Lakukan pencucian dengan salin sebanyak 3 kali.

d. Pada tabung I (tes) tambahkan 2 tetes Serum Coombs, pada tabung II (kontrol)

tambahkan 2 tetes salin. Kemudian sentrifuge dengan kecepatan 3000 rpm selama

15 detik.

e. Baca secara makroskopis dan mikroskopis.

-- Interpretasi :

-- Direct Coombs Test (DCT) positif (+), artinya ada sel coated secara invivo pada

eritrosit pasien. Biasanya terjadi pada penderita AIHA (Auto-Immune Haemolytic

Anemia), HDN (Haemolytic Disease of Newborn), dan orang yang mendapat

transfusi darah dengan Rhesus yang berbeda.

-- Direct Coombs Test (DCT) negatif (-), artinya tidak ada sel coated secara

invivo.

*Catatan :

Bila Direct Coombs Test (DCT) pasien positif, maka darah boleh diberikan tetapi dalam

bentuk Packed Red Cell (PRC) atau Washed Red Cell (WRC).

B) TES COOMBS TIDAK LANGSUNG (INDIRECT COOMBS TEST)

-- Prinsip :

Antigen + Antibodi Inkomplit (pada serum donor / pasien) + Serum Coombs → Aglutinasi

(+).

-- Tujuan :

Untuk mendeteksi antibodi yang coated (melekat / menyelimuti) pada eritrosit dan

terjadi secara invitro (di luar tubuh).

-- Alat dan Bahan :

-- Tabung Serologi

-- Pipet Tetes

-- Sentrifuge

-- Kaca Objek

-- Mikroskop

-- Larutan Salin (NaCl 0,85 % - 0,9 %)

-- Serum Coombs (Anti Human Globulin)

-- Contoh Darah

o Cara Kerja :

− Siapkan serum dari contoh darah yang akan di periksa.

− Siapkan pula suspensi eritrosit 5 % dalam salin dari contoh darah dan suspensi sel

darah O.

− Siapkan 2 tabung, isi masing masing tabung 2 tetes plasma/serum.

− Tabung I teteskan 1 tetes susp sel O, tabung II suspensi sampel.

− Putar 3000 rpm selama 15 detik baca reaksi.

− Apabila negatif lanjutkan, tambahkan bovine albumin 22% sebanyak 2 tetes ke

masing-masing tabung.

− Inkubasi pada suhu 37⁰C selama 15 menit.

− Putar 3000 rpm selama 15 detik baca reaksi.

− Bila negative lakuakan pencucian dengan saline 3x.

− Tambahkan ke masing-masing tabung 2 tetes AHG.

− Putar 3000 rpm selama 15 detik baca reaksi secara makroskpis dan mikroskopis.

− Bila negatif, validasi dengan CCC.

-- Interprestasi hasil :

1. Apabila hasil ICT positif : adanya antibody yang coated pada sel darah merah

secara invitro.

2. Apabila hasil ICT negatif : tidak adanya antibody yang coated pada sel darah

merah secara invitro.

Topik 5

Pemeriksaan Skrining

dan Identifikasi Antibodi

Pada beberapa penyakit, seperti thalasemia, anemia sickle cell, aplastik anemia,

haemoglobinophaties, transfusi sel darah merah merupakan pengobatan utama, oleh karena

itu transfusi darah untuk pasien ini sering dilakukan pada pasien yang mendapatkan darah

transfusi berulang, kemungkinan timbulnya alloantibodi sangat besar. Hal ini disebabkan

karena antigen sel darah merah donor memicu timbulnya antibodi pada darah pasien.

Sampai saai ini diketahui ada 270 antigen permukaan sel darah merah, tetapi hanya 26

sistem penggolongan darah yang dapat menimbulkan reaksi tranfusi. Berikut ini adalah sistem

penggolongan darah yang dapat menimbulkan alloantibodi pada pasien multiple transfusi.

Tabel 6.7 Sistem Penggolongan Darah Dan Antibodi Yang Ditimbulkan

Adanya alloantibodi pada pasien memicu susahnya mendapatkan darah yang

kompatibel atau cocok pada pemeriksaan pre-transfusi antara darah pasien dan darah donor,

sehingga memicu inkompatibilitas.Selain itu juga dapat memicu reaksi transfusi

hemolitik yang lambat, yang seringkali dikaitkan dengan keterlambatan dan kesulitan untuk

memperoleh unit sel darah merah yang kompatibel.

Pemeriksaan skrining dan identifikasi antibodi bertujuan untuk mengetahui ada-

tidaknya antibodi di dalam plasma yang diperiksa (pasien/donor), baik yang alamiah

maupunimun. Plasma pasien ataupun donor yang akan diperiksa direaksikan dengan sel darah

merah golongan O yang telah diketahui antigen permukaannya atau susunan antigen

golongan darahnya yang disebut sel panel.

Tabel 6.8 Sifat Antibodi

Tujuan pemeriksaan skrining antibodiadalah untuk mengetahui ada tidaknya antibodi

irreguler, bila hasil positif dilanjutkan ke identifikasi antibodi untuk mengetahui spesifikasi

antibodi. Pemeriksaan ini direaksikan menggunakan sel panel, yang terbagi menjadi

dua, yaitu : sel panel kecil untuk skrining antibodi dan sel panel besaruntuk identifikasi

antibodi.

2. SKRINING ANTIBODI

Untuk skrining antibodi pada darah donor / pasien dipakai reagensia yaitu sel panel

kecil. Sel panel kecil adalah sekelompok sel darah merah yang terdiri dari 2-3 pasien

golongan darah O yang sudah diketahui antigen permukaaanya (memiliki/tidak antigen

golongan darah). Jenis antigen dapat dilihat dalam tabel antigram dengan tanda sebagai

berikut : (+) artinya memiliki antigen dan (- / 0) berarti tidak memiliki antigen.

Sel panel kecil harus memiliki susunan antigen homozygot seperti : C, M, Jka, sehingga

antibodi dipengaruhi oleh dosis antigen (dosage effect) agar dapat teridentifikasi.

Gambar Sel Panel Kecil

Tabel 6.9.Antigen Permukaan Pada Sel Panel Kecil

A. PRINSIP

Serum / plasma pasien direaksikan denagn sel panel kecil yang terdiri dari 2 sampai 3

reagen sel golongan darah oyang tealh diketahui antigen permukaannya.

B. CARA KERJA

1. Mereaksikan serum/plasma (donor dan pasien) yang diperiksa dengan sel panel kecil

dalam medium saline pada suhu 20C, 37C dan AHG.

2. Hasil pemeriksaan diinterprestasikan dengan melihat pola (gambar reaksi) dari sel

panel dalam antigram.

C. INTERPRETASI HASIL

1) Positif (+) => ada antibodi antibodi dalam serum / plasma

2) Negatif (-/ 0) => tidak ada antibodi dalam serum / plasma

Gambar Tabel Identifikasi Sel Panel Besar

3. IDENTIFIKASI ANTIBODI

Pemeriksaan identifikasi antibodi pada plasma / serum pasien maupun donor

menggunakan reagensia yaitu sel panel besar. Sel panel besar merukapan sekelompok sel

darah merah yang terdiri atas 8-11 pasien golongan darah O yang diketahui susunan antigen

permukaannya (dapat dilihat pada tabel), sehingga perbedaan antigen satu dengan lainnya

lebih jelas. Antigen make up minimal harus mengandung antigen : D, C, c, E, e,M, N, S, s,P1,

LUA, LUB, K, K, LEA, LEB, FYA, FYB,JKA DAN JKB. SELAIN ITU JUGA beberapa antigen harus

homozygot seperti D, C, C, E, S, M, LUB, K, FYA. Pada sel panel komersial persyaratan ini sudah

terpenuhi, sehingga dapat langsung diguunakan untuk identifikasi antibodi pada plasma /

serum pasien maupun donor.

Gambar Sel Panel Besar

Gambar Tabel Identifikasi Sel Panel Besar

− PRINSIP

Serum / plasma pasien direaksikan dengan sel panel besar yang terdiri dari 8 sampai 11

reagen sel golongan darah O yang telah diketahui antigen permukaannya.

− CARA KERJA

1. Mereaksikan serum/plasma (donor dan pasien) yang diperiksa dengan sel panel besar

dalam medium saline pada suhu 20C, 37C dan AHG.

2. Hasil pemeriksaan diinterprestasikan dengan melihat pola (gambar reaksi) dari sel

panel dalam antigram.

− INTERPRETASI HASIL

1) Positif (+) => ada antibodi antibodi dalam serum / plasma

2) Negatif (-/ 0) => tidak ada antibodi dalam serum / plasma

Tabel 27. Antigram Sel Panel Besar

Glosarium

AIHA (Auto-Immune Haemolytic Anemia) : anemia yang disebabkan oleh penghancuran

eritrosit oleh autoantibodi (antibodi yang diproduksi oleh tubuh untuk menghancurkan

eritrositnya sendiri)

HDN (Haemolytic Disease of Newborn) : penyakit hemolitik pada bayi baru lahir yang

disebabkan lisisnya sel darah merah pada janin atau bayi baru lahir akibat antibodi dari ibu

yang melewati plasenta.

Invitro : metode percobaan yang menggunakan jaringan atau medium diluar organisme hidup,

seperti menggunakan tabung reaksi atau cawan petri.

Invivo : metode percobaan yang menggunakan jaringan organisme hidup atau organisme itu

sendiri.

bank darah 5

ARTICLE

POPULAR

TRANSLATE

Privacy Policy for sakitx.blogspot.com

Log Files

Google DoubleClick DART Cookie

Our Advertising Partners

Privacy Policies

Third Party Privacy Policies

Children's Information

Online Privacy Policy Only

Consent

Terms and Conditions

Cookies

License

Hyperlinking to our Content

iFrames

Content Liability

Reservation of Rights

Removal of links from our website

Disclaimer

viewer

Penulis

SEARCH

archive

bank darah 5

Related Posts:

Social Profiles

ARTICLE

POPULAR

TRANSLATE

Privacy Policy for sakitx.blogspot.com

Log Files

Google DoubleClick DART Cookie

Our Advertising Partners

Privacy Policies

Third Party Privacy Policies

Children's Information

Online Privacy Policy Only

Consent

Terms and Conditions

Cookies

License

Hyperlinking to our Content

iFrames

Content Liability

Reservation of Rights

Removal of links from our website

Disclaimer

viewer

Penulis

SEARCH

archive