bank darah 3

 

penanda harus dihilangkan agar tidak dipakai untuk penggunaan klinis atau manufaktur. 

7) Semua unit reaktif harus ditandai jelas (dilabel) dan dihilangkan dari stok karantina dan 

disimpan secara terpisah dengan aman sampai unit dibuang atau disimpan untuk tujuan 

jaminan kualitas atau penelitian sesuai dengan kebijakan nasional. 

Pengujian konfirmasi darah yang reaktif harus dilakukan untuk pemberitahuan donor, 

konseling dan rujukan untuk pengobatan, penangguhan atau recall untuk sumbangan masa 

depan, dan melihat kembali donasi.  

Alat tes yang paling umum dipakai  dirancang untuk mendeteksi antibodi, antigen 

atau asam nukleat dari agen infeksi. Namun, tidak semua tes cocok dalam segala situasi dan 

setiap pemeriksaan memiliki keterbatasan yang perlu dipahami dan dipertimbangkan ketika 

memilih pemeriksaan ini . 

Jenis utama dari uji yang dipakai  untuk skrining darah adalah: 

1) Immunoassays (IAS): 

- Enzim immunoassay (EIAs) 

- Chemiluminescent immunoassays (CLIAs) 

- Hemaglutinasi (HA) / Tes partikel aglutinasi (PA)  

- Tes cepat / sederhana sekali pakai (Rapid Test) 

2) Tes teknologi amplifikasi asam nukleat (NAT). 

   

  

 

Dalam konteks skrining darah, evaluasi yang tepat diperlukan dalam memilih jenis tes 

untuk setiap infeksi menular lewat transfusi darah, berdasarkan pentingnya karakteristik 

pemeriksaan, seperti sensitivitas dan spesifisitas, serta biaya dan kemudahan penggunaan. 

--  Immunoassays (IAS) 

Immunoassays adalah sistem uji yang tersedia dalam beberapa format yang dapat 

dipakai  untuk mendeteksi antibodi, antigen atau kombinasi dari keduanya. Umumnya, tes 

yang paling sederhana untuk deteksi antibodi didasarkan pada penggunaan antigen amobil 

(fase diam) yang menangkap setiap antibodi spesifik yang ada dalam sampel uji (IA tidak 

langsung/indirect). Umumnya tes deteksi antigen dipakai  didasarkan pada penggunaan 

antibodi bergerak ke menangkap antigen patogen spesifik hadir dalam sampel. 

Immunoassays dapat dipakai  dalam situasi yang berbeda dari laboratorium dengan 

otomatisasi penuh  atau untuk laboratorium menengah dengan semi-otomasi, dan juga 

laboratorium kecil, seperti di daerah-daerah terpencil yang melakukan sejumlah tes secara 

manual. 

2.3.2 Enzim immunoassay (EIAs) dan Immunoassays Chemiluminescent (CLIAs) 

Enzim immunoassay (EIAs) dan Immunoassays Chemiluminescent (CLIAs) adalah tes 

yang paling umum dipakai  untuk skrining IMLTD darah donor . Desain EIAs dan CLIAs mirip 

dan mereka hanya berbeda dalam cara deteksi kompleks imun dalam pembentukan 

kompleks warna dalam EIAs  dan pengukuran cahaya yang dihasilkan oleh reaksi bahan kimia 

di CLIAs. Salah satu jenis dari pemeriksaan imunoserologi (Immunoassay/IA) dengan 

sensitivitas tinggi, pada biasanya  diperlukan mendeteksi penanda target infeksi dan harus  

dievaluasi dengan benar untuk skrining darah serta menjaga kualitas mutu hasil pemeriksaan. 

EIAs dan CLIAs cocok untuk jumlah besar sampel dan membutuhkan berbagai peralatan 

khusus. Tes ini dapat dilakukan baik non manual atau sistem pengolahan uji otomatis (sistem 

terbuka) dan sistem otomatis (sistem tertutup). EIAs dan CLIAs memiliki fase padat yang 

berbeda untuk menangkap  antigen atau antibodi. Paling umum, fase padat yang dipakai  

adalah: 

1) Dasar dan sisi dari microwell polystyrene 

2) Permukaan polystyrene atau bahan lainnya 

3) Micro-partikel 

4) Permukaan perangkat pakai tertentu yang dipakai  dalam sistem otomatis biasanya 

polystyrene 

5) Strips dari nilon atau membran nitro-selulosa, khusus dipakai  di Western Blot dan line 

assay. 

Gambar Prinsip Kerja CLIA 

 

Pada gambar  prinsip kerja CLIA  ke dalam well dimasukkan antibodi yang dicoated 

dengan partikel magnetic, kemudian ditambahkan sampel yang mengandung target antigen 

dan ditambahkan juga antibodi yang dilabel ALP. Inkubasi untuk terjadi reaksi imulogi. 

Kemudian dipisahkan komponen yang tidak dibutuhkan dengan teknologi magnetisasi dan 

kemudian ditambahkan substrat akridium ester yang mengakibatkan reaksi enzimatis dan 

kemudian pendaran di deteksi dengan luminometer dengan panjang gelombang 461 nm.  

 

Gambar. Prinsip Kerja ELISA/EIA 

menunjukkan ke dalam well dilekatkan (coated) antibodi spesifik, kemudian 

ditambahkan sampel yang mengandung target antigen dan dilakukan pencucian untuk 

menghilangkan analit yang tidak bereaksi. Ditambahkan juga antibodi kedua yang dilabel 

enzim dan kemudian ditambahkan substrat dan stop solution, maka akan terjadi perubahan 

   

  

 

warna. Perubahan warna yang terbentuk diukur dengan fotometer dengan panjang 

gelombang tertentu. Hasil reaktif jika nilai absorban > dari nilai cut off. 

Berikut ini adalah perbedaan EIA dan CLIA berdasarkan tabel 18 di bawah ini. 

Tabel  17. Perbedaan EIA dan CLIA 

Perbedaan  EIA CLIA 

Pembawa 

antigen/antibodi 

Berupa permukaan well Mikropartikel 

Substrat yang dipakai  Enzim (TMB) Zat kimia (akridium ester) 

Reaksi Tergantung suhu dan pH stabil 

Deteksi hasil reaksi fotometer luminometer 

Target molekul yang 

ditangkap 

Lebih sedikit sesuai 

permukaan well 

Lebih banyak, permukaan 

pembawa antibodi/antigen 

lebih luas dan berbentuk bulat  

Sumber cahaya Panjang gelombang 

tertentu 

stabil 

 

2.3.3 Tes aglutinasi partikel  

Tes aglutinasi partikel mendeteksi keberadaan antibodi spesifik atau antigen di sampel 

uji melalui aglutinasi partikel dilapisi dengan komplemen antigen tertentu atau antibodi 

masing-masing. Tes aglutinasi, terutama tes antibodi menggunakan berbagai partikel 

termasuk sel darah merah (haemagglutination) dan partikel inert seperti gelatin dan lateks. 

Penggunaan partikel ini memiliki keuntungan mengurangi reaktivitas non-spesifik terhadap 

reaksi silang antigen sel darah merah. Prinsip-prinsip dasar haemagglutination dan tes 

partikel aglutinasi adalah sama, terlepas dari jenis partikel bebas. Tes  aglutinasi partikel 

masih dipakai  secara luas untuk mendeteksi antibodi sifilis. aglutinasi partikel tidak 

melibatkan beberapa langkah atau pencucian peralatan.  

Gambar Prinsip Tes Partikel Aglutinasi 

Pada gambar 5.3 menunjukkan antibodi spesifik dilapisi dengan partikel lateks, kemudian 

ditambahkan serum atau plasma yang mengandung antigen maka akan terbentuk aglutinasi 

yang dapat diamati langsung dengan bantuan partikel lateks ini . Hasil reaktif jika terjadi 

aglutinasi. 

 

2.3.4 Rapid Test 

Rapid Test dipakai  sekali dan dibuang. Banyak tes cepat didasarkan pada bentuk 

imunokromatografi dimana sampel ditambahkan mengalir turun strip inert dan bereaksi 

dengan sebelumnya reagen dengan fase gerak. Sampel bisa serum, plasma atau bahkan darah 

lengkap dalam beberapa kasus. Reaksi positif divisualisasikan sebagai titik atau garis / band 

yang muncul di strip. Sebagian besar tes juga mengharuskan timbulnya garis / band pada 

daerah kontrol yang dipakai  untuk memvalidasi hasil masing-masing perangkat. 

   

 

Gambar . Prinsip Kerja Rapid Test 

Gambar  menggambarkan antibodi spesifik yang dicoated konjugat emas dilapiskan 

pada membran selulosa, kemudian ditambahkan serum atau plasma yang mengandung 

antigen maka akan terjadi ikatan antigen-antibodi+konjugat emas yang akan bergerak ke 

daerah tes yang telah dilekatkan antibody spesifik kedua dan akan terbentu warna di bagian 

test. Sisa antibodi spesifik yang dicoated konjugat emas akan terus bererak ke bagian kontrol 

dan akan ditangkap oleh anti IgG sehingga terbentuk pita di bagian Kontrol. 

  

Di bawah ini pada tabel 5.2 menjelaskan perbedaan EIA dan Rapid Tes, yaitu  

Tabel 5.2. Perbedaan EIA dan Rapid Test 

Perbedaan EIA Rapid Tes 

Penggunaan Lebih banyak langkah Mudah 

Waktu Lama Cepat 

Spesifisitas Bisa terjadi false positif Lebih tinggi dari EIA 

Sensitivitas Tinggi Lebih rendah dari EIA 

Cara deteksi Menggunakan fotometer Pengamatan langsung 

 

--  Tes Teknologi Amplifikasi Asam Nukleat 

Teknologi amplifikasi asam nukleat (NAT), seperti yang diterapkan untuk skrining darah, 

mendeteksi keberadaan asam nukleat virus berbentuk DNA atau RNA dalam darah donor. 

Dalam teknologi ini, segmen RNA / DNA spesifik virus ditargetkan dan diperkuat secara in-

vitro. Langkah amplifikasi memungkinkan dapat mendeteksi titer virus yang rendah dalam 

sampel asli dengan meningkatkan jumlah yang target yang hadir spesifik untuk titer yang 

mudah dideteksi. Kehadiran asam nukleat spesifik menunjukkan kehadiran virus itu sendiri 

dan bahwa sumbangan ini  mungkin menular. 

 

Pada gambar menunjukkan pada prinsip kerja NAT RNA atau DNA virus di amplifikasi 

dengan bantuan enzim reverse trankriptase untuk mendapatkan DNA virus atau agen infeksi 

murni. Tes NAT baik dapat dilakukan pada donor pasien (ID) atau mini-pool (MP) untuk 

mendeteksi asam nukleat dari agen infeksi. Selain tes NAT yang menargetkan asam nukleat 

virus, multipleks tes skrining NAT yang dikembangkan dapat mendeteksi DNA atau RNA dari 

beberapa virus secara bersamaan. 

 

 

  

Topik 1 

HEPATITIS B 

 

A. STRUKTUR DAN MORFOLOGI  

Hepatitis B merupakan suatu penyakit hati yang disebabkan oleh virus Hepatitis B, yaitu 

salah satu virus termasuk anggota famili hepadnavirus yang dapat memicu  peradangan 

hati akut atau kronis yang dapat berlanjut menjadi sirosis hati atau kanker hati. Hepatitis B 

akut jika perjalanan penyakit kurang dari 6 bulan sedangkan Hepatitis B kronis bila penyakit 

menetap, tidak menyembuh secara klinis atau laboratorium atau pada gambaran patologi 

anatomi selama 6 bulan. 

 

Gambar  Struktur virus Hepatitis B  

Virus Hepatitis B (VHB) adalah virus (Deoxyribo Nucleic Acid) DNA terkecil berasal dari 

genus Orthohepadnavirus famili Hepadnaviridae berdiameter 40-42 nm. Masa inkubasi 

berkisar antara 15-180 hari dengan rata-rata inkubasi 60-90 hari. Bagian luar dari virus ini 

adalah protein envelope lipoprotein, sedangkan bagian dalam berupa nukleokapsid atau core. 

Genom virus hepatitis B merupakan molekul DNA sirkular untai-ganda parsial dengan 3200 

nukleotida . Genom berbentuk sirkuler dan memiliki empat Open Reading Frame (ORF) yang 

saling tumpang tindih secara parsial protein envelope yang dikenal sebagai selubung HBsAg 

seperti large HBs (LHBs), medium HBs (MHBs), dan small HBs (SHBs) disebut gen S, yang 

merupakan target utama respon imun host, dengan lokasi utama pada asam amino 100-160. 

HBsAg dapat mengandung satu dari sejumlah subtipe antigen spesifik, disebut d atau y, w atau 

r. Subtipe HbsAg ini menyediakan penanda epidemiologik tambahan. Gen C yang mengkode 

protein inti (HBcAg) dan HBeAg, gen P yang mengkode enzim polimerase yang dipakai  

untuk replikasi virus, dan terakhir gen X yang mengkode protein X (HBx), yang memodulasi 

sinyal sel host secara langsung dan tidak langsung mempengaruhi ekspresi gen virus ataupun 

host, dan belakangan ini diketahui berkaitan dengan terjadinya kanker hati. 

   

 

Gambar . Genom virus Hepatitis B  

Infeksi VHB merupakan penyebab utama hepatitis akut, hepatitis kronis, sirosis, dan 

kanker hati di dunia. Infeksi ini endemis di daerah Timur Jauh, sebagian besar kepulaan Pasifik, 

banyak negara di Afrika, sebagian Timur Tengah, dan di lembah Amazon. Center for Disease 

Control and Prevention (CDC) memperkirakan bahwa sejumlah 200.000 hingga 300.000 orang 

(terutama dewasa muda) terinfeksi oleh VHB setiap tahunnya. Hanya 25% dari mereka yang 

mengalami ikterus, 10.000 kasus memerlukan perawatan di rumah sakit, dan sekitar 1-2% 

meninggal. 

Sepertiga penduduk dunia diperkirakan telah terinfeksi oleh VHB dan sekitar 400 juta 

orang merupakan pengidap kronik Hepatitis B, sedangkan prevalensi di Indonesia dilaporkan 

berkisar antara 3-17%. Virus Hepatitis B diperkirakan telah menginfeksi lebih dari 2 milyar 

orang yang hidup saat ini selama kehidupan mereka. Tujuh puluh lima persen dari semua 

pembawa kronis hidup di Asia dan pesisir Pasifik Barat. Prevalensi pengidap VHB tertinggi ada 

di Afrika dan Asia. Hasil Riset Kesehatan Dasar tahun 2007 menunjukkan bahwa Hepatitis klinis 

terdeteksi di seluruh provinsi di Indonesia dengan prevalensi sebesar 0,6% (rentang: 0,2%-

1,9%). Hasil Riskesdas Biomedis tahun 2007 dengan jumlah sampel 10.391 orang 

menunjukkan bahwa persentase HBsAg positif 9,4%. Persentase Hepatitis B tertinggi pada 

kelompok umur 45- 49 tahun (11,92%), umur >60 tahun (10.57%) dan umur 10-14 tahun 

(10,02%), selanjutnya HBsAg positif pada kelompok laki-laki dan perempuan hampir sama 

(9,7% dan 9,3%). Hal ini menunjukkan bahwa 1 dari 10 penduduk Indonesia telah terinfeksi 

virus Hepatitis B. 

B. CARA PENULARAN 

Penularan virus hepatitis B (VHB) adalah melalui parenteral dan menembus membran 

mukosa, terutama berhubungan seksual. Penanda HBsAg telah diidentifikasi pada hampir 

setiap cairan tubuh dari orang yang terinfeksi yaitu saliva, air mata, cairan seminal, cairan 

serebrospinal, asites, dan air susu ibu. Beberapa cairan tubuh ini (terutama semen dan saliva) 

telah diketahui infeksius dan dapat menularkan virus VHB. 

Jalur penularan infeksi VHB yang terbanyak di Indonesia adalah secara parenteral yaitu 

secara vertikal (transmisi) mateRNAl-neonatal atau horisontal (kontak antar pasien yang 

sangat erat dan lama, seksual, infeksi nosokomial akibat prosedur diagnostik (iatrogenik), 

penggunaan jarum suntik bersama). Virus Hepatitis B dapat dideteksi pada semua sekret dan 

cairan tubuh manusia, dengan konsentrasi tertinggi pada serum. 

Infeksi VHB berlangsung dalam dua fase. Selama fase proliferatif, DNA VHB ada  

dalam bentuk episomal, dengan pembentukan virion lengkap dan semua antigen terkait. 

Ekspresi gen HBsAg dan HBcAg di permukaan sel disertai dengan molekul MHC kelas I 

memicu  pengaktifan limfosit T sitotoksik (CD8+). Selama fase integratif, DNA virus 

meyatu kedalam genom pejamu. Seiring dengan berhentinya replikasi virus dan munculnya 

antibodi virus, infektivitas berhenti dan kerusakan hati mereda. Namun risiko terjadinya 

karsinoma hepatoselular menetap. Hal ini sebagian disebabkan oleh disregulasi pertumbuhan 

yang diperantarai protein X VHB. Kerusakan hepatosit terjadi akibat kerusakan sel yang 

terinfeksi virus oleh sel sitotoksik (CD8+). 

 

Gambar . Patogenesis imun pada virus hepatitis B 

 

Proses replikasi VHB berlangsung cepat, sekitar 1010-1012 virion dihasilkan setiap hari. 

Siklus hidup VHB dimulai dengan menempelnya virion pada reseptor di permukaan sel hati 

   

  

 

). Setelah terjadi fusi membran, partikel core kemudian ditransfer ke sitosol dan 

selanjutnya dilepaskan ke dalam nucleus (genom release), selanjutnya DNA VHB yang masuk 

ke dalam nukleus mula-mula berupa untai DNA yang tidak sama panjang yang kemudian akan 

terjadi proses DNA repair berupa memanjangnya rantai DNA yang pendek sehingga menjadi 

dua untai DNA yang sama panjang atau covalently closed circle DNA (cccDNA). 

 

Gambar  Siklus replikasi virus hepatitis B (

 

Proses selanjutnya adalah transkripsi cccDNA menjadi pre-genom RNA dan beberapa 

messenger RNA (mRNA) yaitu mRNA, LHBs, MHBs, dan mRNA SHBs. Semua RNA VHB 

kemudian ditransfer ke sitoplasma dimana proses translasi menghasilkan protein envelope, 

core, polimerase, polipeptida X dan pre-C, sedangkan translasi mRNA LHBs, MHBs, dan mRNA 

SHBs akan menghasilkan protein LHBs, MHBs, dan SHBs. Proses selanjutnya adalah 

pembuatan nukleokapsid di sitosol yang melibatkan proses encapsidation yaitu 

penggabungan molekul RNA ke dalam HBsAg. Proses reverse transcription dimulai, DNA virus 

dibentuk kembali dari molekul RNA. Beberapa core yang mengandung genom matang 

ditransfer kembali ke nukleus yang dapat dikonversi kembali menjadi cccDNA untuk 

mempertahankan cadangan template transkripsi intranukleus. Akan tetapi, sebagian dari 

protein core ini bergabung ke kompleks golgi yang membawa protein envelope virus. Protein 

core memperoleh envelope lipoprotein yang mengandung antigen surface L, M, dan S, yang 

selanjutnya ditransfer ke luar sel. 

Sel hati manusia merupakan target organ bagi virus Hepatitis B. Virus Hepatitis B mula-

mula melekat pada reseptor spesifik di membran sel hepar kemudian mengalami penetrasi ke 

dalam sitoplasma sel hepar. Virus melepaskan mantelnya di sitoplasma, sehingga melepaskan 

nukleokapsid. Selanjutnya nukleokapsid akan menembus sel dinding hati. Asam nukleat VHB 

akan keluar dari nukleokapsid dan akan menempel pada DNA hospes dan berintegrasi pada 

DNA ini . Proses selanjutnya adalah 17 DNA VHB memerintahkan sel hati untuk 

membentuk protein bagi virus baru.  Virus Hepatitis B dilepaskan ke peredaran darah, terjadi 

mekanisme kerusakan hati yang kronis disebabkan karena respon imunologik penderita 

terhadap infeksi. 

Proses replikasi virus tidak secara langsung bersifat toksik terhadap sel, terbukti banyak 

carrier VHB asimtomatik dan hanya memicu  kerusakan hati ringan. Respon imun host 

terhadap antigen virus merupakan faktor penting terhadap kerusakan hepatoseluler dan 

proses klirens virus, makin lengkap respon imun, makin besar klirens virus dan semakin berat 

kerusakan sel hati. Respon imun host dimediasi oleh respon seluler terhadap epitop protein 

VHB, terutama HBsAg yang ditransfer ke permukaan sel hati. Human Leukocyte Antigen (HLA) 

class I-restricted CD8+ cell yang mengenali fragmen peptida VHB setelah mengalami proses 

intrasel dan dipresentasikan ke permukaan sel hati oleh molekul Major Histocompability 

Complex (MHC) kelas I. Proses berakhir dengan penghancuran sel secara langsung oleh 

Limfosit T sitotoksik (CD8+). 

 

C. GEJALA KLINIS 

Manifestasi klinis infeksi VHB pada pasien hepatitis akut cenderung ringan. Hepatitis B 

sulit dikenali karena gejala-gejalanya tidak langsung terasa dan bahkan ada yang sama sekali 

tidak muncul. sebab  itulah, banyak orang yang tidak menyadari bahwa dirinya telah 

terinfeksi. Virus ini biasanya berkembang selama 1-5 bulan sejak terjadi pajanan terhadap 

virus sampai kemunculan gejala pertama.  Kondisi asimtomatis ini terbukti dari tingginya 

angka pengidap tanpa adanya riwayat hepatitis akut. Apabila menimbulkan gejala hepatitis, 

gejalanya menyerupai hepatitis virus yang lain tetapi dengan intensitas yang lebih berat. 

Beberapa gejala umum hepatitis B antara lain  :  

− Kehilangan nafsu makan. 

− Mual dan muntah. 

− Nyeri di perut bagian bawah. 

− Sakit kuning (dilihat dari kulit dan bagian putih mata yang menguning). 

   

  

 

− Gejala yang mirip pilek, misalnya lelah, nyeri pada tubuh, dan sakit kepala. 

Gejala hepatitis akut terbagi dalam 4 tahap, yaitu: 

1) Fase Inkubasi 

Merupakan waktu antara masuknya virus dan timbulnya gejala atau ikterus. Fase inkubasi 

Hepatitis B berkisar antara 15-180 hari dengan rata-rata INKUBASI 60-90 hari. 

2) Fase prodromal (pra ikterik) 

Fase diantara timbulnya keluhan-keluhan pertama dan timbulnya gejala ikterus. 

Awitannya singkat atau insidous ditandai dengan malaise umum, mialgia, artalgia, mudah 

lelah, gejala saluran napas atas dan anoreksia. Diare atau konstipasi dapat terjadi. Nyeri 

abdomen biasanya ringan dan menetap di kuadran kanan atas atau epigastrum, kadang 

diperberat dengan aktivitas akan tetapi jarang menimbulkan kolestitis. 

3) Fase ikterus 

Ikterus muncul setelah 5-10 hari, tetapi dapat juga muncul bersamaan dengan munculnya 

gejala. Banyak kasus pada fase ikterus tidak terdeteksi. Setelah timbul ikterus jarang 

terjadi perburukan gejala prodromal, tetapi justru akan terjadi perbaikan klinis yang 

nyata. 

4) Fase konvalesen (penyembuhan) 

Diawali dengan menghilangnya ikterus dan keluhan lain, tetapi hepatomegali dan 

abnormalitas fungsi hati tetap ada. Muncul perasaan sudah lebih sehat dan kembalinya 

nafsu makan. Sekitar 5-10% kasus perjalanan klinisnya mungkin lebih sulit ditangani, 

hanya <1% yang menjadi fulminan ,

Hepatitis B kronis didefinisikan sebagai peradangan hati yang berlanjut lebih dari enam 

bulan sejak timbul keluhan dan gejala penyakit. Perjalanan hepatitis B kronik dibagi menjadi 

tiga fase penting yaitu : 

1) Fase Imunotoleransi 

Sistem imun tubuh toleren terhadap VHB sehingga konsentrasi virus tinggi dalam darah, 

tetapi tidak terjadi peradangan hati yang berarti. Virus Hepatitis B berada dalam fase 

replikatif dengan titer HBsAg yang sangat tinggi. 

2) Fase Imunoaktif (Clearance) 

Sekitar 30% pasien persisten dengan VHB akibat terjadinya replikasi virus yang 

berkepanjangan, terjadi proses nekroinflamasi yang tampak dari kenaikan konsentrasi 

ALT. Fase clearance menandakan pasien sudah mulai kehilangan toleransi imun terhadap 

VHB. 

3) Fase Residual 

Tubuh berusaha menghancurkan virus dan menimbulkan pecahnya sel-sel hati yang 

terinfeksi VHB. Sekitar 70% dari pasien ini  akhirnya dapat menghilangkan sebagian 

besar partikel virus tanpa ada kerusakan sel hati yang berarti. Fase residual ditandai 

dengan titer HBsAg rendah, HBeAg yang menjadi negatif dan anti-HBe yang menjadi 

positif, serta konsentrasi ALT normal. 

 

D. METODE PEMERIKSAAN 

Virus Hepatitis B ada  dalam aliran darah dengan titer virus itu sendiri bervariasi. 

Dalam orang yang baru terinfeksi, DNA virus biasanya terdeteksi meskipun tidak selalu pada 

titer tinggi. Pada pasien kronis, bila ditemukan DNA virus hepatitis B maka darah donor 

ini  infeksius atau jika tidak ditemukan DNA virus dan viremia dengan titer sangat rendah 

atau tidak ada sama sekali, maka darah donor ini  tidak infeksius.  

Skrining untuk antigen permukaan hepatitis B (HBsAg) menunjukkan infeksi dengan 

VHB, tetapi tidak dengan sendirinya membedakan antara infeksi baru dan kronis. Perbedaan 

antara infeksi akut dan kronis tidak relevan dengan penyaringan darah, semua sumbangan 

HBsAg positif harus dianggap berisiko tinggi transmisi VHB dan tidak akan dikeluarkan untuk 

transfusi. Beberapa penelitian menunjukkan ketika HBsAg negatif pada beberapa pasien 

dengan titer DNA virus rendah yang terdeteksi oleh Nucleic Acid Test (NAT), maka darah 

ini  dapat memicu  infeksi pada resipien / penerima. Infeksi kemudian memiliki 

probabilitas yang lebih tinggi untuk maju ke sirosis dan karsinoma hepatoseluler. 

Serologi virus hepatitis B adalah kompleks. Sejumlah tanda serologi yang berbeda 

mengembangkan selama infeksi, termasuk antigen permukaan hepatitis B (HBsAg) dan 

antibodi hepatitis B inti (anti-HBc).  Metode yang dipakai  untuk mengidentifikasi 

keberadaan VHB menggunakan target skrining berikut: 

--  Metode serologis: 

− Antigen permukaan Hepatitis B (HBsAg) : 3 minggu setelah infeksi.  

− Hepatitis B inti (Hbc) antibodi ( anti-HBs dengan titer ≥ 100 mIU/mL, maka dianggap 

aman) 

--  Asam nukleat virus: HBV DNA. 

Untuk meminimalkan risiko infeksi penularan virus hepatitis B melalui transfusi, maka 

direkomendasikan oleh WHO sebagai berikut : 

1) Skrining harus dilakukan dengan menggunakan sangat sensitif dan spesifik yaitu HBsAg 

immunoassay (EIA / CLIA). 

2) Skrining menggunakan HBsAg rapid test yang sangat sensitif dan spesifik atau 

pemeriksaan partikel aglutinasi dapat dilakukan di laboratorium yang kecil, di daerah 

terpencil atau dalam situasi darurat. 

3) Skrining untuk anti-HBc tidak dianjurkan sebagai rutinitas. Negara harus menentukan 

kebutuhan untuk skrining anti-HBc berdasarkan prevalensi dan kejadian infeksi HBV. 

4) Skrining untuk ALT tidak dianjurkan. 

 

 Pemeriksaaan HBsAg metode rapid Test 

Prinsip pemeriksaan :  

HBsAg  dalam sampel akan berikatan dengan anti-HBs colloidal 

gold konjugat membentuk komplek yang akan bergerak melalui membran area tes 

yang telah dilapisi oleh anti-HBsAg. Kemudian terjadi reaksi  membentuk garis berwarna 

merah muda keunguan  yang menunjukkan hasil positif pada area tes. Apabila dalam 

sampel tidak ada  HBsAg maka tidak akan menimbulkan garis merah pada area tes. 

Kelebihan anti-HBs colloidal gold konjugat akan terus bergerak menuju area kontrol (C) 

yang telah dilapisi anti IgG tikus dari serum kambing (anti-mouse IgG antibody), sehingga 

berikatan dan membentuk garis merah pada area kontrol yang menunjukkan hasil 

pemeriksaan valid. 

 

Cara kerja :  

1) Disiapkan alat dan bahan yang akan dipakai . 

2) Dilakukan pengambilan sampel. 

3) Dimasukan darah kedalam tabung reaksi, diamkan selama 30 menit, kemudian di 

sentrifus selama 15 menit dengan kecepatan 3000 rpm. 

4) Serum/plasma terbentuk kemudian dipindahkan ke tabung kosong lainnya 

5) Celupkan reagen strip kedalam tabung yg telah di isi sampel tadi sampai tanda batas 

pada strip,biarkan selama 15 menit. 

6) Pengamatan hasil tidak boleh dibaca lebih dari 20 menit. 

 interpretasi Hasil : 

− Positif (+) 

Selain timbul garis merah pada daerah control (C), akan muncul 1 (satu) garis merah 

yang nyata di daerah test (T), hasil positif menyatakan adanya HBsAg. 

− Negatif (-) 

Timbul 1 (satu) garis merah pada bagian kontrol (C), dan tidak ada garis merah di 

daerah test (T). 

− Invalid 

Sama sekali tidak muncul warna merah baik pada daerah test (T), maupun kontrol 

(C), merupakan adanya indikasi adanya kesalahan prosedur atau reagen test yang 

rusak. 

 

 Pemeriksaaan HBsAg metode ELISA / CHLIA 

 

Gambar  Prinsip Pemeriksaan HBsAg Metode ELISA 

Prinsip pemeriksaan :  Antibodi  ganda “sandwich” imunosai   yang  menggunakan  

antibodi anti-HBsAg spesifik: antibodi monklonal HBsAg yang berada di dasar sumur 

mikrotiter dan antibodi poliklonal HBsAg ditambahkan dengan Horseradish Peroxidase 

(HRP) sebagai larutan konjugat. Selama pemeriksaan, adanya HBsAg dalam spesimen 

akan bereaksi dengan antibodi-antibodi   ini    untuk   membentuk   kompleks   imun 

“antibodi-HBsAg-antibodi- HRP”. Setelah materi yang tidak terikat tercuci selama 

pemeriksaan, substrat ditambahkan untuk menunjukkan hasil tes. Munculnya waRNA 

biru di sumur mikrotiter mengindikasikan HBsAg reaktif. Tidak adanya waRNA 

menunjukkan hasil non reaktif di spesimen 

 

Alat dan Bahan : 

- Alat  

1. Mikrotiter well 

2. Mikropipet 

3. Tip Kuning dan Tip Biru 

4. Inkubator 

5. ELISA Reader 

6. ELISA Washer 

- Reagen 

1. Enzim Konjugat 

2. Kontrol Positif 

3. Kontrol Negatif 

4. Sampel diluent 

5. Color A dan B 

6. Stop Solution 

7. Wash Buffer 

- Sampel serum pasien  

1   

  

  

Cara Kerja : 

a. Pembuatan Wash Buffer 

1. Wash buffer pekat dicampurkan dengan aquadest perbandingan (1:19) 

2. Campuran yang sudah jadi disimpan pada suhu ruang selama seminggu 

b. Prosedur Pemeriksaan  

1) Semua reagen dan specimen dikondisikan pada suhu ruang. 

2) Siapkan nomor yang dibutuhkan untuk sumur, yang terdiri dari 1 sumur blanko, 2 

sumur control positif, 2 sumur untuk control negatif dan 1 sumur untuk setiap 

specimen. Tulis nomor seri untuk control dan specimen pada kolom. 

3) Spesimen diluents ditambahkan sebanyak 20µl pada masing-masing sumur. 

4) Spesimen, control negative, control positif ditambahkan sebanyak 100µl sesuai 

dengan kolom data. (sediakan 1 sumur untuk blanko) 

5) Kemudian dihomogenkan 

6) Plate diinkubasi pada incubator suhu 37°C ± 1 jam  

7) Enzyme conjugate ditambahkan pada setiap sumur ± 50µl. 

8) Plate diinkubasi pada incubator suhu 37°C ± 30 menit. 

9) Setiap sumur dicuci dengan wash buffer dengan prosedur : 

--  Pencucian   yang   dilakukan   harus   sesuai   dengan   petunjuk   apabila   ada 

pencucian yang tidak sempuRNA maka akan mempengaruhi hasil. 

--  Semua isi sumur dimasukkan pada labu cuci. Kemudian ditambahkan wash buffer 

350/lebih. 

--   Pastikan tidak ada cairan di dalam tip dan setelah pemipetan terakhir. 

10) Color A & B dimasukkan pada setiap sumur sebanyak 50µl 

11) Plate diinkubasi pada waterbath/inkubator 37° C± 30 menit 

12) Hentikan reaksi dengan penambahan 50µl stopping solotion disetiap sumur 

13) Absorbansi setiap sumur dibaca pada   450nm &   630nm λ λ 

14) Perhitungan  

- Single wave length (λ=450nm) 

OD = OD450 ±ODBC450 

      = sampel – control  

   

  

 

- Dual wave length (λ=630nm)  

 

Hasil pemeriksaan valid jika : 

1) Nilai   OD   blanko   kurang   dari   0.100  (   sumur   dari  kontrol   blanko   hanya   berisi 

kromogen dan stop solution) 

2) Nilai OD kontro negatif harus sama atau kurang dari () 0.100. Dieliminasi kontrol negatif 

dengan nilai OD lebih besar dari () 0.100. Jika 2 nilai keluar dari batas, pemeriksaan 

invalid dan harus di ulangi. 

3) Nilai OD kontrol positif sama atau lebih besar () 0.500. Jika nilai OD kurang dari 0.500, 

pemeriksaan invalid dan harus di ulangi 

Perhitungan kontrol : 

Nilai cut-off (CO) = NCx . 2,1 

NCx : nilai absorbansi rata-rata kontrol negative (jika NCx  0.05 , NCx harus dihitung 0.05) 

Interpretasi hasil : 

1) Spesimen dengan absorbansi kurang dari (<) nilai cut-off dinyatakan negatif. 

2) Spesimen dengan nilai absorbansi lebih besar atau sama dengan () nilai cut-off 

dinyatakan positif. 

 

Topik 2 

Human Immunodeficiency Virus (HIV) 

 

A. STRUKTUR DAN MORFOLOGI 

Sejarah HIV dimulai pada tahun 1981 di Amerika Serikat melaporkan kasus Gay Related 

Immune Deficiency (GRID), yaitu penurunan kekebalan tubuh yang dihubungkan dengan kaum 

gay/homoseksual. Pada tahun 1982 , CD–USA (Centers for Disease Control) Amerika Serikat 

untuk pertama kali membuat definisi AIDS dan juga ditemukan penyebab kelainan ini adalah 

LAV (Lymphadenophaty Associated Virus) oleh Luc Montagnier dari Pasteur Institut Paris. 

Tahun 1983, Jean Claude Chermann dan Françoise Barré-Sinnousi melakukan isolasi dari 

penderita sindrom limfadenopati.  Tahun 1984, Robert Gallo dari Amerika Serikat, meneliti 

virus penyebab AIDS yaitu HTLV-III. Tahun 1986, InteRNAtional Committe on Taxonomi of 

Viruses, memutuskan nama penyebab penyakit AIDS adalah Human Immunodeficiency Virus 

(HIV) yang mengganti nama LAV dan HTLV III. Pada tanggal 15 April 1987,  pertama kali AIDS 

di Indonesia yaitu pasien beRNAma Edward Hop berumur 44 tahun dari Belanda, meninggal 

di Rumah Sakit Sanglah Bali dan pada akhir tahun 1987 ada   6 orang yang didiagnosis HIV 

positif, dua di antara mereka mengidap AIDS. 

HIV (Human Immunodeficiency Virus) merupakan suatu retrovirus dengan materi 

genetik (RNA) yang dapat mentransfer informasi genetik RNA ke DNA dengan menggunakan 

enzim yang disebut reverse transcriptase. HIV menginfeksi berbagai sel sistem imun antara 

lain : Sel T helper (CD4+), Makrofag dan sel dendritik. Infeksi HIV memicu  penurunan 

kekebalan tubuh yang berhubungan dengan infeksi oportunistik dan tumor  ganas disebut 

AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome). Virus HIV dibagi dua tipe, yaitu : HIV-1 dan HIV-

2. HIV-1 lebih cepat memicu  AIDS  dan bersifat akut, sedangkan HIV-2  memicu  

AIDS lebih lambat dan bersifat kronik. Menurut data WHO 2010, angka kejadian HIV dari 119 

negara secara global menurut mencapai 35.000.000 orang terinfeksi HIV (sekitar 33.200.000-

37.200.000 orang) dan 15.000.000 0rang meninggal .  

Struktur HIV-1 (gambar 5.6.), diameter virion mencapai 100 nm, tersusun dari dua strand 

RNA yang identik (viral genom) dengan panjang 9749 nukleotida yang mengkode  bermacam-

macam enzim diantaranya enzim reverse transcriptase, integrase, protease yang dibungkus 

dalam cone shapped core (lapisan berbantuk kerucut) yang tersusun dari protein capsid p24 

dan bagian dalam protein matrix p17 yang berasal dari membran fosfolipid host yang 

memeiliki protein membran gp 41 dan gp 120 yang akan berikatan dengan CD4 dan Reseptor 

kemokin.  

   

  

 

 

 

Gambar 5.13 Struktur Human Immunodeficiency Virus (HIV I) 

Sumber : Cellular and Molecular Immunology.7th ed. 2012 

Ekspresi gen HIV dibagi menjadi 2 tahap ekspresi gen,yaitu: 

1) Early gen , mengekspresikan gen rev, tat, nef  yang akan memproduksi protein yang 

dikode gen ini  segera setelah virus menginfeksi sel. 

2) Late gen, mengekspresikan gen env, gag, dan pol, yang mengkode komponen struktural 

HIV.  

 

 

Gambar  Genom Human Immunodeficiency Virus (HIV I) 

Secara morfologi HIV-2 sama dengan HIV-1, tetapi kurang patogenik. Kedua tipe tesebut 

dapat dibedakan melalui adanya atau tidak adanya antibodi yang spesifik pada HIV-2. 

Meskipun reaktivitas (cross reactivity) terjadi antara protein inti kedua virus, tetapi protein 

pembungkus (envelope) mereka berbeda.  

B. CARA PENULARAN 

 

Gambar 5.15 Cara Penularan HIV 

Cara penularan HIV saat ini semakin jelas, meskipun virus dapat disiolasi dari banyak 

hasil sekresi tubuh, infeksi ditularkan dari satu pasien ke pasien lain melalui tiga jalur 

utama, yaitu : 

1) Kontak seksual (hubungan seks), merupakan cara penularan paling besar terutama pada 

kelompok  heteroseksual dan homoseksual (laki-laki). 

2) Penularan dari ibu ke anak, terjadi selama kehamilan melalui saluran plasenta dan setelah 

melahirkan dari asi. 

3) Inokulasi pasien oleh darah penderita HIV atau produk darah transfusi dari donor pemakai 

obat/ narkoba melalui jarum suntik dan transfusi darah yang terinfeksi HIV 

Penularan HIV melalui hubungan seksual merupakan jalur yang sangat penting. Di Afrika 

dampak penularan secara heteroseksual, menunjukkan peningkatan jumlah wanita yang 

terinfeksi dan menularkan infeksinya ke anak mereka. Dengan demikian peningkatan populasi 

   

  

 

yang terinfeksi terjadi dari dua sisi, yaitu : pada orang dewasa (penularan secara horizontal) 

dan pada bayi (penularan secara vertikal).  

HIV ditularkan melalui kontak seksual, paparan darah yang terinfeksi atau sekret dari 

kulit yang terluka, dan oleh ibu yang terinfeki ke janinnya atau melalui laktasi. Siklus replikasi 

HIV dimulai dari ikatan antara HIV’s gp120 binding protein yang terletak di permukaan virus 

dengan reseptor CD4+. Molekul gp 41 akan menetrasi membrane plasma sel target kemudian 

membawa virion masuk kedalam sel target. 

Sebuah kompleks preintegrasi virus yang terdiri dari RNA dan enzim virus dilepaskan ke 

dalam sitoplasma sel target. Kompleks ini  akan mencapai nukleus dan mempromosikan 

transkripsi dari genom RNA menjadi DNA oleh enzim reverse transcriptase. Kompleks protein 

coat akan menghasilkan double stranded DNA. Pada proses ini, genom viral rentan terhadap 

faktor imunitas seluler yang menghambat progresifitas infeksi. DNA virus akan terintegrasi ke 

dalam kromosom host oleh enzim integrase. 

Telah diketahui bahwa sejumlah mekanisme untuk menurunkan CD4+ dapat diinduksi 

oleh infeksi langsung dan destruksi oleh HIV. Kombinasi dari patogenitas virus dan respon 

kekebalan tubuh yang terjadi selama infeksi mempengaruhi perkembangan stadium lanjut 

penyakit yang merupakan suatu kompleks dan bervariasi. 

Transfusi darah juga dapat menjadi jalur penularan HIV yang penting dan efisiensi 

penularan HIV diperkirakan lebih dari 90%. Satu transfusi positif HIV rata-rata dapat 

memicu  kematian setelah jangka waktu dua tahun pada anak-anak dan lima tahun pada 

orang dewasa. meskipun demikian, sejauh mana transfusi darah menjadi jalur penularan 

utama tergantung pada prevalensi dari inidividu yang terinfeksi dala suatu populasi dan 

efektivitas dari program uji saring yang dipakai . Jika dalam suatu populasi dimana 

prevalensi pasien yang terinfeksi rendah dan program uji saring baik, maka penularan 

melalui transfusi darah menjadi jarang dan dapat disimpulkan transfusi darah bukan 

merupakan penularan HIV yang utama.  Sebaliknya jika dalam suatu populasi ada  

prevalensi pasien yang terinfeksi tinggi dan program uji saring jelek atau bahkan tidak ada, 

maka penularan HIV lewat transfusi darah sangat mungkin terjadi dan merupakan jalur 

penularan utama dalam populasi ini . 

Langkah pertama untuk mencegah penularan melalui transfusi darah adalah dengan 

menyeleksi donor, sehingga mendapat donor yang memiliki resiko rendah terhadap infeksi 

yang ditularkan. Darah dari seorang donor yang aman akan memberikan darah donasi yang 

aman untuk resipien. Meskipun demikian, tetap harus dilakukan atau melaksanakan program 

uji saring antibodi HIV agar darah yang terinfeksi dapat diidentifikasi dan dibuang. 

  

C. GEJALA KLINIS  

Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS)  merupakan kumpulan gejala atau 

penyakit yang disebabkan oleh menurunnya kekebalan tubuh akibat infeksi oleh virus HIV. 

AIDS merupakan stadium ketika sistem imun penderita jelek dan penderita menjadi rentan 

terhadap infeksi yang dinamakan infeksi oportunistik. Pada pasien yang terinfeksi HIV 

dengan jumlah CD4 < 200μL juga merupakan definisi AIDS meskipun tanpa adanya gejala yang 

terlihat atau infeksi oportunistik. Infeksi oportunistik merupakan infeksi yang tidak terkontrol 

dari penyebab infeksi yang ada dan tidak dapat dikendalikan. Infeksi-infeksi umum ini 

mencakup : 

1) Pnemonia yang disebabkan oleh Pneumocytis carinii. 

2) Tuberkulosis yang disebabkan oleh Mycobacterium tuberculosis atau Mycobacterium 

avium / intracellularis. 

3) Kriptosporidiosis kronis 

4) Toxoplasmosis 

5) Infeksi-infeksi virus lain, seperti Cytomegalovirus. 

Kanker sekunder diantaranya sarkoma kaposi dan limfoma non-Hodgkins merupakan 

kondisi lain yang kadangkala ditemukan pada pasien-pasien AIDS. Kanker ini biasanya ganas 

dan tidak merespon secara baik pemberian kemoterapi standar. Beberapa negara di dunia, 

ada  pasien yang mengidap ARC (AIDS Related Complex) atau AIDS dengan diare berat. 

Adanya infeksi oportunistik atau kanker-kanker  sekunder hanya dapat ditentukan setelah 

penelitian klinis dan hasil laboratorium.  

Ada 2 klasifikasi yang sampai sekarang sering dipakai  untuk remaja dan dewasa yaitu 

klasifikasi menurut WHO dan Centers for Disease Control and Preventoin (CDC) Amerika 

Serikat. Di negara-negara berkembang menggunakan sistem klasifikasi WHO dengan memakai 

data klinis dan laboratorium, sementara di negara-negara maju dipakai  sistem klasifikasi 

CDC. Klasifikasi menurut WHO dipakai  pada beberapa Negara yang pemeriksaan limfosit 

CD4+ tidak tersedia. Klasifikasi stadium klinis HIV/AIDS WHO dibedakan menjadi 4 stadium, 

yaitu :  

Tabel  18. Stadium HIV menurut WHO 

STADIUM GEJALA KLINIS 

I --  Tidak ada penurunan berat badan  

--  Tanpa gejala atau hanya Limfadenopati Generalisata Persisten  

II --  Penurunan berat badan <10%  

--  ISPA berulang: sinusitis, otitis media, tonsilitis, dan faringitis  

   

  

 

STADIUM GEJALA KLINIS 

--  Herpes zooster dalam 5 tahun terakhir  

--  Luka di sekitar bibir (Kelitis Angularis)  

--  Ulkus mulut berulang  

--  Ruam kulit yang gatal (seboroik atau prurigo)  

--  Dermatitis Seboroik  

--  Infeksi jamur pada kuku  

III --  Penurunan berat badan >10%  

--  Diare, demam yang tidak diketahui penyebabnya >1 bulan  

--  Kandidiasis oral atau Oral Hairy Leukoplakia  

--  TB Paru dalam 1 tahun terakhir  

--  Limfadenitis TB  

--  Infeksi bakterial yang berat: Pneumonia, Piomiosis  

--  Anemia (<8 gr/dl), Trombositopeni Kronik (<50109 per liter)  

IV --  Sindroma Wasting (HIV)  

--  Pneumoni Pneumocystis  

--  Pneumonia Bakterial yang berat berulang dalam 6 bulan  

--  Kandidiasis esofagus  

--  Herpes Simpleks Ulseratif >1 bulan  

--  Limfoma  

--  Sarkoma Kaposi  

--  Kanker Serviks yang invasif  

--  Retinitis CMV  

--  TB Ekstra paru  

--  Toksoplasmosis  

--  Ensefalopati HIV  

--  Meningitis Kriptokokus  

--  Infeksi mikobakteria non-TB meluas  

--  Lekoensefalopati multifokal progresif  

--  Kriptosporidiosis kronis, mikosis meluas  

Di Indonesia, pada tahun 2007 oleh KPA (Komisi Penanggulangan AIDS) diagnosis AIDS 

dengan kriteria WHO dipakai  untuk keperluan surveilans epidemiologi. Dalam hal ini 

seseorang dapat didiagnosis berdasarkan gejala klinis, yang terdiri dari gejala mayor dan 

minor. Pasien yang dikatakan AIDS jika menunjukan hasil tes HIV positif disertai minimal 

ada  2 gejala mayor atau ada  2 (dua) gejala minor dan 1 (satu) gejala mayor. Tabel 

5.2 menunjukkan Gejala mayor dan gejala minor infeksi HIV / AIDS 

  

  

Tabel  19. Gejala mayor dan minor infeksi HIV/AIDS 

GEJALA MAYOR GEJALA MINOR 

--  Berat badan turun >10% dalam 1 bulan  

--  Diare kronik, berlangsung > 1 bulan  

--  Demam berkepanjangan > 1 bulan  

--  Penurunan Kesadaran  

--  Demensia/HIV ensefalopati  

--  Batuk menetap > 1 bulan  

--  Dermatitis generalisata  

--  Herpes Zooster multisegmental dan 

berulang  

--  Kandidiasis orofaringeal  

--  Herpes simpleks kronis progresif  

--  Limfadenopati generalisata  

--  Infeksi jamur berulang pada alat 

kelamin wanita  

--  Retinitis Cytomegalovirus  

 

D. METODE PEMERIKSAAN 

Secara umum diagnosis HIV dibagi menjadi dua prinsip pendeteksian, yaitu deteksi 

antibodi dan deteksi virus . RNA virus HIV dapat di deteksi menggunakan Nucleic Acid Test  

(NAT) sekitar 11 hari setelah terinfeksi. Pemeriksaan skrining antibodi HIV dipakai  untuk 

diagnosis primer yang diikuti dengan tes konfirmasi jika hasil positif/reaktif pada hal hasil 

pemeriksaan skrining. Selain metode ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) dan juga 

dipakai  pemeriksaan partikel aglutinasi. Tes ELISA yang disetujui mengandung antigen HIV-

1 kelompok M, khususnya HIV-1 M: B, kelompok O dan HIV-2. Tergantung pada pabrikan, 

antigen yang diturunkan dari reverse transcriptase dan protein p24 ditambahan dalam sistem 

pemeriksaan. Selain itu, pemeriksaan bergantung pada respon imun dan titer antibodi. Infeksi 

dapat dideteksi secara serologis setelah 3 minggu tapi biasanya setelah 4-5 minggu. Dalam 

kasus yang jarang terjadi, orang yang terinfeksi HIV dengan imunosupresi lengkap 

kemungkinan antibodi HIV-negatif, tetapi mereka memiliki gejala klinis khas HIV dan titer virus 

yang terukur dalam darah. 

Langkah pertama untuk mendiagnosis HIV/AIDS adalah anamnesis secara keseluruhan 

kemudian ditemukan adanya faktor resiko dan menemukan temuan klinis pada pemeriksaan 

fisik. Tes diagnostik untuk HIV yang sampai sekarang masih dipakai  adalah ELISA (enzyme-

linked immunoabsorbent assay), rapid test, Western Blot, dan PCR (Polymerase chain 

reaction) dengan sampel whole blood, dried bloodspots, saliva dan urin. 

   

  

 

Rapid test disarankan untuk kasus kecelakaan kerja bagi petugas yang terpapar darah 

penderita HIV/AIDS atau pada penderita yang kemungkinan tidak mau datang kembali untuk 

menyampaikan hasil tes HIV. Tes ELISA merupakan pemeriksaan yang umum dilakukan karena 

praktis dan sensitifitasnya tinggi. Rekomendasi WHO jika tes ELISA dengan 3 reagen yang 

berbeda hasilnya postif semua atau rapid test dengan 3 reagen hasilnya positif semua maka 

tidak dianjurkan tes Western Blot (WB). Berikut ini adalah algoritma untuk pemeriksaan HIV 

pada donor

 

 Pemeriksaan HIV 1/2  Metode Rapid Tet 

Prinsip : 

Pemeriksaan rapid tes ini merupakan uji kualitatif untuk mendeteksi antibodi spesifik 

untuk HIV 1 (IgG, IgM, IgA) termasuk subtipe O dan atibodi HIV-2 dalam serum, plasma 

atau darah lengkap.   Pada bagian tes (T) membaran strip dilekatkan antigen 

recombinant HIV-1 capture antigen (gp41, p24) pada daerah garis tes 1 dan antigen  

recombinant HIV-2 capture antigen (gp36) pada daerah garis tes 2. Antigen 

recombinan HIV-1/2 (gp41, p24 and gp36) dan colloid gold conjugate di bagian well 

sampel akan berikatan dengan antibodi HIV1/2 pada sampel dan bergerak pada 

membran kromatografi menuju daerah tes (T), sehingga apa bila ada  antibodi HIV 

1/2  akan membentuk garis nyata berwarna ungu pada daerah tes (T) yang merupakan 

ikatan komplek antigen – antibodi – antigen gold partikel dengan spesisfisistas dan 

sensitivitas yang tinggi . Kelebihan Antigen recombinan HIV-1/2 (gp41, p24 and gp36) 

dan colloid gold conjugate akan terus bergerak menuju area kontrol (C) yang telah 

dilapisi antibodi HIV1/2 rekombinan, sehingga berikatan dan membentuk garis merah 

pada area kontrol yang menunjukkan hasil pemeriksaan valid. Hasil reaktif harus 

dikonfirmasi menggunakan pemeriksaan HIV metode ELISA atau Western Blot. 

Alat dan Bahan : 

4) HIV 1/2 Rapid test ( test strip , diluent dan pipet kapiler) 

5) Mikropipet (10 µL, 20 µL) 

6) Tip kuning  

7) Timer 

8) Sampel pasien (serum atau plasma atau darah lengkap) 

Cara kerja : 

1) Siapakan alat dan bahan yang diperlukan,kemudian simpan pada suhu kamar.   

2) Buka kemasan kit pemeriksaan pada permukaan yang datar dan kering. 

3) Untuk sampel menggunakan pipet kapiler, dipipet 20µL sampel darah dan 

masukkan ke dalam sampel well (S). Untuk sampel yang menggunakan mikropipet, 

dipipet 10 µL untuk serum atau plasma dan jika menggunakan sampel darah 

dipipet 20 µL , kemudian masukkan kedalam sampel well (S)  

4) Tambahkan 4 tetes larutan diluent secara vertikal ke dalam sampel well (S).  

   

  

 

Perhatian: jika meneteskan tidak vertikal maka akan mempengaruhi keakuratan 

hasil, dianjurkan hanya 4 tetes, apabila berlebih (5-6 tetes) akan mempengaruhi 

terbentuknya garis menjadi tidak jelas.   .  

5) Baca hasil pengamatan 10-20 menit. Peringatan : jangan membaca hasil lebih dari 

20 menit 

 

Interpretasi Hasil  

- Negatif : hanya terbentuk satu garis pada daerah kontrol (C). 

 

- Positif : 

b) Positif HIV-1  : Terbentuk dua garis ungu, satu garis di daerah tes 1 (T1) 

dan satu garis di daerah kontrol (C). 

 

c) Positif HIV-2 : Terbentuk dua garis ungu, satu garis di daerah tes 2 (T2) 

dan satu garis di daerah kontrol (C). 

 

  

  

- Invalid  : Tidak terbentuk garis pada daerah kontrol (C). 

 

 

Catatan : apabila terbentuk 3 garis yaitu di daerah Tes 1 (T1), Tes 2 (T2) dan kontrol 

(C), maka harus dikonfirmasi dengan western Blot untuk penentuan jenis virus.  

 Pemeriksaan HIV 1/2  Metode ELISA 

Prinsip :  

 

Gambar  Prinsip pemeriksaan HIV 1/2 metode ELISA 

Test Microlisa HIV merupakan test berbasis Indirect ELISA. Protein HIV envelope gp41, 

gp 120 untuk HIV-1, dan gp 36 untuk  HIV-2 yanga merupakan epitop imunodominan 

dilekatkan pada sumur mikrotiter. Sampel dan kontrol ditambahkan ke dalam sumur 

dan di inkubasi. Apabila pada sampel ada  antibodi HIV-1 dan HIV 2 maka akan 

berikatan dengan antigen spesifik yang telah dilekatkan pada permukaan sumur. Plate 

kemudian dicuciuntuk menghilangkan komponen yang tidak berikatan. Horseradish 

peroxidase (HRP) konjugat dan antihuman IgG ditambahkan ke dalam setiap well. 

Konjugat akan berikatan dengan  komplek HIV antigen-antibody yang terbentuk. 

Selanjutnya larutan substrat yang mengandung kromogen dan hidrogen peroksida 

ditambahkan pada setiap sumur dan diinkubasi. Warna biru yang terbentuk sebanding 

dengan jumlah antibodi HIV-1 dan atau antibodi HIV-2 yang ada  pada sampel.  

Kemudian perubahan warna yang terbentuk dihentikan oleh stop solution. Warna yang 

terbentuk dibaca pada ELISA reader dengan panjang gelombang 450 nm. Apabila 

sampel tidak mengandung antibodi HIV-1 dan atau antibodi HIV-2, maka tidak akan 

terbentuk warna biru pada sumur. 

 

 

 

   

  

 

 Alat dan bahan : 

1) ELISA Kit untuk deteksi antibodi HIV-1/2 

2) Mikropipet  

3) Timer Elisa  

4) reader Elisa 

5) Washer ELISA  

6) Inkubator370C  

7) Vortex  

8) Sarung tangan  

9) Tisu atau kertas saring 

10) Sampel (serum atau plasma) 

 

 

Cara kerja 

1) Dipipet 100 µl sample diluent dan masukkan ke sumur A-1 well sebagai blank. 

2) Dipipet 100 µl  kontrol negatif dan masukkan ke setiap sumur dengan nomor B-1 dan 

C-1. Perhatian : negatif kontrol siap dipakai  tidak perlu diencerkan. 

3)  Dipipet 100 µl  Positif kontrol dan masukkan pada sumur D-1, E-1 & F-1. Perhatian : 

negatif kontrol siap dipakai  tidak perlu diencerkan. 

4) Dipipet 100 µl sample diluent dan masukkan ke setiap sumur dimulai dari G-1 diikuti 

dengan penambahan sampel sebanyak 10µl.  

5) Tutup plate. 

6) Inkubasi pada 37°C ± 2°C selama 30 menit ± 2 menit.  

7) Selama inkubasi siapkan larutan pencuci (wash buffer) dan larutan kerja konjugat 

spesifik. 

8) Keluarkan plate dari inkubator dan cuci 5 kali dengan larutan pencuci (wash buffer)  

9) Tambahkan 100 µl larutan HRP konjugat pada setiap sumur dari mulai A-1.  

10) Tutup plate 

11) Inkubasi pada 37°C ± 2°C selama 30 menit ± 2 menit  

1   

  

  

12) Buang dan cuci seperti prosedur no 8  

13) Tambahkan 100 µl TMB substrat pada setiap sumur dari mulai A-1 

14) Inkubasi pada suhu ruang (20 - 30ºC) selama 30 menit pada keadaan gelap 

15)  Tambahkan 100 µl of larutan stop pada setiap sumur. 

16) Baca absorban pada panjang gelombang 450 nm dalam waktu 30 menit pada ELISA 

READER setelah blanking sumur A-1. 

Tes validitas : 

1) Nilai absorban Blanko harus lebih kecil dari 0,100  

2) Nilai absorban Negatif kontrol harus < 0,150 

3) Nilai absorban Positif kontrol ha> 0,50 

Interpretasi Hasil  

1) Spesimen dengan absorbansi kurang dari (<) nilai cut-off dinyatakan negatif. 

2) Spesimen dengan nilai absorbansi lebih besar atau sama dengan () nilai cut-off 

dinyatakan positif. 

 

 

Topik 3 

Hepatitis C 

 

A. STRUKTUR DAN MORFOLOGI 

Hepatitis C adalah jenis yang paling berbahaya dari semua jenis virus hepatitis, karena 

infeksi ini biasanya tidak menimbulkan gejala sampai di tahapan akhir infeksi kronis. 

Kebanyakan orang tidak menyadari bahwa mereka terinfeksi hepatitis sampai akhirnya 

menderita kerusakan hati permanen beberapa tahun kemudian, saat dilakukan tes medis 

rutin. 

Pada tahun 1980-an timbul sejumlah kasus hepatitis yang menyebar melalui transmisi 

parenteral. Virus ini tidak dapat dikatagorikan dalam kelompok atau tipe virus hepatitis yang 

ada saat itu, yaitu virus hepatitis A, B dan Delta. Seiring dengan perkembangan teknologi, 

ditemukanlah metode isolasi dan karakterisasi RNA virus. Virus ini kemudian dikenal dengan 

virus hepatitis C dan merupakan penyebab dominan kasus infeksi akibat virus hepatitis non A 

dan non B (NANBH). Hepatitis C adalah peradangan hati yang disebabkan oleh virus hepatitis 

C (hepatitis C virus/HCV), yaitu virus yang bergenom RNA untai tunggal dan dikatagorikan ke 

dalam kelompok Flaviviridae . Dalam perjalanan penyakitnya hepatitis C dapat menjadi infeksi 

akut dan infeksi kronis, dimana dari infeksi kronis ini  dapat berkembang menjadi fibrosis 

dan kanker hati . Hepatitis C juga berpotensi menjadi kejadian luar biasa (KLB). Oleh sebab itu 

penyakit hepatitis C masih termasuk dalam masalah kesehatan utama di indonesia.  

Patogenesis infeksi HCV hingga memicu  hepatitis C tidak lepas dari peran struktur 

genom yang dimilikinya. Sekitar 9600 nukleotida menyusun sebuah Untranslated Region dan 

Open Reading Frame (ORF). Open Reading Frame akan mengkode sejumlah protein fungsional 

yang berperan dalam membentuk struktur virus serta berperan dalam patogenesis infeksi, 

terutama dalam hal mekanisme replikasi virus dalam sel inang. Struktur genom virus hepatitis 

C,  partikel HCV (virion) terdiri berukuran 40-70 nm. Virion terdiri dari bagian inti (core) yang 

mengandung materi genetik berupa satu untai RNA yang dikelilingi oleh lapisan protein 

pelindung dengan struktur ikosahedral yang disebut nukleokapsid. Pada bagian luar 

nukleokapsid ada  lapisan lipid dan glikoprotein yang membentuk struktur envelop. Open 

Reading Frame mengkodekan sekitar 3000 asam amino, poliprotein ini kemudian menjadi 10 

protein fungsional pascatranslasi melalui proses yang melibatkan sejumlah proteinase milik 

sel inang dan virus. 

 

Gambar 5.18 Genom Virus Hepatitis C 

Pada bagian ujung terminal 5’ dan 3’ ada  daerah yang disebut Untraslated Region 

(UTR). Daerah ini tidak mengkodekan protein apapun, namun berperan penting dalam inisiasi 

traskripsi dan translasi. Bagian yang terletak di ujung 5’ disebut daerah 5’UTR, sedangkan yang 

terletak di ujung 3’ disebut 3’UTR. poliprotein post tranlasi terdiri dari protein struktural 

(terletak di dekat ujung amino) dan protein non struktural (terletak di dekat ujung karboksil). 

protein struktural adalah protein yang berperan dalam pembentukan struktur virus, yaitu 

protein core, E1, E2 dan P7. protein non struktural terdiri dari NS2, NS3, NS4 dan NS5. 

   

  

 

Beberapa dari protein ini akan dipotong menjadi protein berukuran kecil yang berperan dalam 

replikasi virus. rantai poliprotein yang terbentuk akan dipotong melalui mekanisme yang 

disebut chopping. pemotongan ini dilakukan oleh sejumlah protease. 

B. CARA PENULARAN 

Pada biasanya  cara penularan HCV adalah parental. Semula penularan HCV 

dihubungkan dengan transfusi darah atau produk darah, melalui jarum suntik. Tetapi setelah 

ditemukan bentuk virus dari hepatitis, makin banyak laporan mengenai cara penularan 

lainnya, yang biasanya  mirip dengan cara penularan HBV, yaitu: 

1) Penularan horizontal  

Penularan HCV terjadi terutama melalui cara parental, yaitu tranfusi darah atau 

komponen produk darah, hemodialisa, dan  penyuntikan obat secara intravena. 

2) Penularan vertikal  

Penularan vertikal adalah penularan dari seseorang ibu  pengidap atau penderita 

Hepatitis C kepada bayinya sebelum  persalinan, pada saat persalinan atau beberapa saat 

persalinan. 

Jika masuk ke dalam darah maka HCV akan segera menuju hepatosit (sel hati) dan dan 

juga sel limfosit B. Hanya dalam sel hati HCV bisa berkembang biak. sebab  sulitnya 

membiakkan HCV pada kultur, juga tidak adanya model binatang non-primata telah 

memperlambat lajunya riset HCV. Berikut ini adalah daur hidup HCV (Gambar 5.11). 

 

Gambar 5.19. Siklus hidup virus hepatitis C 

Melalui gambar skematis di atas, proses siklus kehidupan HCV digambarkan secara alur 

skematis.  

1   

  

  

1) HCV masuk ke dalam hepatosit dengan mengikat suatu reseptor permukaan sel yang 

spesifik. Reseptor ini belum teridentifikasi secara jelas, namun protein permukaan CD8+ 

adalah suatu HCV binding protein yang memainkan peranan dalam masuknya virus. Salah 

satu protein khusus virus yang dikenal sebagai protein E2 menempel pada reseptor site di 

bagian luar hepatosit. 

2) Kemudian protein inti dari virus menembus dinding sel dengan suatu proses kimiawi 

dimana selaput lemak bergabung dengan dinding sel dan selanjutnya dinding sel akan 

melingkupi dan menelan virus serta membawanya ke dalam hepatosit. Di dalam 

hepatosit, selaput virus (nukleokapsid) melarut dalam sitoplasma dan keluarlah RNA virus 

(virus uncoating) yang selanjutnya mengambil alih peran bagian dari ribosom hepatosit 

dalam membuat bahan-bahan untuk proses reproduksi. 

3) Virus dapat membuat sel hati memperlakukan RNA virus seperti miliknya sendiri. Selama 

proses ini virus menutup fungsi normal hepatosit atau membuat lebih banyak lagi 

hepatosit yang terinfeksi kemudian menbajak mekanisme sintesis protein hepatosit 

dalam memproduksi protein yang dibutuhkannya untuk berfungsi dan berkembang biak. 

4) RNA virus dipergunakan sebagai cetakan (template) untuk memproduksi masal 

poliprotein (proses translasi). 

5) Poliprotein dipecah dalam unit-unit protein yang lebih kecil. Protein ini ada 2 jenis yaitu 

protein struktural dan regulatori. Protein regulatori memulai sintesis kopi virus RNA asli. 

6) Sekarang RNA virus mengopi dirinya sendiri dalam jumlah besar (miliaran kali) untuk 

menghasilkan bahan dalam membentuk virus baru. Hasil kopi ini adalah bayangan cermin 

RNA orisinil dan dinamai RNA negatif. RNA negatif lalu bertindak sebagai cetakan 

(template) untuk memproduksi serta RNA positif yang sangat banyak yang merupakan 

kopi identik materi genetik virus. 

7) Proses ini berlangsung terus dan memberikan kesempatan untuk terjadinya mutasi 

genetik yang menghasilkan RNA untuk strain baru virus dan subtipe virus hepatitis C. 

Setiap kopi virus baru akan berinteraksi dengan protein struktural, yang kemudian akan 

membentuk nukleokapsid dan kemudian inti virus baru. Amplop protein kemudian akan 

melapisi inti virus baru. 

8) Virus dewasa kemudian dikeluarkan dari dalam hepatosit menuju ke pembuluh darah 

menembus membran sel. 

Keluaran dan derajat keparahan dari infeksi virus hepatitis bergantung pada jenis virus, 

jumlah virus dan faktor dari host.  

 

 

 

 

   

  

 

C. GEJALA KLINIS 

Manifestasi klinis hepatitis virus C dikenal mulai dari hepatitis akut, fulminan, kronis, 

yang dapat berkembang menjadi sirosis atau kanker hati. 

1) Infeksi Akut 

Umumnya infeksi akut HCV tidak memberi gejala atau hanya bergejala minimal. Hanya 

20-30% kasus yang menunjukkan tanda-tanda hepatitis akut 7 – 8 minggu (berkisar 2 – 26 

minggu) setelah terjadinya paparan. 

Infeksi virus hepatitis terbagi 3 fase, yaitu fase prodormal, fase ikterik, dan fase 

convalescent.  Pada fase prodormal, onset terjadi pada hari 1-14, namun rata-rata timbul pada 

hari 5-7 setelah paparan.  Keluhan yang sering yaitu malaise, fatique, mual dan muntah, 

kehilangan selera makan, demam , gejala flu , dan kebanyakan pasien mengeluh adanya nyeri 

pada perut kanan atas.  

Pada fase ikterik, gejala yang sering ditimbulkan yaitu warna kuning pada mukosa sklera 

pada awalnya dan berlanjut pada perubahan warna pada kulit. Durasi ikterik bervariasi, 

biasanya antara 4 hari sampai beberapa bulan, namun rata-rata 2-3 minggu. Urin menjadi 

gelap, feses berwarna seperti dempol (pucat). Selama fase ini, setengah penderita 

menunjukkan gejala gatal-gatal.  

Pada fase convalescent, kebanyakan gejala di atas menghilang (resolve).  Ikterik tidak 

ditemukan, warna pada kulit, urin dan feses kembali ke warna yang semula. Kembalinya nafsu 

makan dan adanya peningkatan berat badan menunjukkan sudah adanya tahap 

penyembuhan.  

 Umumnya secara klinik gejala HCV akut lebih ringan daripada hepatitis virus akut 

lainnya. Masa inkubasi HCV terletak antara HAV dengan HBV, yaitu sekitar 2 – 26 minggu, 

dengan rata-rata 8 minggu. Pada penderita hepatitis akut ditemukan Anti HCV positif pada 

75,5% HNANB pasca-tranfusi, 35% pada HNANB sporadik dan hanya 2,4 pada HBV. Sebagian 

besar penderita yang terserang HCV akut akan menjurus menjadi kronis. 

RNA virus hepatitis C dapat terdeteksi sebelum gejala muncul, namun level dari viremia 

pada 6 bulan pertama dapat dorman dan tidak terdeksi walaupun orang ini  sedang 

dalam infeksi yang persisten.  Gejala awal yang ditunjukkan tergantung dari usia saat 

terjadinya paparan, sistem imun penderita, adanya penyakit hati sebelumnya dan tingkat 

inokulasi virus. 

Level serum dari enzim hati seperti alanin aminotransferase (ALT) meningkat 10 kali 

lebih tinggi dari pada normal, kemudian menurun, dan untuk orang dengan infeksi yang 

persisten didapatkan kadar ALT naik turun (fluktuatif). Serum bilirubin juga dapat meningkat 

setelah beberapa minggu gejala pertama muncul, namun akhirnya kembali ke level yang 

normal. Secara garis besar, angka mortalitas pada infeksi akut tergolong rendah.  

  

  

2)  Infeksi Kronis 

Infeksi akan menjadi kronik pada 70 – 90% kasus dan sering kali tidak menimbulkan 

gejala apapun walaupun proses kerusakan hati berjalan terus. Adapun kriteria dari hepatitis 

kronis adalah naiknya kadar transaminase serum lebih dari 2 kali nilai normal, yang 

berlangsung lebih dari 6 bulan. Hilangnya HCV setelah terjadinya hepatitis kronis sangat jarang 

terjadi.  Jangka waktu dimana berbagai tahap penyakit hati berkembang sangat bervariasi. 

Diperlukan waktu 20 – 30 tahun untuk terjadinya sirosis hati yang sering tejadi pada 15 – 20% 

pasien hepatitis C kronis. Progresivitas hepatitis kronik menjadi sirosis hati tergantung 

beberapa faktor resiko yaitu: asupan alkohol, ko-infeksi dengan virus hepatitis B atau Human 

Immunodeficiency Virus (HIV), jenis kelamin laki-laki, usia tua saat terjadinya infeksi dan kadar 

CD4+ yang sangat rendah. Bila telah terjadinya sirosis, maka risiko terjadinya karsinoma 

hepatoselular adalah sekitar 1-4% pertahun. Karsinoma hepatoseluler dapat terjadi tanpa 

diawali dengan sirosis, namun hal ini jarang terjadi. 

3) Hepatitis C Fulminan 

Hepatitis fulminan jarang terjadi. ALT (alanine amino-transferase) meninggi sampai 

beberapa kali diatas batas atas normal tetapi biasanya  tidak sampai lebih dari 1000 U/L. 

Selain memiliki manifestasi hepatik, ada beberapa manifestasi ektrahepatik HCV yang penting 

a)  Mixed Cryoglobulinaemic vasculitis 

 Pada 50% pasien HCV biasanya  terdeteksi cryoglobulin pada serum darah, dan 

Kriopresipitat  biasanya mengandung sejumlah besar antigen dan antibodi HCV, namun 

hanya sebagian kecil pasien (10-15%) yang memiliki gejala. Gejala-gejala biasanya terkait 

dengan vaskulitis, yaitu lemah, atralgia dan purpura. 

b) Membranoproliferative glomerulonephritis 

 Pada kasus ini, telah terjadi peranan dari persarafan dan otak sehingga gejala yang 

timbul lebih berat. 

c) Poliarteritis Nodosa 

d) Papular Acrodermatitis (Gianotti syndrome) 

 

D. METODE PEMERIKSAAN 

Penegakan diagnosis pada hepatitis virus C berdasarkan uji serologi untuk memeriksa 

antibodi dan Uji HCV RNA. 

 

 

 

1)  Uji serologi 

Uji serologi yang berdasarkan pada deteksi antibodi telah membantu mengurangi risiko 

infeksi terkait transfusi. Sekali pasien pernah mengalami serokonversi, biasanya hasil 

pemeriksaan serologi akan tetap positif, namun kadar antibodi anti-HCV akan menurun 

secara gradual sejalan dengan waktu pada sebagian pasien yang infeksinya mengalami reaksi 

spontan. 

Antibodi terhadap HCV biasanya dideteksi dengan metode enzyme immunoassay yang 

sangat sensitif dan spesifik. Enzyme immunoassay generasi k-3 yang banyak dipergunakan 

saat ini mengandung protein core dan protein struktural-struktural yang dapat mendeteksi 

keberadaan antibodi dalam waktu 4-10 minggu infeksi. Antibodi anti-HCV masih tetap dapat 

terdeteksi selama terapi maupun setelahnya tanpa memandang respon terapi yang telah 

dialami, sehingga pemeriksaan anti-HCV tidak perlu dilakukan kembali apabila sudah pernah 

dilakukan sebelumnya. Uji immunoblot rekombinan (recombinant immunoblot assay, RIBA) 

dapat dipakai  untuk mengkonfirmasi hasil uji enzyme immunoassay yang 

positif. Penggunaan RIBA untuk mengkonfirmasi hasil hanya direkomendasikan untuk setting 

populasi resiko rendah seperti pada bank darah. Namun dengan tersedianya metode enzyme 

immunoassay yang sudah diperbaiki dan uji deteksi RNA yang lebih baik saat ini, maka 

konfirmasi denga RIBA telah menjadi kurang diperlukan.  

2) Uji HCV RNA 

HCV RNA dapat terdeteksi dan diukur dengan teknik amplifikasi termasuk reverse 

transcription polymerase chain reation (RT-PCR). Genotip HCV dapat dinilai dengan analisis 

phylogenetic dari rantai nukleotida atau deteksi mutasi point spesifik subtipe pada RT-PCR 

amplifikasi RNA. HCV RNA dideteksi dalam waktu 2 minggu infeksi dan juga dipakai  untuk 

konfirmasi terjadinya infeksi akut. Bagaimanapun uji HCV RNA yang rutin tidak dianjurkan 

secara langsung karena standarisasi uji ini  yang masih rendah.  

3) Biopsi Hati 

Biopsi hati secara umum direkomendasikan untuk penilaian awal seorang pasien dengan 

infeksi HCV kronis. Biopsi berguna untuk menentukan derajat beratnya penyakit (tingkat 

fibrosis) dan menentukan derajat nekrosis dan inflamasi.1 Pemeriksaan ini juga bermanfaat 

untuk menyingkirkan kemungkinan adanya penyebab hati yang lain, seperti fitur 

alkoholik, non-alcoholic steatohepatits (NASH), hepatitis autoimun, penyakit hati drug-

induced atau overload besi. 

 

 Pemeriksaan HIV 1/2  Metode Rapid Tet 

  

  

Prinsip : Pemeriksaan rapid tes ini merupakan uji kualitatif untuk mendeteksi antibodi 

spesifik untuk HCV dalam serum atau plasma. Pada bagian sampel (S) membran strip 

dilekatkan antigen recombinant HCV  dan colloid gold conjugate yang berikatan dengan 

antibodi HCV pada sampel, kemudian bergerak pada membran kromatografi menuju 

daerah tes (T) yang telah dilekatkan antigen  rekombinan HCV(antigen HCV Core, NS3, NS4, 

NS5), sehingga apabila ada  antibodi HCV pada sampel akan membentuk garis nyata 

berwarna ungu pada daerah tes (T) yang merupakan ikatan komplek antigen – antibodi – 

antigen gold partikel dengan spesisfisistas dan sensitivitas yang tinggi . Kelebihan Antigen 

recombinan HCV dan colloid gold conjugate akan terus bergerak menuju area kontrol (C) 

yang telah dilapisi antibodi HCV rekombinan, sehingga berikatan dan membentuk garis 

merah pada area kontrol yang menunjukkan hasil pemeriksaan valid.  

Alat dan Bahan : 

 HCV Rapid test ( test strip , diluent dan pipet kapiler) 

 Mikropipet (10 µL) 

 Tip kuning  

 Timer 

 Sampel pasien (serum atau plasma) 

Cara kerja : 

1) Siapakan alat dan bahan yang diperlukan,kemudian simpan pada suhu kamar.   

2) Buka kemasan kit pemeriksaan pada permukaan yang datar dan kering. 

3) Untuk sampel menggunakan pipet kapiler atau mikropipet, dipipet 10µL sampel 

darah dan masukkan ke dalam sampel well (S).  

4) Tambahkan 3 tetes larutan diluent secara vertikal ke dalam sampel well (S).  

5) Baca hasil pengamatan 5-20 menit. Peringatan : jangan membaca hasil lebih dari 20 

menit 

Interpretasi Hasil  

- Negatif : hanya terbentuk satu garis pada daerah kontrol (C). 

 

- Positif : Terbentuk dua garis ungu, satu garis di daerah tes (T) dan satu garis di 

daerah kontrol (C). 

   

  

 

 

Derajat warna yang terbentuk pada hasil positif 

 

- Invalid  : Tidak terbentuk garis pada daerah kontrol (C). 

 

 

 Pemeriksaan HCV Metode ELISA 

Prinsip :  

Test Microlisa HIV merupakan test berbasis Indirect ELISA. Protein recombinant HCV 

Core, protein NS3 dan sintetis peptida yang memiliki segmen antigenik, NS4 and NS5 

regions dari virus hepatitis C dilekatkan pada sumur mikrotiter. Sampel dan kontrol 

ditambahkan ke dalam sumur dan di inkubasi. Apabila pada sampel ada  antibodi 

HCV maka akan berikatan dengan antigen spesifik yang telah dilekatkan pada 

permukaan sumur. Plate kemudian dicuciu ntuk menghilangkan komponen yang tidak 

berikatan. Horseradish peroxidase (HRP) konjugat dan antihuman IgG ditambahkan ke 

dalam setiap well. Konjugat akan berikatan dengan  komplek HCV antigen-antibodi 

yang terbentuk. Selanjutnya larutan substrat yang mengandung kromogen dan 

hidrogen peroksida ditambahkan pada setiap sumur dan diinkubasi. Warna biru yang 

terbentuk sebanding dengan jumlah antibodi HCV yang ada  pada sampel.  

Kemudian perubahan warna yang terbentuk dihentikan oleh stop solution. Warna yang 

terbentuk dibaca pada ELISA reader dengan panjang gelombang 450nm / 630 nm. 

Apabila sampel tidak mengandung antibodi HCV, maka tidak akan terbentuk warna 

biru pada sumur. 

 Alat dan bahan : 

a. Reagen ELISA untuk deteksi antibodi HCV 

1   

  

  

b. Mikropipet  

c. Timer Elisa  

d. reader Elisa 

e. Washer ELISA  

f. Inkubator370C  

g. Vortex  

h. Sarung tangan  

i. Tisu atau kertas saring 

j. Sampel (serum atau plasma) 

Cara Kerja : 

1) Siapkan alat dan bahan yang dibutuhkan. Simpan pada suhu kamar sebelum 

dipakai . 

2) Beri label setiap well. Label diberikan pada satu sumur (A1) sebagai blanko dan 

dua sumur (B1 & C1) sebagai negatif kontrol dan tiga sumur (D1, E1 & F1) sebagai 

positif kontrol  

3) Tambahkan 100µl positif dan negatif kontrol (langsung dipakai )sesuai label 

pada sumur. 

4) Tambahkan 100 µl larutan pengencer pada setiap sumur untuk sampel 

5) Tambahkan 10µl sampel pada sumur yang ada larutan pengencer tadi dan 

homogenkan 

6) Tutup mikroplate dan inkubasi pada suhu kamar (25-30°C) selama 30 menit  

7) Cuci mikroplate sebanyak 5 kali dengan penambahan 300µl setiap sumur dengan 

larutan buffer pencuci. Hati-hati jangan sampai kontaminasi 

8) Tambahkan 100µl larutan HRP konjugat pada setiap sumur. 

9) Tutup mikroplate dan inkubasi pada suhu kamar (25-30°C) selama 30 menit  

10) Cuci mikroplate sebanyak 5 kali dengan penambahan 300µl setiap sumur dengan 

larutan buffer pencuci. Hati-hati jangan sampai kontaminasi. 

11) Tambahkan 100µl larutan TMB substrat pada setiap sumur.  

12) Tutup mikroplate dan inkubasi pada suhu kamar (25-30°C) selama 30 menit 

(keadaan gelap) 

   

  

 

13) Hentikan reaksi dengan penambahan 100ul of the stop solution pada setiap 

sumur. 

14) Baca absorban pada panjang gelombang 450nm/630nm dalam waktu 30 menit 

pada ELISA READER Dipipet 100 µl sample diluent dan masukkan ke sumur A-1 well 

sebagai blank. 

Tes validitas : 

4) Nilai absorban Blanko harus lebih kecil dari 0,150  

5) Nilai absorban Negatif kontrol harus < 0,250 

6) Nilai absorban Positif kontrol harus > 0,60 

Interpretasi Hasil  

1) Spesimen dengan absorbansi kurang dari (<) nilai cut-off dinyatakan negatif. 

2) Spesimen dengan nilai absorbansi lebih besar atau sama dengan () nilai cut-off 

dinyatakan positif. 

 

Topik 4 

Sifilis 

 

A. STRUKTUR DAN MORFOLOGI 

Sifilis merupakan penyakit kronis dan bersifat sistemik yang disebabkan oleh treponema 

palidum. Angka kejadian sifilis mencapai 90% dinegara-negara berkembang. World Health 

Organization (WHO) memperkirakan sebesar 12 juta kasus baru terjadi di afrika, Asia Selatan, 

Asia Tenggara, Amerika Latin dan Caribbean. Angka kejadian Sifilis di Indonesia berdasarkan 

laporan Survey Terpadu dan Biologis Perilaku (STBP) tahun 2011 Kementrian Kesehatan RI 

terjadi peningkatan angka kejadian Sifilis di tahun 2011 dibandingkan tahun 2007.  

Treponema pallidum merupakan spesies treponema dari famili Spirochaeta, ordo 

Spirochaetales, taksonomi dapat dilihat pada tabel 21.  

Tabel  20. Taksonomi Treponema pallidum 

TINGKATAN NAMA 

Kingdom   Bacteria  

Phylum Spirochaetes 

Ordo Spirochaetales 

Family Spirochaetaceae 

Genus Treponema 

Species T. Pallidum 

Subspecies Pallidum 

 

Treponema pallidum berbentuk spiral, gram negatif dengan panjang kisaran 11 µm 

dengan diameter antara 0,09 – 0,18 µm. ada  dua lapisan, sitoplasma merupakan lapisan 

dalam mengandung mesosom, vakuol ribosom dan bahan nukleoid, lapisan luar yaitu bahan 

mukoid. 

   

  

 

 

Gambar  Struktur Treponema pallidum 

 

B. CARA PENULARAN  

Treponema palidum masuk melalui selaput lendir yang utuh, atau kulit yang mengalami 

abrasi, menuju kelenjar limfe, kemudian masuk ke dalam pembuluh darah, dan diedarkan ke 

seluruh tubuh.  Biasanya dapat ditularkan melalui hubungan sekseual (membran mukosa atau 

uretra), kontak langsung dengan lesi atau luka yang terinfeksi, transfusi darah dan juga dari 

ibu yang menderita sifilis ke janin yang dikandung melalui plasenta pada stadium akhir 

kehamilan. 

Setelah beredar beberapa jam, infeksi menjadi sistemik walaupun tanda-tanda klinis dan 

serolois belum jelas. Sekitar satu minggu setelah terinfeksi Treponema palidum, ditempat 

masuknya akan  timbul lesi primer berupa ulkus. Ulkus akan muncul selama satu hingga lima 

minggu dan  kemudian menghilang. Uji serologis masih akan negatif ketika ulkus pertama kali 

muncul dan baru akan reaktif setelah satu sampai empat minggu berikutnya. Enam minggu 

kemudian, timbul erupsi seluruh tubuh pada sebagian kasus sifilis sekunder dan ruam ini akan 

hilang kisaran dua sampai enam minggu, karena terjadi penyembuhan spontan. Perjalanan 

penyakit menuju ke tingkat laten, dimana tidak ditemukan tanda-tanda klinis, kecuali hasil 

pemeriksaan serologis yang reaktif. Masa laten dapat berlangsung bertahun-tahun atau 

seumur hidup.  

 

C. GEJALA KLINIS 

Stadium sifilis  dalam perjalanannya dibagi menjadi tiga stadium yaitu sifilis stadium 

primer, sekunder dan tersier yang terpisah oleh fase laten dimana waktu bervariasi, tanpa 

tanda klinis infeksi. Interval antara stadium primer dan sekunder berkisar dari beberapa 

minggu sampai beberapa bulan. Interval antara stadium sekunder dan tersier biasanya lebih 

dari satu tahun.  

 Sifilis Primer 

Lesi awal sifilis berupa papul yang muncul di daerah genitalia kisaran tiga minggu setelah 

kontak seksual. Papul membesar dengan ukuran 0,5 – 1,5 cm kemudian mengalami ulserasi, 

membentuk ulkus. Ulkus sifilis yang khas berupa bulat, diameter 1-2 cm , tidak nyeri, dasar 

ulkus bersih tidak ada eksudat, teraba indurasi, soliter tetapi dapat juga multipel. Hampir 

sebagian besar disertai pembesaran kelenjar getah bening inguinal medial unilateral atau 

bilateral. Gambaran chancre sifilis primer dapat dilihat pada gambar . 

 

 

Gambar  chancre sífilis primer pada penis 

Chancre sífilis primer sering terjadi pada genitalia, perineal, atau anus dikarenakan 

penularan paling sering melalui hubungan seksual, tetapi bagian tubuh yang lain dapat juga 

terkena. Ulkus jarang terlihat pada genitalia eksterna wanita, karena lesi sering pada vagina 

atau serviks. Dengan menggunakan spekulum, akan terlihat lesi di serviks berupa erosi atau 

ulserasi yang dalam. Tanpa pengobatan lesi primer akan sembuh spontan dalam waktu 3 

sampai 6 pekan. Diagnosis banding sifilis primer yaitu ulkus mole yang disebabkan 

Haemophilus ducreyi, limfogranuloma venereum, trauma pada penis, fixed drug eruption, 

herpes genitalis. 

   

  

 

 Sifilis Sekunder 

Manifestasi akan timbul pada beberapa minggu atau bulan, muncul gejala sistemik 

berupa demam yang tidak terlalu tinggi, malaise, sakit kepala, adenopati, dan lesi kulit atau 

mukosa. Lesi sekunder yang terjadi merupakan manifestasi penyebaran Treponema pallidum 

secara hematogen dan limfogen. Manifestasi klinis sifilis sekunder dapat berupa berbagai 

ruam pada kulit, selaput lendir, dan organ tubuh. Lesi kulit biasanya simetris, dapat berupa 

makula, papula, folikulitis, papuloskuamosa, dan pustul, jarang disertai keluhan gatal. Lesi 

dapat ditemukan di trunkus dan ekstermitas, termasuk telapak tangan dan kaki. Papul 

biasanya merah atau coklat kemerahan, diskret, diameter 0,5 – 2 cm, biasanya  berskuama 

tetapi kadang licin. Lesi vesikobulosa dapat ditemukan pada sifilis kongenital.  

Kondiloma lata merupakan istilah untuk lesi meninggi (papul), luas, putih atau abu-abu 

di daerah yang hangat dan lembab. Lesi  sifilis sekunder dapat muncul pada waktu lesi sifilis 

primer masih ada. Diagnosis sifilis sekunder ditegakkan berdasarkan hasil pemeriksaan 

serologis yang reaktif dan pemeriksaan lapangan gelap positif. Treponema pallidum banyak 

ditemukan pada lesi selaput lendir atau basah seperti kondiloma lata. 

Ruam kulit pada sifilis sekunder sukar dibedakan dengan pitiriasis rosea, psoriasis, 

terutama jika berskuama, eritema multiforme dan erupsi obat. Diagnosis sifilis sekunder 

cukup sulit. Pada biasanya  diagnosis ditegakkan berdasarkan kelainan khas lesi kulit sifilis 

sekunder ditunjang dengan pemeriksaan serologis. 

 Sifilis Laten 

Sifilis laten yaitu apabila pasien dengan riwayat sifilis dan pemeriksaan serologis reaktif 

yang belum mendapat terapi sifilis dan tanpa gejala atau tanda klinis. Sifilis laten terbagi 

menjadi dini dan lanjut, dengan batasan waktu kisaran satu tahun. Dalam perjalanan penyakit 

sifilis akan melalui tingkat laten, selama bertahun-tahun atau seumur hidup. Tetapi 

bukan bearti penyakit akan berhenti pada tingkat ini, sebab dapat berjalan menjadi sifilis 

tersier. 

 Sifilis Tersier 

Sifilis tersier terdiri dari tiga grup sindrom yang utama yaitu neurosifilis, sifilis 

kardiovaskular, dan sifilis benigna lanjut. Pada perjalanan penyakit neurosifilis dapat 

asimptomatik dan sangat jarang terjadi dalam bentuk murni. Pada semua jenis neurosifilis, 

terjadi perubahan berupa endarteritis obliterans pada ujung pembuluh darah disertai 

degenerasi parenkimatosa yang mungkin sudah atau belum menunjukkan gejala saat 

pemeriksaan.  

1   

  

  

Sifilis kardiovaskular disebabkan terutama karena nekrosis aorta yang berlanjut ke 

katup. Tanda-tanda sifilis kardiovaskuler adalah insufisiensi aorta atau aneurisma, berbentuk 

kantong pada aorta torakal. Bila komplikasi ini telah lanjut, akan sangat mudah dikenal.  

Sifilis benigna lanjut atau gumma merupakan proses inflamasi proliferasi granulomatosa 

yang dapat memicu  destruksi pada jaringan yang terkena. Disebut benigna sebab jarang 

memicu  kematian kecuali bila menyerang jaringan otak. Gumma mungkin terjadi akibat 

reaksi hipersensitivitas infeksi Treponema palidum. Lesi sebagian besar terjadi di kulit dan 

tulang. Lesi pada kulit biasanya soliter atau multipel, membentuk lingkaran atau setengah 

lingkaran, destruktif dan bersifat kronis, penyembuhan di bagian sentral dan meluas ke 

perifer. Lesi pada tulang biasanya berupa periostitis disertai pembentukan tulang atau osteitis 

gummatosa disertai kerusakan tulang. Gejala khas ialah pembengkakan dan sakit. Lokasi 

terutama pada tulang kepala, tibia, dan klavikula. Pemeriksaan serologis biasanya reaktif 

dengan titer yang tinggi. 

 Sifilis Kongenital 

Penyakit yang ditularkan kepada janin dalam uterus dari ibu yang positif menderita 

sifilis. Infeksi sifilis terhadap janin dapat terjadi pada setiap stadium sifilis dan setiap masa 

kehamilan. Dahulu beberapa pendapat menyatakan infeksi tidak dapat terjadi sebelum janin 

berusia 18 minggu, karena lapisan Langhans yang merupakan pertahanan janin terhadap 

infeksi sebelum atrofi. Tetapi kenyataannya dengan pengamatan menggunakan mikroskop 

elektron dapat ditemukan Treponema pallidum pada janin berusia 9-10 minggu. 

 

D. METODE PEMERIKSAAN 

ada  dua jenis uji serologi untuk diagnosis Treponema pallidum, yaitu :  

6) Uji non-treponemal, merupakan uji yang paling sering dilakukan adalah sebagai 

berikut  

- Uji Venereal Disease Research Laboratory (VDRL) 

- Uji Rapid Plasma Reagin. 

Kedua pemeriksaan ini dipakai  untuk mendeteksi antobodi terhadap antigen yang 

terdiri dari kardioplin, kolesterol dan lesitin yang sudah terstandarisasi. 

7) Uji treponemal, terdiri dari : 

- Treponema pallidum Haem Aglutination (TPHA) 

- Treponema pallidum Particle Agglutination (TP-PA) 

   

  

 

- Flouresencent Treponemal Antibody Absorption (FTA-ABS) 

- Micro Hemagglutination Assay for antibodies to Treponema pallidum (MHA-TP) 

- Treponemal Enzyme Immuno Assay (EIA) untuk deteksi imunoglobulin G (IgG), 

imunoglobulin G dan M (IgG dan IgM) atau imunoglobulin M (IgM) 

Pemeriksaan ini mendeteksi antibodi terhadap antigen treponemal dan memilki 

sensitivitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan uji nontreponemal terutama sifilis 

lanjut.  

 Pemeriksan VDRL / RPR 

Pemeriksaan Venereal Disease Research Laboratory (VDRL) / Serum atau 

Cerebrospinal Fluid (RPR) merupakan satu-satunya pemeriksaan laboratorium untuk 

neunurosipilis yang disetujui oleh Centers for Disease Control. Pemeriksaan VDRL serum 

bisa memberikan hasil negatif palsu pada tahap late sipilis dan kurang sensitif dari RPR. 

Pemeriksaan VDRL merupakan pemeriksaan penyaring atau Skrining Test, dimana apabila 

VDRL positif maka akan dilanjutkan dengan pemeriksaan TPHA (Trophonema  Phalidum 

Heamaglutinasi). Hasil uji serologi tergantung pada stadium penyakit misalnya pada infeksi 

primer hasil pemeriksaan serologi biasanya menunjukkan hasil non reaktif. Troponema 

palidum dapan ditemukan pada chancre. Hasil serologi akan menunjukan positif 1-4 

minggu setelah timbulnya chancre. Dan pada infeksi sekunder hasil serelogi akan selalu 

pisitif dengan titer yang terus meningkat. Pasien yang terinfeksi bakteri treponema akan 

membentuk antibody yang terjadi sebagai reaksi bahan-bahan yang dilepaskan karena 

kerusakan sel-sel. Andibody ini  disebut reagin. 

a. Tujuan  :  Untuk mendeteksi adanya antibody nontreponema atau Reagin. 

b. Metode Pemeriksaan : Slide 

c. Prinsip Pemeriksaan : Adanya antibody pada serum pasien akan bereaksi dengan 

antigen yang terdiri dari kardioplin, kolesterol dan lesitin yang sudah terstandarisasi 

membentuk flokulasi ( gumpalan) atau aglutinasi.  

d. Spesimen Pemeriksaan : Serum atau cairanotak 

e. Alat  dan Bahan Pemeriksaan 

1. Slide pemeriksaan berlatar belakan putih 

2. Mikroskop 

3. Mikropipet 

4. Tip kuning 

5. Rotator 

6. Timer 

7. Batang pengaduk 

1   

  

  

f. Cara Kerja 

a) Kualitatif 

o Siapkan alat dan bahan yad dibutuhkan. 

o Ke dalam lingkaran slide dipipet 50 ul serum. 

o Tambahkan 50 ul atau 1 tetes antigen (reagen VDRL ). 

o Homogenkan dengan batang pengaduk. 

− Putar pada rotator kecepatan 100 rpm selama 4-8 menit. 

− Amati ada tidaknya flokulasi. 

 

b) Kuantitatif 

o Siapkan alat dan bahan yang dibutuhkan.  

o Lakukan pengenceran berseri pada slide dengan cara 50 ul serum + 50 ul saline 

dihomogenkan kemudian hari campuran ini  dipipet 50 ul dan diletakkan 

pada lingkaran ke dua pada slide yang sama kemudian tambahkan 50 ul salin dan 

homogenkan kembali lalu lakukan hal yang sam seperti pada lingkaran pertama 

sampai lingkaran terakhir dima pada pengenceran terakhir hasil pengenceran 

dibuang sebanyak 50 ul. Maka hasil pengenceran adalah 1/2 , 1/4 , 1/8, 1/16, 

1/32, 1/64, 1/128. 

o Kepada masing-masing pengenceran tambahkan 1 tetes ( 50 ul ) antigen VDRL ( 

reagen). 

o Kemudian dihomogenkan dan diputar dengan rotator kecepatan 100 rpm selam 

5-8 menit. 

o Amati ada tidaknya  flokulasi  setiap pengenceran dan tentukan titer 

pemeriksaannya ( yaitu pengenceran trerakhir yang masih menunjukkan 

flokulasi ) 

g.  Interpretasi Hasil 

c) Kualitatif 

Hasil pengamatan cukup menyebutkan non-reaktif, reaktif lemah atau reaktif

 

Gambar . Interpretasi hasil Pemeriksaan VDRL 

 

   

  

 

 

Keterangan :  

REAKTIF              :  Bila tampak gumpalan sedang atau besar 

REAKTIF LEMAH:   Bila tampak gumpalan kecil-kecil 

NON REAKTIF     :  Bila tidak tampak flokulasi/gumpalan 

 

d) Kuantitatif 

Tentukan titernya (amati pngenceran trakhir yang masih menunjukkan flokulasi),  

misalnya  1/64. 

 Pemeriksaan TPHA 

1) Tujuan  :  Untuk mendeteksi adanya antibody terhadap Treponema palidum dalam 

serum dan plasma pasien secara kualitatif dan semi-kuantitatif 

2) Metode Pemeriksaan : Hemaaglutinasi tidak langsung (indirek hemaaglutinasi) 

3) Prinsip Pemeriksaan : adanya antibodi Treponema palidum akan bereaksi dengan 

antigen treponemal yang menempel pada eritrosit ayam kalkun/ domba sehingga 

terbentuk aglutinasi dari eritrosit-eritrosit ini .  

 

 

Gambar .Prinsip Uji TPHA 

 

4) Spesimen Pemeriksaan : Serum  

5) Alat  dan Bahan Pemeriksaan 

1) Mikroplate tipe U 

2) Mikropipet (25µL , 75µl dan 100µL) 

3) Automati vibrator 

  

  

4) Reagen kit TPHA (R1 : Test sel - R2 : Control sel - R3 : Diluent - R4 : Control positif 

- R5 : Control negatif) 

6)  Cara Kerja 

 

e) Kualitatif 

a) Alat dan bahan disiapkan 

b) Setiap komponen kit dan sampel dikondisikan pada suhu kamar.  

c) Semua reagen dihomogenkan perlahan. 

d) Diluents ditambahkan sebanyak 190 µl dan sampel ditambahkan sebanyak 10µl 

pada sumur 1 lalu dihomogenkan 

e) Campuran pada sumur 1 dipipet sebanyak 25 µl dan ditambahkan pada sumur 2 

dan 3 

f) Control sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur 2 lalu dihomogenkan. 

g) Test sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur 3 lalu dihomogenkan 

h) Sumur diinkubasi pada suhu ruang selama 45 – 60 menit. 

i) Aglutinasi yang terjadi diamati. 

j) Sampel yang menunjukan hasil aglutinasi positif dilanjutkan ke uji semi kuantitatif. 

Catatan : control positif dan negatif selalu disertakan dalam setiap uji tanpa perlu 

diencerkan. 

 

f)  Kuantitatif 

o Alat dan bahan disiapkan. 

o Setiap komponen kit dan sampel dikondisikan pada suhu kamar. 

o Semua reagen dihomogenkan perlahan. 

o Sumur mikrotitrasi disiapkan dan diberi label no. 1 sampai 8. 

o Pengenceran sampel dibuat pada sumur yang berbeda dengan sumur mikrotitrasi 

dengan mencampur 190 µl diluents dan 10 µl sampel 

o Sumur mikrotitrasi no. 1 dikosongkan 

o Sumur mikrotitrasi no. 2 – 8 ditambahkan 25µl diluent 

o Pada sumur mikrotitrasi no. 1 dan 2 ditambahkan 25 µl sampel yang telah 

diencerkan.  

   

  

 

o Campuran pada sumur 2 dipipet 25 µl dan ditambahkan pada sumur 3, lalu 

dihomogenkan. Begitu seterusnya sampai sumur 8. 

o Campuran pada sumur 8 dipipet 25 µl dan dibuang 

o Control sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur mikrotitrasi no. 1 lalu 

dihomogenkan. 

o Tes sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur mikrotitrasi no. 2-8 lalu 

dihomogenkan.  

o Sumur diinkubasi pada suhu ruang selama 45 – 60 menit. 

o Aglutinasi yang terjadi dibaca, dan ditentukan titernya  

 

7) Interpretasi Hasil 

 

g) Kualitatif 

Hemaglutinasi positif ditandai dengan adanya bulatan berwarna merah dipermukaan 

sumur, hasil negatif terlihat seperti titik berwarna merah di tengah dasar sumur. 

Derajat hemaglutinasi : 

+4 : bulatan merah merata pada seluruh permukaan sumur  

+3 : bulatan merah ada  di sebagian besar permukaan sumur  

+2 : bulatan merah yang terbentuk tidak besar dan tampak seperti cincin 

+1 : bulatan merah kecil dan tampak cincin terang 

 +/- : tampak cincin dengan warna bulatan merah yang samar 

- : Tampak titik berwarna merah didasar sumur 

 

  

  

Gambar 5.24 Derajat Hemaglutinasi pemeriksaan TPHA 

 

h) Kuantitatif 

Titer : pengenceran tertinggi yang masih menunjukkan aglutinasi 

Sumur 1 2 3 4 5 6 7 8 

Titer Control 

cell 

1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 1/5120 

 

  

Glosarium 

 

Open Reading Frame (ORF) : bagian dari susunan DNA yang siap ditranslasikan tanpa kodon 

stop, sehingga protein yang dihasilkan dalam jumlah besar (overexpression. 

 

Nucleid Acid Test (NAT) : teknik molekuler yang dipakai  untuk menyaring darah donor 

dengan tujuan mengurangi infeksi yang ditularkan lewat transfusi darah pada pasien. 

 

Colodial gold conjugate : merupakan molekul yang tersusun dari beberapa partikel koloid 

emas yang bermuatan negatif dan memiliki afinitas kuat untuk beberapa protein yang 

cenderung bermuatan positif, pH netral atau fisiologis. 

 

Bab 6 

PEMERIKSAAN IMUNOHEMATOLOGI 

(PEMERIKSAAN PRE TRANSFUSI) 

 

Transfusi darah merupakan ilmu tentang golongan darah manusia dalam hubungannya 

dengan proses pemindahan darah / komponen-komponen darah dari donor kepada resipien. 

Dalam bab ini akan dibahas tentang pemeriksaan Imunohematologi atau yang lebih dikenal 

sebagai pemeriksaan pre-transfusi, diantaranya pemeriksaan golongan darah ABO & Rhesus, 

Crossmatch, Coomb’s Test, skrining dan identifikasi antibodi. Tujuan pemeriksaan pre-

transfusi adalah memilih darah atau komponen darah yang kompatibel, sehingga dapat 

menyelamatkan jiwa seseorang dengan tidak merusak darah pasien atau merugikan pasien.1 

Selama pemeriksaan ada beberapa hal yang harus diperhatikan dalam pemeriksaan 

pretransfusi, antara lain : 

A. Sampel darah pasien. 

Apabila pasien memerlukan transfusi darah, maka pasein harus diambil darah sekitar 

5-10 mL yang dimasukkan ke dalam tabung kering untuk mendapatkan serum / plasma 

yang cukup banyak sebagai bahan pemeriksaan pre-transfusi. Selain itu sampel harus 

diberi pengenal yang jelas, meliputi nama pasien, tanggal lahir pasien  dan nomor 

registrasi/barcode pasien. Kemudian dikirim secepatnya ke laboratorium bersamaan 

dengan formulir permintaan darah. 

Pengambilan sampel darah pasien dengan pemberian label yang benar merupakan hal 

kritis yang perlu diperhatikan. Apabila ada  contoh darah pasien yang tidak memiliki 

identitas yang jelas, maka harus mengambil contoh darah pasien baru untuk 

mengabsahkan identitas pasien. Selain itu sampel darah pasien tidak boleh hemolisis, 

karena dapat mengganggu pemeriksaan pre transfusi. 

  

B. Formulir permintaan darah 

Formulir permintaan darah harus ditandatangani oleh dokter yang merawt pasien. 

Formulir permintaan darah berisikan informasi sebagai berikut : 

 

1) Tanggal permintaan 

2) Nama lengkap pasien  

3) Tanggal lahir atau usia 

4) Jenis kelamin 

5) Nomor registrasi rumah sakit 

6) Ruang rawat / bangsal 

7) Alamat pasien 

8) Diagnosis pasien 

9) Golongan darah apabila sudah diketahui. 

10) Keberadaan setiap antibodi, apabilah telah diketahui 

11) Riwayat transfusi sebelumnya 

12) Riwayat reaksi transfusi. 

13) Jumlah dan jenia darah atau produk darah yang dibutuhkan. 

14) Tanggal dan waktu dibutuhkan. 

15) Tanda tangan dokter yang meminta darah. 

Catatan : Lakukan konfirmasi identitas sampel darah pasien di bank darah. 

C. Penyimpanan sampel darah  

Sampel darah pasien dan donor harus ditutp dan disimpan dengan baikpada suhu 2-6°C 

minimal 7 hari setelah transfusi, tujuannya untuk pemeriksaan ulang apabila ada laporan 

terjadinya reaksi transfusi. 

D. Pendataan  

Setiap permintaan darah dan pemeriksaan darah harus ada pendataan yang lengkap, agar 

dapat dilakukan penelusuran kembali bila dibutuhkan sewaktu-waktu.  

E. Pemeriksaan pre transfusi 

   

  

 

pemeriksaan pre-transfusi pada sampel darah donor dan pasien yang meliputi  

pemeriksaan golongan darah ABO & Rhesus, Crossmatch, Coomb’s Test, skrining dan 

identifikasi antibodi 

Pada Bab ini mahasiswa akan melalukan praktikum Imunohematologi, untuk itu 

mahasiswa diwajibkan mematuhi tata tertib Praktikum di laboratorium, sebagai berikut 

:Larangan : 

a) Dilarang makan, minum, dan merokok selama praktikum di laboratorium. 

b) Dilarang membuang sampah ke dalam wastafel / meja kerja dan di dalam ruangan 

laboratorium. 

c) Dilarang membawa telepon genggam / handphone selama praktikum, kecuali memakai  

cover / plastik disposible. 

 

Kewajiban : 

a) Praktikan harus menggunakan alat pelindung diri (APD) selama praktikum di 

laboratorium. 

b) Praktikan harus mengisi daftar hadir dan melaporkan hasil pengamatan kepada dosen / 

asisten pengawas praktikum. 

c) Praktikan harus melaporkan setiap kerusakan alat yang dipakai  dan menggantinya 

dengan spesifikasi yang sesuai.  

d) Bersihkan sisa praktikum pada setiap meja / wastafel tempat Anda bekerja. 

e) Peralatan yang telah selesai dipakai dikembalikan pada dosen pengawas dalam keadaan 

bersih dan kering.  

f) Setiap kelompok praktikum diwajibkan membawa kain lap bersih / tisu, kertas label, dan 

spidol permanen. 

g) Untuk persiapan sebelum praktikum dan pengawasan alat setelah praktikum, dosen 

pengawas akan dibantu oleh kelompok piket yang bertugas secara bergantian setiap 

minggunya. 

 

 

  

Topik 1 

Persiapan Alat, Reagensia dan Sampel 

 

A. PERSIAPAN ALAT 

Peralatan yang diperlukan untuk pemeriksaan imunohematologi / pretransfusi, 

diantaranya : 

1. Sentrifuse untuk pemisahan darah menggunakan tabung reaksi (table top centrifuge). 

2. Sentrifuse untuk pemeriksaan golongan darah metode tabung  (serological centrifuge). 

3. Sentrifuse untuk pemeriksaan metode gel tes (gel test centrifuge). 

4. Inkubator 37°C (waterbath atau dry incubator) 

5. Inkubator 37° untuk pemeriksaan gel tes 

6. Lemari es (refrigerator) 

7. Tabung reaksi ukuran 12 x 7,5 mm 

8. Rak tabung reaksi  

9. Pipet pasteur plastik 

10. Blood Grouping Plate (BGP) 

11. Coomb gel tes 

12. Pipet adjustable ukuran 200 – 1000 µL 

13. Pipet adjustable ukuran 5 – 50 µL 

14. Tissue 

15. Objek glass 

16. Mikrokop 

17. Tips kuning 

18. Tip Biru 

19. Label 

20. Spidol permanen 

21. Kontainer / wadah penampung 

22. Sarung tangan  

23. Masker 

24. Jas laboratorium 

25. Gunting 

   

  

 

26. Kantung plastik limbah. 

 

B. PERSIAPAN REAGENSIA 

Bahan dan Reagen yang diperlukan untuk pemeriksaan imunohematologi / pretransfusi, 

diantaranya : 

a. Sampel darah pasien  

b. Sampel darah donor 

c. Anti-A 

d. Anti-B 

e. Anti-D IgM 

f. Anti-D IgG 

g. Bovine albumin 22% dan 6% 

h. Anti Human Globulin / Serum Coombs 

i. Larutan saline (0,9%) 

j. Aquadest 

k. Larutan alseiver 

l. Low Ionic Strenght Saline (LISS) : Larutan garam faali 0,2% dan larutan sukrosa 7% 

m. Desinfektan (hipochlorit 0,5%) 

n. Detergen 

 

C. PERSIAPAN SAMPEL 

Preparasi contoh darah harus dilakukan sebelum melakukan pemeriksaan lebih lanjut 

untuk mendapatkan hasil pemeriksaan yang optimal. Ada beberapa hal yang harus 

diperhatikan dalam hal ini, diantaranya : 

1) Pemisahan serum / plasma dari sel darah 

1) Prinsip : Darah sitrat / darah EDTA dengan pemutaran akan terjadi pemisahan 

antara plasma dan sel-sel darah. 

2) Tujuan : Memisahkan plasma dari sel-sel darah 

3) Kegunaan :  

1) Persiapan pembuatan suspensi darah  

2) Persiapan penentuan antigen golongan darah 

4) Cara Kerja :  

1   

  

  

--  Siapkan contoh darah dengan antikoagulan EDTA dalam tabung. 

--  Sentrifugasi darah dalam tabung dengan kecepatan 3000 rpm selama 2 menit. 

--  Siapkan 1 tabung yang bersih untuk menampung plasma. 

--  Pisahkan plasma sebanyak-banyaknya dari sel darah merah pekat dan masukan 

ke dalam tabung yang sudah disiapkan. 

--  Beri identitas pada masing-masing tabung sel darah merah pekat dan plasma 

 

Gambar 6.1 Skema pemisahan serum/plasma daeri sel darah merah 

 

2) Pencucian sel darah merah 

5) Prinsip : Dengan penambahan larutan saline (NaCl 0,9%) dan pemutaran maka 

antibodi di sekitar sel darah merah akan hilang.. 

6) Tujuan :  

1. Menghilangkan sisa protein pada sel darah merah  

2. Menghilangkan sel-sel darah yang rapuh 

3. Menghilangkan auto cold antibody 

4. Menghilangkan formasi Rouleaux  

7) Kegunaan :  

1. Persiapan pembuatan suspensi darah  

2. Persiapan penentuan antigen golongan darah 

8) Cara Kerja :  

a) Lakukan pencucian sel darah merah  pekat dengan mengambil ± 8 tetes dan 

masukan kedalam tabung reaksi 12 x 75 mm. 

b) Tambahkan NaCl 0,9% (saline) sebanyak ± 4,5ml  atau sampai ¾ tabung kedalam 

sel darah merah  pekat tadi. 

   

  

 

c) Tutup tabung dengan parafilm, kocok dengan perlahan agar larutan menjadi 

homogen. 

d) Sentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 2 menit. 

e) Buka penutup parafilm dan buang supernatan dengan menggunakan pipet 

(pencucian ke 1). 

f) Lakukan pencucian sebanyak 3 kali dengan mengulangi langkah ke b hingga ke e 

sesuai kebutuhan. 

g) Sel darah merah yang sudah dicuci merupakan suspensi 100 %. 

 

Gambar 6.2 Skema pencucian sel darah merah 

 

3) Pembuatan suspensi sel darah merah 

Sel darah merah  yang sudah dicuci kemudian dibuat suspensi yang sesuai kebutuhan, 

yaitu :  

Tabel  21. Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah 

% Suspensi 

Suspensi  

SEL DARAH 

MERAH  

100% 

Medium  

(Larutan Saline) 

Penggunaan 

5% 

(1/20) 

1 bagian a) bagian a) Pemeriksaan golongan darah (tube 

test) 

b) Pemeriksaan silang serasi 

(crossmatching) 

1   

  

  

10% 

(1/10) 

1 bagian 9 bagian Pemeriksaan golongan darah ABO (slide 

test/bioplate) 

40% 

(2/5) 

1 bagian 3 bagian Pemeriksaan golongan darah rhesus 

(slide test/ bioplate) 

 

 

4) Untuk pembuatan Test Sel Golongan darah A,B,O untuk pemeriksaan antibodi pada serum, 

dilakukan pooling dari darah donor suspensi 100% yang telah diketahui golongan darahnya : 

1 Test Sel A => Dibuat dari 3 golongan darah A yang di pooling sama banyak (A1, A2, A3), 

kemudian dibuat suspensi 5% dan 10% .    

2 Test Sel B => Dibuat dari 3 golongan darah B yang di pooling sama banyak (B1, B2, B3), 

kemudian dibuat suspensi 5% dan 10%. 

3 Test Sel O => Dibuat dari 3 golongan darah O yang di pooling sama banyak (O1, O2, O3), 

kemudian dibuat suspensi 5% dan 10%. 

 

 

Tabel  22. Cek List Perawatan Contoh Darah  

Memisahkan  serum/plasma dengan sel darah merah 

 

Contoh darah dalam tabung  

↓ 

Putar 3000 rpm selama 2 menit  

↓ 

Hasil → supernatan dan sedimen sel  

↓ 

Siapkan 2 tabung beri label   

↓ 

Pisahkan supernatan (plasma/serum) kedalam tabung  

↓ 

Serum jernih dan sek darah merah pekat  

↓ 

Sel darah merah pekat  

 

Pencucian sel darah merah pekat dengan saline 

   

  

 

Sel darah merah  pekat dengan ambil ± 8 tetes  

↓ 

Tambahkan NaCl 0,9% (saline) sebanyak ± 4,5mL  atau sampai ¾ tabung  

↓ 

Tutup tabung dengan parafilm  

↓ 

kocok perlahan agar larutan homogeny (bolak balik tabung)  

↓ 

Putar 3000 rpm selama 2 menit  

↓ 

Buka penutup →buang supernatan saline (pencucian I)  

↓ 

Lakukan pencucian sebanyak 3 kali dengan mengulangi point  2-6  

↓ 

Hasil →sel darah merah pekat 100% yang bebas protein/globulin (WPRC)  

 

5) PembuatanCOOMB’S CONTROL CELLS (CCC) 

COOMB’S CONTROL CELLS (CCC) adalah suspensi sel darah merah golongan O Rhesus 

positif yang sudah disensitasi (dicoated) oleh anti –D IgG ( inkomplit). 

1. Tujuan : 

a) Dapat menguji reagen Coomb’s Serum, masih valid/ invalid 

b) Dapat menguji hasil negative dari pemeriksaan uji silang, Direct Coomb’s Test dan 

indirect Comb’s Test, hasil negative ini  valid/invalid. 

2. Prinsip : Antigen + antibodi D IgG (inkomplit)→ Antigen sensitasi ( coated ) antibodi D 

inkomplit 

3. Metoda: Tube test   

4. Pembuatan Coomb’s Control Cells : 

--  Nyalakan dan atur suhu inkubator pada 37⁰C. 

--  Siapkan reagensia pada suhu kamar sebelum dipakai  dan disimpan kembali pada 

suhu 2⁰C - 8⁰C setelah dipakai . 

--  Siapkan contoh darah yang memakai antikoagulan golongan O Rhesus positif. 

--  Pembuatan suspensi sel 5%, 40% dari darah golongan O Rhesus positif 

--  Pemeriksaan titer anti-D IgG ( inkomplit ) 

a) Siapkan 10 tabung reaksi masing-masing tabung beri indentitas : ½, ¼,  1/8, 1/16, 

1/32, 1/64, 1/128, 1/256, 1/512, 1/1024 

b) Tabung 1 s/d 10 teteskan saline sebanyak 2 tetes. 

c) Isi tabung no.1 teteskan anti-D IgG sebanyak 2 tetes. 

d) Kocok perlahan dengan menggunakan pipet, ambil 2 tetes campuran masukan 

kedalam tabung no.2 

e) Lakukan pemindahan enceran berkala sampai tabung no.10, pada tabung no. 10 

buang 2 tetes  enceran anti-D tsb. 

f) Kocok semua tabung hingga cairan tercampur 

g) Inkubasi pada suhu 37⁰C selama 15 menit semua tabung 

h) Angkat semua tabung, putar 3000rpm selama 15”, baca hasil reaksi. 

i) Tabung yang hasilnya negative dicuci sebanyak 3x dengan saline 

j) Pada pencucian terakhir buang supernatant sebanyak banyaknya. 

k) Tambahkan 2 tetes comb’s serum (AHG). 

l) Kocok perlahan hingga cairan tercampur 

m) Putar 3000rpm  Selama 15”, baca hasil reaksi 

 

Tabel  23. Lembar hasil titer anti – D IgG ( inkomplit ). 

 

Tabung 

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 

½ ¼ 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024 

37⁰C  

selama 15 

menit 

neg Neg Neg Neg Neg Neg Neg Neg Neg Neg 

Hasil 

(contoh) 

4+ 4+ 3+ 3+ 2+ + + Neg Neg Neg 

 

a) Membuat enceran anti –D IgG yang dipakai adalah dengan hasil kekuatan titer : 2. Yaitu 

pada titer 32. 

b) Suspensi yang dipakai  adalah suspensi 40% agar tidak telalu banyak dalam 

penetesan. 

 

Tabel  24. Modifikasi Suspensi Sel Darah Merah Untuk Pembuatan CCC 

Suspensi sel darah merah  

 ( modifikasi ) 

Enceran anti-D IgG dengan saline 

5% 32 → 1 tetes anti-D IgG + 31 saline 

10 % 16 → 1 tetes anti-D IgG + 15  saline 

   

  

 

40% f)   → 1 tetes anti-D IgG + 7  saline 

 

− Buatlah suspensi sel O Rh positif (yang sudah dicuci 1 kali) menjadi 40% dalam saline 

− Buat pengenceran anti –D (IgG) dengan titer 1:7 dalam saline. 

− Kedalam enceran anti –D, tambahkan suspensi sel O Rh positif 40% sebanyak 4 tetes. 

− Kocok perlahan hingga tercampur, inkubasi 37⁰C selama 15 menit (coated/sensitasi). 

− Putar 2 menit 3000rpm kemudian supernatant dibuang. 

− Cuci selnya dengan saline sebanyak 3x . 

− Endapan sel darah merah dibuat suspensi 5% → Coomb’s Control Cells (CCC) akan 

diperoleh 32 tetes CCC dengan perhitungan sebagai berikut : 

P1        .        V1  =  P 2   . V 2 

40% . 4 tetes  =  5% .  V 2 

 V 2  = 32 tetes 

− Jika saline yang tersisa di tabung sekitar 3 tetes, maka saline yang ditambahkan 

sebanyak 29 tetes. 

 

- VALIDASI REAGEN 

Pereaksi atau sering disebut juga reagensia (inggris : reagent) adalah suatu  zat 

yangberperan dalam  suatu  reaksi kimia atau diterapkan untuk tujuan analisis. Istilah reagen 

jugadipakai  untuk menunjuk pada zat kimia dengan kemurnian yang cukup untuk sebuah 

analisisatau percobaan. Sebelum dipakai  untuk analisis, suatu reagen harus melalui proses 

validasi dahulu untuk mengetahui kualitas dari reagen ini . Validasi reagen adalah suatu  

tindakanyang dilakukan untuk   menunjukan tingkat kevalidan atau kesahihan suatu reagen. 

Validasi reagen merupakan salah satu pemantapan mutu internal. Pemantapan mutu internal 

adalah kegiatan pencegahan dan pengawasan yang dilaksanakan oleh setiap laboratorium 

secara terus-menerus agar diperoleh hasil pemeriksaan yang tepat. 

Uji validitas reagen adalah suatu langkah pengujian yang dilakukan terhadap isi 

(content)dari suatu reagen, dengan tujuan untuk mengukur ketepatan reagen yang dipakai  

dalam suatu pemeriksaan. Untuk mengetahui apakah tes itu valid atau tidak harus dilakukan 

melalui pengujian dari reagen itu sendiri agar hasil dari pemeriksaan dapat berlangsung 

dengan baik dan benar. Dengan melakukan uji validitas reagen juga bermanfaat untuk 

mengetahui kondisi reagen. 

Jadi, tujuan validasi reagen adalah untuk menguji validitas suatu reagen sehingga dapat 

diketahui kualitas dari reagen sebelum dipakai  untuk pemeriksaan  dan juga untuk 

menetapkan reagen yang dipakai  valid atau invalid  sehingga diperoleh hasil pemeriksaan 

yang akurat. Oleh karena itu, validitas reagen penting dilakukan sebelum melakukan 

pemeriksaan menggunakan reagen ini . 

Dalam praktikum ini, dilakukan uji validitas reagen, khususnya reagen yang dipakai  

pada pemeriksaan golongan darah untuk tujuan transfusi darah. Uji kualitas reagen harus 

dilakukan pada:  

a) Setiap kali batch larutan kerja (working solution) dibuat. 

b) Setiap minggu 

c) Bila sudah mendekati masa kadaluarsa 

d) Bila ditemukan/terlihat tanda tanda kerusakan ( timbul kekeruhan, perubahan warna, 

timbul endapan) 

e) Bila ada  kecurigaan hasil pemeriksaan 

Reagen yang akan divalidasi dalam praktikum ini adalah 

1. antisera A,B dan D 

2. test sel ABO 

3. Bovine Albumin 22% 

4. Comb’s Serum 

5. CCC ( Comb’s Control Cell) 

Sebelum memulai proses validasi, masing-masing reagen