sakitx.blogspot.com: bank darah 3

Tampilkan postingan dengan label bank darah 3. Tampilkan semua postingan

bank darah 3,

Februari 28, 2024 bank darah 3

okteran militer karena sel darah merah

yang disimpan dengan cara ini memiliki waktu simpan yang lama. Penyimpanan ini juga

mempermudah penyimpanan darah dari golongan-golongan darah yang jarang diperlukan

oleh pasien dengan masalah antibodi yang sulit. Banyak unit transfusi darah yang mendorong

pasien dengan antibodi kompleks terhadap antigen tertentu untuk menyimpan sel darah

merah sendiri jika diperlukan di masa mendatang.

3) Sel darah merah Cuci (Washed Red Cell)

Washed red cell diperoleh dengan mencuci packed red cell 2-3 kali dengan saline (Nacl

0,9%), dan kemudian sisa plasma terbuang habis. sebab proses pencucian berlangsung

dengan sistem terbuka, produk harus dipakai dalam waktu 24 jam. Mencuci sel darah

merah menghilangkan protein plasma, beberapa leukosit,dan sisa trombosit. Produk ini

ditunjukkanuntuk pasien yang telah mengalami alergiberat akibat transfusi berulang dan

reaksi yang tidak bisa dicegah oleh antihistamin. Berguna untuk penderita yang tidak bisa

diberi komponen plasma, diantaranya dipakai dalam pengobatan aquired hemolytic anemia

dan exchange transfusion. Kelemahan washed red cell yaitu bahaya infeksi sekunder yang

terjadi selama proses serta masa simpan yang pendek (4-6 jam).

Gambar Kantong pencucian sel darah Merah (washing bag PRC)

Pencucian PRC dibagi dua cara , yaitu :

a) Cara manual :

- Menggunakan kantong cuci ( washingbag )

- Tambahkan NaCl 0.9 % ke dalam kantong darah yang akan dicuci sampai penuh ,

melalui slang 1

- Putar 1500 xG 30 menit atau 4850 xG 4°C 3 menit

- Buang supernatan melalui slang 2

- Ulangi prosedur sampai 3 kali melalui slang 3 , 4, dst

- Tinggalkan supernatan sampaiHt 70 %

b) Dengan mesin :

- masukkan PRC kedalam mangkok khusus

- putar

- alirkan NaCl 0.9 % secara terus menerus.

- supernatan dibuang secara kontinyu.

- PRC yang telah dicuci dipindahkan ke dalam kantong darah dengan Ht 70 %.

4) Leukosit Pekat (Buffy Coat)

Isi utama leukosit pekat (Buffy Coat)adalah granulosit. Leukosit pekat disiapkan dalam

bentuk buffy coatdengan volume berkisar antara 50-80 mL. Temperature simpan berkisar

antara 20±2o C, sedangkan lama simpan harus segera ditransfusikan dalam 24 jam. Leukosit

pekat berguna untuk meningkatkan jumlah granulosit. Pelayanan pre transfusi adalah

melalui uji cocok serasi darah donor dan pasien. Efek samping yang ditimbulkan urtikaria,

mengigil, demam.

Gambar . leukosit pekat(buffy coat)

Saat ini leukosit pekat(buffy coat) jarang dipakai , data yang menunjukkan pemakaian

transfusi leukosit pekatpada pasien dewasa septic granulositopenik kurang memuaskan,

tetapi granulosit buffy coat yang dikumpulkan dari satu atau dua unit darah segar mungkin

bermanfaat dalam penatalaksanaan sepsis pada bayi baru lahir. Cairan granulosit buffy

coatini adalah suspensi granulosit dalam plasma yang dibuat dengan sitaferesis, yang lebih

tepat disebut granulosit feresis (granulositoferesis). Komponen ini, sebaiknya mengndung

minimal 1x1010 granulosit. Granulositoferesis menghasilkan sekitar 1x1010 granulosit dalam

300 mL sampai 500 mL plasma, sekitar 25 mL sel darah merah pasti akan mencemari produk

granulosit dan juga ada trombosit dalam jumlah yang bermakna. Transfusi granulosit

jarang menjadi regimen pengobatan untuk leukemia, tetapi pemakaian optimal masih

diperdebatkan dan transfusi komponen darah ini seharusnya diberikan hanya dengan

protokol yang sesuai.

5) Konsentrat Trombosit (Thrombocyte Concentrate)

Isi utama trombosit pekat adalah trombosit dengan volume sekitar 50 mL, temperatur

simpan berkisar antara 20±2 oC dan lama simpan 3 hari tanpa goyangan dan 5 hari dengan

goyangan. Trombosit pekat berguna untuk meningkatkan jumlah trombosit pasien.

Peningkatan post transfusi pada dewasa, rata-rata 5000-10000/ µL. Efek samping yang

mungkin timbul setelah transfusi trombosit pekat: urtikaria, menggigil, demam, aloimunisasi

antigen trombosit donor.

Saat ini tersedia dua jenis konsentrat trombosit donor yaitu:

1. Konsentrat trombosit unit tunggal yang disebut trombosit dari darah lengkap yang

mengandung trombosit lebih dari 5,5x1010 yang tersuspensikan dalam sejumlah kecil

plasma.

2. Konsentrat tromboferesis (platelet pheresis consentrates) disisapkan dari sitaferesis,

mengandung minimal 3x1011 Trombosit (trombosit, feresis). Konsentrat tromboferesis

dari satu donor darah mengandung eqivalen 6-8 unit trombosit yang berasal dari 6-8

donor acak darah lengkap. Prosedur hemaferesis memungkinkan kita memproses

sejumlah besar darah dari satu donor darah karena sel darah merah dan elemen lain

segera dikembalikan ke donor. Sejumlah besar plasma, trombosit atau sel darah putih

juga dapat diolah dengan teknik ini. Konsentrasi tromboferesis berasal dari satu donor

sehingga mengurangi pajanan donor dibandingkan dengan konsentrat yang dikumpulkan

secara acak dan berasal dari darah lengkap. Akibatnya, risiko imunisasi atau infeksi tekait

transfusi berkurang.

Gambar (a) Konsentrat trombosit secara manual , (b) Konsentrat trombosit secara

aferesis (tromboferesis)

Trombosit dapat disimpan sampai 5 hari pada temperatur 22± 2oC pada agitator

trombosit untuk mencegah penggumpalan tombosit. Masa hidup trombosit yang lebih

singkat daripada sel darah merah, dimana trombosit bertahan hidup hanya 8 sampai 10 hari

secara invivo, sedangkan eritrositmasa hidupnya sampai 120 hari. Kelangsungan hidup

trombosit secara in vitro bahkan lebih singkat. Trombosit memiliki waktu simpan maksimum

5 hari, tetapi kelangsungan hidup dan efektifitas pascatransfusi sangat menurun selama

penyimpanan.

Efek terapeutik konsentrat trombosit, rata-rata satu unit konsentrasi trombosit

mengandung 5,5 x 1010 trombosit. Walaupun angka spesifik sangat bervariasi, halini

merupakan angka rata-rata realistik yang dipengaruhi oleh teknik pemilihan donor,

flebotomi, persiapan, penyimpanan, dan pengangkutan yang benar. Pada pasien yang stabil

secara hematologis, transfusi satu unit trombosit meningkatkan jumlah trombosit sekitar

5000-10000 permikroliter per meter persegi luas permukaantubuh. Peningkatan pasca

transfusi biasanya diukur pada satu jam dan 24 jam setelah transfusi. Indikasi utama terapi

trombosit adalah untuk pasien dengan trombositopenia simptomatik. Trombositopenia

memiliki banyak mekanisme, dan transfusi trombosit paling efektif jika terjadi gangguan

pembentukan trombosit, seperti yang terjadi pada aplasia sumsum tulang (misalnya

pascakemoterapi, atau pada kegagalan sumsum tulang). Selain itu trans fusi trombosit

diberikan pada pasien trombositopenia yang berkaitan dengan destruksi sekunder atau

sekuestrasi perifer. Apabila trombosit diberikan kepada pasien yang sedang mengalami

pendarahan dan rendahnya jumlah trombosit, trombosit yang ditransfusikan akan

mengalami destruksi serupa dengan yang dialami trombosit pasien. Pada kasus-kasus ini,

transfusi trombosit hanya memicu sedikit perbaikan klinis. Pasien dengan limpa yang

besar atau dengan destruksi trombosit akibat autoimun tidak banyak memperoleh manfaat

dari transfusi trombosit. Infeksi atau demam tinggioleh sebab apapun juga mempercepat

kelangsungan hidup trombosit yang ditransfusikan. Bagaimanapun, evaluasi peningkatan

trombosit setelah transfusi, terutama 1 jam dan 24 jam, sangat bermanfaat dalam

menentukan kelangsungan hidup trombosit in vivo. Hal ini penting secara klinis dalam

penilaian apakan orang yang mendapat transfusi trombosit mengalami aloimunisasi

terhadap trombosit ini dan juga dalam menentukan dan mendefinisikan terapi

trombosit yang paling efektif.

6) Liquid Plasma (LP)

Isi utama liquid plasma adalah plasma yang mengandung faktor pembekuan stabil dan

protein plasma, volume pada kantong darah 150 – 220 ml . Suhu simpan pada 4°±2° C sampai

dengan 5 hari setelah tanggal kadaluarsa darah lengkap asal. Penggunaan liquid plasma

bertujuan untuk :

a) Meningkatkan volume plasma , tetapi pemakaian cairan pengganti lebih dianjurkan.

b) Meningkatkan faktor pembekuan stabil [ Faktor II , VII , IX , X , XI ]

Gambar . Liquid Plasma (LP)

Pelayanan liquid plasma dengan cara mencocokan ABO dan Rhesus donor dengan

eritrosit pasien. Efek samping yang ditimbulkan, antara lain : urtikaria , menggigil , demam ,

hipervolemia. Waktu pemisahan dari darah lengkap kapan saja sampai 5 hari setelah tanggal

kadaluarsa darah lengkap asal. Metoda pemisahan bisa dialkukan dengan metode

plasmaferesis dan juga pemutaran darah lengkap/ whole blood.

7) Plasma Segar Beku (Fresh Frozen Plasma)

Isi utama FFP adalah plasma dan faktor pembekuan labil. Volume FFP berkisar antara

150 sampai 220 mL. Temperatur simpan FFP adalah -18 oC atau lebih rendah. Lama simpan

satu tahun. FFP berguna untuk meningkatkan faktor pembekuan labil apabila faktor

pembekuan pekat/kriopresipitat tidak ada. Pelayanan untuk FFP adalah cocok untuk golongan

darah ABO dengan erirosit pasien. Ditransfusikan dalam waktu 6 jam setelah dicairkan. Ffp

berguna untuk meningkatkan faktor pembekuan. Efek samping pemberian FFP adalah

urtikaria, mengigil, demam, hipervolemia. FFP merupakan bagian cair dari unit darah lengkap

yang diambil dan dibekukan dalam 6 sampai 8 jam dan disimpan pada temperature -18oC.

sebab diproses sedemikian cepat, plasma beku segar juga mengandung faktor koagulasi labil

(VIII,V), semua faktor pembekuan lainnya, dan protein plasma.

Gambar . Fresh Frozen Plasma (FFP)

Indikasi utama pemakaian plasma beku segar adalah pada defisiensi faktor pembekuan

dengan gangguan hemostatik di mana masih belum diketahui faktor pembekuan apa yang

menjadi penyebab atau terjadi defisiensi multiple. Plasma beku segar seyogyanya jarang,

kalaupun pernah, diberikan untuk ekspansi volume. Namun, larutan ini dapat secara

memuaskan dipakai untuk rekonstruksi sel darah merah untuk transfusi tukar pada bayi

baru lahir.

Plasma yang dibekukan dalam 24 jam setelah pengmbilan dan plasma yang kurang

mengandung kriopresipitat adalah produk sampingan persiapan komponen dan sering lebih

murah daripada FFP. Kadar faktor-faktor koagulasi yang labil lebih bervariasi daripada FFP,

tetapi produk ini memiliki kadar faktor koagulasi stabil, albumin, zat bakterisidal, opsonin dan

konstituen lain yang sama dengan FFP. FFP yang kurang mengandung kriopresipitat

merupakan komponen pilihan yang dipakai untuk pengobatan Purpura Trombositopenik

Trombotik (PTT) karena tidak mengandung multimer faktor willebrand yang diperkirakan

penting dalam pathogenesis PTT dan berisi aktivitas protease pemecah vWF.3

8) Kriopresipitat (Cryoprecipitate)

Isi utama kripresipitat adalah faktor pembekuan VIII, faktor pembekuan XIII, faktor von

willebrand dan fibrinogen. Temperature simpan -18oC atau lebih rendah dan lama simpan

selama 1 tahun. Kriopresipitat berguna untuk meningkatkan faktor pembekuan VIII, faktor

pembekuan XIII, faktor von Willebrand (vWF) dan fibrinogen. Pelayanan kriopresipitat dengan

mencocokkan golongan ABO dengan eritrosit pasien dan harus ditansfusikan dalam waktu 6

jam setelah dicairkan. Efek samping setelah pemberian kriopresipitat adalah demam dan

alergi. Kriopresipitat merupakan bagian plasma yang dingin dan tidak larut yang diproses dari

FFP. Kriopresipitat adalah residu gelatinosa yang diperoleh dengan membekukan dan

mencairkan secara lambat plasma yang baru diambil. Kriopresipitat mengandung 80 sampai

100 IU faktor VII, vWF dan sekitar 250 mg fibrinogen (minimum 150 mg) dalam volume 10-15

mL/unit.3

Gambar Kriopresipitat

Kriopresipitat bermanfaat untuk mengobati pendarahan ringan sampai sedang pada

pasien dengan penyakit von wiillebrand. Apabila diperlukan konsentrasi vWF yang sangat

tinggi, seperti pada perdarahan yang mengancam nyawa atau untuk prosedur bedah, lebih

baik dipakai beberapa konsentrat komersial yang mengandung vWF. Plasma beku segar

dan kriopresipitat juga merupakan sumber terbaik untuk vWF, yang tinggi ada di banyak

konsentrat faktor VIII komersial. Kriopresipitat juga bermanfaat dalam manajemen keadaan

hipofibrinogemia dan pada koagulasi intravascular diseminat dengan konsumsi fibrinogen.

Kriopresipitat juga dapat dikenai prosedur-prosedur inaktivasi virus seperti pemanasan dan

pemberian pelarut deterjen. Kecenderungan yang sekarang meningkat adalah pemakaian

kriopresipitat untuk menyediakan fibrinogen, yang kemudian dapat diaktifkan menjadi fibrin

oleh thrombin di tempat pendarahan selama pembedahan. “Lem Fibrin” ini sekarang menjadi

praktek standar di banyak prosedur bedah vascular.3

9) Konsentrat faktor VIII

Komponen ini adalah suatu konsentrat liofilisasi plasma yang berasal dari 30000 donor,

yang terutama mengandung faktor VIII, tetapi juga sejumlah kecil fibrinogen dan protein lain.

Tersedia preparat dengan kemurnian sedang, kemurnian tinggi dan kemurnian sangat tinggi

yang sesuai dengan metode pemurniannya. Sebagian besar prosedur pemurnian antibody

monoclonal (afinitas) menghasilkan konsentrasi yang kemurniannya sangat tinggi dengan

hanya sedikit protein pencemar. Kandungan faktor VIII spesifik (unit aktifitas faktor VIII per

mg protein berbeda-beda dan hal ini dicantumkan di setiap vialnya. Rentang aktifitas faktor

VIII total biasanya adalah 800 sampai 1600 IU/mg. Molekul faktor VIII telah berhasil diklon dan

juga tersedia sebagai protein rekombinan. Preparat ini lebih mahal daripada konsentrat yang

berasal dari plasma, tetapi memiliki keunggulan karena tidak menularkan penyakit infeksi

terkait plasma. Namun peparat ini masih mungkin bersifat imunogenik dan memicu respon

imun, termasuk aloimunisasi (inhibitor faktor VIII).

10) Konsentrat Faktor IX

Komponen ini mengandung konsentrat faktor-faktor dependen vitamin K, yaitu faktor

II,VII, IX dan X yang berasal dari kumpulan ribuan donor. Dengan demikian, komponen ini

memiliki faktor resiko serupa dengan konsentrat faktor VIII, namun konsentrat ini dibuat

dengan fraksionisasi plasma bukan kriopresipitasi. Produk-produk ini merupakan terapi

pilihan untuk perdarahan atau profilaxispada pasien penyakit Critsmas (defisiensi faktor IX).

Indikasi lain adalah defisiensi congenital faktor protrombin, VII dan X. Pengolahan komponen

ini juga dilakukan dengan pemanasan dan atau pelarut detergen, seperti faktor VIII. Beberapa

konsentrat faktor IX juga mengandung sejumlah kecil faktor koagulasi aktif sehingga dapat

berguna dalam penanganan pasien hemophilia dengan inhibitor terhadap faktor VIII. Sekarang

juga tersedia konsentrat faktor IX rekombinan.3

11) Preparat Globulin serum dan Inhibitor Protease Plasma

Fraksionase plasma komersial juga dapat memekatkan gamaglobulin untuk diberikan

kepada pasien dengan defisiensi antibody humoral yang parah. Kumpulan plasma yang

mengandung gamaglobulin spesifik dengan titer tinggi dapat dipakai sebagai preparat

serum gamaglobulin hiperimun untuk penanganan pasien yang pernah terpajan ke globulin

imun-varisela-zoster (VZIG) atau serum imun hepatitis B. Plasma normal juga mengandung

inhibitor-inhibitor alamiah terhadap protein yang diaktifkan selama proses fisiologik, seperti

thrombin pada koagulasi, tripsin pada pencernaan protein, atau C1 esterase pada pengaktifan

komplemen. Beberapa inhibitor alamiah ini juga dipekatkan selama fraksionasi plasma untuk

dipakai dalam terapi keadaan-keadaan defisiensi congenital dan didapat (misalnya,

trombofolia defisien-antitrombin, defisiensi alfa 1-antitripsin (enfisema) dan defisiensi C1-

esterase (edema angio-neurotik).

Penyimpanan Komponen Darah

Penyimpanan darah secara invitro merupakan upaya untuk mengurangi perubahan-

perubahan yang terjadi selama darah disimpan. Untuk dapat mempertahankan kualitas darah

donor harus, maka harus memperhatikan syarat – syarat dalam penyimpanan darah invitro.

Pada keadaan invivo ada keseimbangan antara produksi dan destruksi, sintesa dan

pemecahan protein dan lain-lain. Sel darah memerlukan energi untuk mempertahankan

bentuk sel dan melakukan fungsi sel. Untuk mendapatkan energi ini sel perlu

metabolisme yang memerlukan bahan serta memerlukan oksigen terutama untuk trombosit

dan leukosit.

Metabolisme eritrosit merupakan proses glikolitik atau pemecahan glukosa, pada proses

ini memerlukan hampir 20 macam enzim, memerlukan 2 mol ATP, memproduksi 4 mol ATP

dengan hasil akhir 2 mol ATP. ATP yang dihasilkan ini merupakan sumber energi dan hasil akhir

proses glikolitik adalah asam laktat.

Pada penyimpanan darah invitro seperti dalam kantong darah tidak ada keseimbangan

antara produksi dan destruksi ataupun sintesa dan pemecahan protein, hanya ada destruksi

tanpa produksi. Sehinggga sel darah memerlukan energi untuk metabolisme dan itu

memerlukan bahan-bahan serta oksigen. Cara yang paling efektif yaitu disimpan pada

temperatur rendah 2°- 6°C, sehingga metabolismenya diperlambat dan pemberian cadangan

kalori yaitu dekstrosa.

B. SYARAT –SYARAT PENYIMPANAN DARAH SECARA INVITRO

Cara penyimpanan darah secara invitro harus dapat memenuhi syarat-syarat, berikut :

1) Harus mempertahankan sel darah tetap hidup.

2) Harus mempertahankan sel darah tetap berfungsi

Ada 2 faktor penting yang harus diperhatikan dalam penyimpanan darah secara invitro,

yaitu temperatur simpan dan pengawet / pelindung. Dalam perkembangannya pengawety

darah dipakai untuk menyimpan darah dalam bentuk cair, semakin lama semakin dilengkapi

komposisinya dengan tujuan agar masa simpan darah invitro dapat diperpanjang.

Antikoagulan adalah zat untuk mencegah terjadinya darah membeku, yang dipakai

dalam kepentingan transfusi adalah sitrat. dipakai karena dapat mempertahankan darah

teatp cair dengan cara mengikat kalsium (Ca2+) dalam darah, aman bagi manusia, efek samping

keracunan terjadi apabila dipakai dengan konsentrasi tinggi berupa gejala kesemutan

sekitar mulut, rasa tertekan pada diafragma akibat turunnya kadar kalsium (Ca2+) dalam darah.

Netralisasi sitrat dengan memberikan kalsium glukonas 10% sebanyak 10 mL untuk dewasa

dan 4-6 mL untuk bayi. Keracunan dapat terjadi pada transfusi masif dan cepat, transfusi pada

pasein gangguan hati, transfusi tukar pada bayi 5 mL/unit. Sedangkan bahan pengawet yaitu

bahan-bahan yang diperlukan untuk metabolisme sel. Berikut ini adalah jenis antikoagulan

dan pengawet darah dalam penyimpanan bentuk cair, antara lain :

1) Natrium sitrat konsentrasi 3,4 – 3,8 %, dapat mengawetkan darah selama 2-3 hari pada

suhu 4°C.

2) ACD = Acid – Citric – Dextrose, dengan penambahan dektrosa masa simpan dapat

diperpanjang menjadi 3 minggu (21 hari).

3) CPD = Citric – Phosphate – Dextrose, dengan penambahan senyawa phospat, maka sel

darah mendapat tambahn sumber energi. Larutan CPD lebih baik jika dibandingkan

larutan ACD, yaitu hemolisis lebih kecil dan viabilitas sel post transfusi juga lebih baik, dan

fungsi transpot oksigen lebih baik. Masa simpan darah dalam larutan CPD adalah 28 hari.

4) CPD-A = Citric – Phosphate – Dextrose – Adenine, dengan penambahan 17 mg adenin ke

komposisi CPD dapat memperpanjang masa simpan menjadi 35 hari (5 minggu).

5) Larutan aditif, terdiri AS-1 (Adsol), AS-3 (Nutricel) dan AS-5 (Optisol) dapat

memperpanjang masa simpan menjasi 42 hari.

Berikut ini adalah isi dari larutan pengawet yang dipakai dalam kantong darah donor:

Tabel 11. Komposisi antikoagulan dan pengawet dalam kantong darah 450 mL (mg/63 mL)

Tabel 12. Komposisi larutan aditif (mg / 100 mL)

Pada kantong darah 450 ml ada pengawet dan antikoagulan sebanyak 63 ml dan

pada kantong darah 500 ml ada pengawet dan antikoagulan sebanyak 70 ml. Jika volume

darah kurang dari 300 ml, maka ratio volume antikoagulan-pengawet dengan darah adalah

1,4 : 10.

C. PENYIMPANAN DARAH DONOR

Penyimpanan darah donor secara invitro , dibagi menjadi dua yaitu penyimpanan dalam

bentuk cair dan enyimpanan dalam bentuk beku.

2) Penyimpanan dalam bentuk cair.

 Temperatur Simpan

− Setiap komponen darah memiliki temperatur simpan optimal yang berbeda-

beda.

− Eritrosit dalam bentuk cair, temperatur optimal 4 ± 2 °C dan metabolisme 1/40

pada suhu 37 °C. Temperatur maksimum dalam penyimpanan darah adalah 10 °C,

jika di atas temperatur ini perusakan eritrosit berlangsung cepat.

Temperetur 0°C dapat merusak eritrosit, karena terjadi pembekuan air yang dapat

merusak membran sel kecuali dengan proses tertentu.

 Temperatur simpan komponen darah dalam bentuk cair :

Tabel 13. Temperatur simpan komponen darah dalam bentuk cair

Temperatur Jenis Komponen

4 °C ± 2 °C - Darah Lengkap (whole blood)

- Darah Merah Pekat (PRC)

- Plasma

22 °C ± 2 °C - Trombosit Konsentrat

- Leukosit pekat (Buffy Coat)

3) Penyimpanan dalam bentuk beku.

Tujuan penyimoanan darah dalam bentuk beku adalah untuk memperpanjang masa

simpan darah invitro. Komponen darah yang bisa disimpan dalam bentuk beku diantaranya :

erirosit, trombosit, sel induk darah (stem sel). Disamping itu kriopresipitat, dan FFP juga

disimpan dalam bentuk beku. Penyimpanan beku trombosit dinilai kurang efisien karena

kerusakan trombosit pada penyimpanan beku lebih dari 5%.

Untuk menyimpan beku eritrosit, dipakai pelindung gliserol dalam kadar yang kecil

gliserol tidak toksik bagi tubuh. Untuk menyimpan beku sel induk darah (stem sel) dan

trombosit dipakai Dimetil Sulfoksida (DMSO).

Tabel 14. Temperatur simpan komponen darah dalam bentuk beku

Temperatur Jenis Komponen

-18 °C ± -30 °C - Plasma Segar Beku (FFP)

- Kriopresipitat

-85 °C - Sel darah merah pekat (PRC)

- Sel Induk Darah (Stem Sel)

-196 °C - Sel Induk Darah (Stem Sel)

3) Masa simpan komponen darah

Tabel di bawah ini menggambarkan lama simpan masing-masing komponen darah.

Tabel 15. Lama Simpan Komponen Darah

4) Alat-alat penyimpanan darah secara invitro

Berikut ini adalah alat-alat yang dipakai untuk penyimpanan komponen darah.

(A) UPRIGHT REFRIGERATOR

(B) CEST REFRERIGERATOR

(D) Ice-lined blood bank refrigerators

(E) COLD ROOM

Gambar 3.33. alat penyimpanan darah secara invitro

D. EFEK PENYIMPANAN DARAH INVITRO

1) Perubahan bentuk dan daya hidup sel

− Daya hidup eritrosit akan menurun sebanding dengan masa simpan. Pada saat

penyadapan hancur 1-5%, apabila disimpan 2 minggu dalam ACD sel erirosit hancur

sekitar 10%, dan 4 minggu dalam ACD sel eritrosit musnah mencapai 25%.

− Daya hidup trombosit menurun sebanding dengan masa simpan dan temperatur

simpan. Daya hidup trombosit pada suhu 2-6°C lebih buruk dibandingkan pada suhu 18-

22°C.

− Daya hidup leukosit menurun dengan cepat sebanding dengan masa simpan. Masa

simpan 48 jam terjadi perubahan bentuk, sedangkan masa simpan 72 jam fungsi leukosit

hilang.

2) Perubahan kadar ATP

Akibat penurunan kadar ATP, maka terjadi hilangnya lipid membran sel, perubahan

bentuk sel dari bentuk bikonkaf menjadi bulat, berkurangnya elastisitas sel sehingga

menjadi kaku.

3) Perubahan kadar 2,3 DPG

Akibat penurunan kadar 2,3 DPG, maka daya ikat oksigen pada molekul hemoglobin

menjadi kuat, pelepasan oksigen ke jaringan menjadi berkurang. Darah dengan 2,3 DPG

rendah tidak menambah oksigenisasi jaringan walaupun kadar hemoglobin naik. Darah

dengan 2,3 DPG rendah tidak tepat untuk pasien yang memerlukan oksigenisasi cepat /

resusitasi.

4) Perubahan elektrolit

Peningkatan Kalium (K+) plasma, disebabkan karena sel tidak mampu mempertahankan

Kalium (K+) dalam sel, akibatnya masuknya natrium (Na+) beserta air ke dalam sel. Darah

dengan kalium plasma yang tinggi kurang tepat untuk penderita penyakit ginjal.

5) Perubahan asam laktat dan pH

Perubahan pH disebsbkan penumpukan asam laktat sebagai hasil akhir proses glikolitik

oleh sel eritrosit. Dengan bertambahnya asam laktat akan memicu penurunan pH

(asam)

6) Perubahan amonia

Disebabkan penghancuran / destruksi protein. Darah dengan amoniak plasma yang tinggi

kurang tepat untuk penderita penyakit hati.

7) Peningkatan Hb plasma

Peningkatan Hb plasma dikarenakan banyaknya eritrosit yang lisis.

8) Perubahan faktor pembekuan

Diantara faktor pembekuan F I sampai dengan F XIII, F V dan F VIII merupakan faktor

pembekuan labil secara invitro. Faktor ini hanya bertahan selama 4-6 jam dalam keadaan

invitro, sehingga darah simpan tidak mengandung F V dan F VIII (labile factor).

9) Perubahan metabolisme sel

Perubahan pH menjadi asam memicu terganggunya fungsi enzim-enzim untuk

metabolisme sel, sehingga mmetabolisme sel terganggu dan sel akan lisis.

Tabel di bawah ini menggambarkan perubahan biokima sel darah putih dan sel darah

merah selama penyimpanan secara invitro.

Tabel Perubahan biokima sel darah putih dan sel darah merah

Glosarium

Unit Transfusi Darah : fasilitas pelayanan kesehatan yang menyelenggarakan donor darah,

penyediaan darah, dan pendistribusian darah.

Voluntery Blood Donors : donor sukarela yang memberikan darah, plasma atau komponen

darah lainnya atas kehendaknya dan tidak menerima pembayaran, baik dalam bentuk tunai

atau hal lainnya sebagai pengganti uang.

Transfer bag : merupakan kantung darah yang terbuat Polivinil Klorida (PVC ) dan telah di

sterilkan dengan berbagai ukuran 150 mL, 250 mL, 350 mL, 450 mL yang dipakai untuk

pemisahan dan penyimpanan komponen darah.

Faksionasi : proses pemisahan sejumlah plasma yang dipisahkan selama transisi fasa menjadi

sejumlah kecil bagian (fraksi-fraksi), yang mana komposisinya bervariasi sesuai gradiennya.

Demam anafilaktoid : sindrom klinis akibat reaksi analogis (reaksi alergi) yang bersifat

sistemik serta cepat dan memicu gangguan respirasi, sirkulasi, pencernaan dan kulit.

Bab 4

REAKSI TRANSFUSI

ransfusi merupakan pengobatan yang dipakai untuk menyembuhkan pasien dari

kondisi yang dapat mengancam jiwa atau dapat juga sebagai terapi jangka panjang

terhadap suatu penyakit tertentu. Mengingat fungsinya yang sangat vital, oleh karena

itu, proses transfusi harus dilakukan sebaik dan se-aman mungkin, sehingga pasien mendapat

manfaat dari proses transfusi ini .

Proses transfusi tidak lepas dari resiko komplikasi atau reaksi yang menimbulkan gejala

klinis pada pasien. Gejala klinis yang timbul pada pasien bervariasi, dari yang ringan sampai

dengan berat, yang bisa saja membahayakan kondisi pasien. Gejala klinis yang timbul karena

reaksi transfusi bervariasi, bisa berupa demam, mual, ada bercak merah di kulit, sesak

napas hingga dapat mengakibatkan kematian pasien. Umumnya reaksi ini , terjadi

karena ketidakcocokan (inkompatibilitas) antara darah donor dan pasien. Selain itu, reaksi

transfusi, juga dapat terjadi pada komponen darah dengan kualitas yang kurang baik.

Setiap reaksi yang terjadi, dapat memberikan gejala klinis yang khusus maupun umum.

Gejala klinis yang timbul pada pasien transfusi, dapat terjadi pada kisaran 24 jam semenjak

proses transfusi (reaksi transfusi akut) atau setelah 24 jam paska transfusi (reaksi transfusi

tunda). Reaksi ini dapat melibatkan sistem imun (reaksi Ag dan Ab) ataupun tidak (non

imun).

Pada bab ini, pembahasan mengenai reaksi transfusi, terdiri atas dua topik, yaitu : topik

1 membahas reaksi transfusi imun yang terdiri atas reaksi transfusi imun akut dan tunda

beserta cara pencegahannya dan topik 2 membahas reaksi transfusi non imun akut dan tunda

serta cara pencegahannya. Penatalaksanaan dan pengobatan karena reaksi transfusi tidak

dibahas pada modul ini, mengingat ruang lingkup pekerjaan teknologi laboratorium medik

tidak ke ranah klinis atau tidak melakukan penanganan terhadap pasien.

Setelah mempelajari bab ini, anda diharapkan dapat :

1. Menguraikan konsep dasar reaksi transfusi.

2. Mendeskripsikan jenis reaksi transfusi imun (akut dan tunda), non imun (akut dan tunda).

3. Mendeskripsikan gejala klinis yang ditimbulkan karena reaksi transfusi.

4. Menguraikan cara pencegahan reaksi transfusi.

Topik 1

Reaksi Transfusi Imun

A. KONSEP DASAR

Reaksi transfusi imun yang dimaksud adalah semua jenis reaksi yang terjadi pada pasien

saat proses transfusi dan setelah transfusi. Reaksi ini , terjadi melalui mekanisme imun

tubuh, melibatkan antigen (Ag) dan antibodi (Ab). Reaksi imun yang terjadi, mengakibatkan

timbulnya gejala klinis pada pasien. Gejala klinis yang timbul bervariasi, mulai dari gejala

ringan sampai berat dan bersifat akut atau tunda.

Seperti dijelaskan di paragraf awal, bahwa reaksi transfusi imun terjadi karena reaksi Ag

dan Ab. Ag yang dimaksud di sini adalah Ag sel darah dan Ab yang berasal dari plasma. Seperti

sudah dijelaskan di Bab 1, bahwa membran sel darah kita terdiri atas unsur protein,

karbohidrat dan lipid. Molekul ini dapat menjadi Ag dan memicu respon imun jika

dipaparkan ke pasien lain.

Jenis Ag yang ada pada sel darah merah, lekosit dan trombosit serta Ab yang

terbentuk karena paparan terhadap Ag ini dikategorikan ke dalam suatu sistem. Ag dan

Ab pada sel darah merah dikelompokkan ke dalam sistem golongan darah. Ag dan Ab pada

lekosit dikelompokkan ke dalam sistem human leucoyte antigen (HLA) dan human neutrofil

antigen (HNA). Ag dan Ab pada trombosit dikelompokkan ke dalam sistem human platelet

antigen (HPA). Adanya ketidakcocokan antara darah donor dengan pasien yang melibatkan Ag

dan Ab pada darah dapat memicu reaksi transfusi imun.

Jenis Ab pada sistem golongan darah dapat mempengaruhi berat atau tidaknya reaksi

transfusi. Untuk meminimalisir dan mencegah reaksi transfusi, maka sebelum dilakukan

transfusi darah, dilakukan pemeriksaan terlebih dahulu yang mencakup kecocokan jenis

golongan darah dan reaksi antara darah donor dan pasien secara in vitro/di luar tubuh.

Pemeriksaan ini disebut dengan pemeriksaan pre-transfusi (akan dibahas pada bab 6).

Jenis reaksi imun yang akan dibahas pada topik ini, yaitu : reaksi transfusi imun akut

(hemolitik, febrile non hemolytic transfusion reaction (FNHTR), alergi, reaksi anafilaktik dan

anaphylactoid, transfusion related acute lung injury / TRALI). Reaksi transfusi imun tunda

(hemolitik, aloimunisasi, post transfusion purpura (PTP), transfusion associated graft versus

host disease / TA-GVHD).

B. REAKSI IMUN AKUT

B.1 Reaksi hemolitik akut

Reaksi hemolitik akut merupakan jenis reaksi transfusi yang berbahaya dan dapat

memicu kematian. Reaksi hemolitik merupakan reaksi lisis sel darah merah dari darah

donor ataupun darah pasien karena adanya ketidakcocokan jenis golongan darah antara

donor dan pasien.

Hemolisis dapat terjadi karena interaksi Ab pada plasma pasien dan Ag sel darah merah

donor yang disebut dengan inkompatibilitas mayor atau dapat juga karena interaksi plasma

donor dengan Ag sel darah merah pasien yang disebut dengan inkompatibilitas minor. Selain

itu, ada juga inkompatibilitas inter donor yaitu reaksi Ab pada plasma donor dengan Ag

sel darah merah donor lainnya jika pasien mendapat transfusi darah lebih dari satu donor

yang bereaksi pada darah pasien. Reaksi hemolitik akut terjadi sesaat setelah transfusi dan

berlangsung cepat. Jenis Ab pada sistem golongan darah merah yang lebih sering

memicu reaksi imun hemolitik akut adalah : anti-A, anti-Kell, anti-Jka dan anti-Fya.

Mekanisme lisis sel darah merah karena reaksi transfusi dapat terjadi melalui

mekanisme hemolisis ekstravaskular maupun intravaskular.

B.1.1. Hemolisis ekstravaskular

Hemolisis ekstravaskular merupakan lisis sel darah merah yang terjadi karena reaksi Ag

donor yang disensitisasi/dilekati oleh Ab dan atau komplemen pasien. Kompleks Ag, Ab dan

atau komplemen ini dikenali dan disingkirkan ke luar pembuluh darah oleh sel makrofag

menuju ke hati atau limpa untuk dihancurkan. Pada saat makrofag menempel dan terikat pada

sel darah merah, maka proses fagositosis dapat terjadi melalui tiga cara, yaitu :(i) sel darah

merah difagositosis dan dihancurkan di dalam makrofag, (ii) sel darah merah difagositosis dan

dihancurkan sebagian, sedangkan sisanya dapat tidak terfagositosis dan beredar di sirkulasi

sebagai sel sferosit yang memiliki masa hidup pendek, (iii) sel darah merah berada di luar

makrofag dan dilisiskan melalui mekanisme antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity

(ADCC), yaitu makrofag mengeluarkan substan yang bersifat toksik, sehingga sel darah merah

yang menempel pada makrofag dapat lisis, tanpa melisiskan makrofag. Mekanisme fagositosis

dapat dilihat pada Gambar 4.1 berikut ini.

Gambar 4.1. Mekanisme fagositosis

Sumber. Transfussion journal

Pada saat sel darah merah dihancurkan di dalam makrofag (Gambar 4.2), maka akan

melepaskan molekul Hb dari sel darah merah yang kemudian dipecah menjadi bagian heme

dan globin. Protein globin akan dimanfaatkan kembali oleh tubuh, sedangkan molekul heme

diubah menjadi biliverdin yang pada proses berikutnya akan diubah menjadi bilirubin indirek.

Bilirubin indirek akan dibawa ke hepatosit untuk dirubah menjadi bilirubin direk (larut dalam

air). Pada hemolisis ekstravaskular, biasanya konsentrasi bilirubin indirek meningkat, karena

terlalu banyak molekul heme yang diubah menjadi bilirubin, sampai hepatosit tidak mampu

memproses kelebihan bilirubin.

Bilirubin direk kemudian dieksresikan ke dalam sistem gastrointestinal yang kemudian

diubah menjadi urobilinogen dan dieksresikan melalui feses dalam bentuk sterkobilinogen.

Jenis Ab yang bereaksi dengan Ag pada reaksi hemolisis ekstravaskular adalah jenis Ab

yang tidak mengaktifkan komplemen, seperti : Rh, Duffy, Kell. Mekanisme lisis ekstravaskular

dapat dilihat pada Gambar 4.2.

Gambar 4.2. Mekanisme hemolisis ekstravaskular

Sumber. http://pedsinreview.aappublications.org

B.1.2. Hemolisis intravaskular

Hemolisis intravaskular merupakan lisis sel darah merah yang terjadi di pembuluh darah.

Reaksi terjadi jika Ab pasien bereaksi dengan Ag yang berasal dari donor. Ikatan Ag dan Ab

ini mengaktifkan komplemen dan membentuk membrane attachment complex (MAC)

dan sel darah merah lisis/pecah . Molekul Hb yang keluar dari sel darah merah yang telah lisis

akan diikat oleh haptoglobin. Kompleks Hb-haptoglobin akan disingkirkan dari plasma oleh sel

retikuloendotelial hati. Jika jumlah haptoglobin berkurang atau bahkan habis, maka molekul

Hb akan berada bebas di dalam darah (hemoglobinemia), sehingga ikut tersaring di ginjal dan

Hb dapat berada di urin (hemoglobinuria), sehingga mengakibatkan warna urin menjadi

merah/gelap.

Sebagai contoh, pasien golongan darah O ditransfusi dengan darah golongan A, maka

anti A pasien akan bereaksi dengan Ag A dari darah donor. Komplemen akan teraktifkan dan

mengakibatkan sel darah merah lisis. Jenis Ab yang dapat memicu reaksi hemolisis

intravaskular selain anti A dan anti B adalah anti-Jka, -Jkb, Vel, -PP1PPk, -Lea. Mekanisme

hemolisis intravaskular dapat dilihat pada Gambar 4.3 berikut ini.

Gambar 4.3. Mekanisme hemolisis intravaskular

Sumber. http://pedsinreview.aappublications.org

Perbedaan klinis antar kedua jenis hemolisis, yaitu intravaskular dan ekstravaskular,

melibatkan banyaknya sel darah merah yang dihancurkan. Hemolisis ekstravaskular terbatas

pada kapasitas sistem retikuloendotelial (RES) dalam menghancurkan sel darah merah.

Sebagai contoh, pada pasien dengan berat badan 70 Kg, RES dapat menghancurkan sel darah

merah sebanyak 18 mL pada komponen Packed Red Cells dalam waktu 1 jam, dan lebih dari

400 mL selama 24 jam. Sementara, hemolisis intravaskular dapat menghancurkan 200 mL sel

darah merah atau lebih, dalam waktu 1 jam. Kondisi ini dapat menurunkan kadar Hb sebanyak

5 g/dL dalam waktu 1 jam, yang dapat berakibat fatal jika tidak segera ditransfusikan dengan

darah yang sesuai.

Hemolisis ekstravaskular terjadi karena adanya aktivasi makrofag yang akan

memfagositosis ikatan Ag, Ab dan atau komplemen yang tidak membentuk MAC, proses

lisis lebih banyak terjadi di luar pembuluh darah, sedangkan hemolisis intravaskular

terjadi karena adanya aktivasi komplemen sampai membentuk MAC sehingga sel darah

merah lisis di dalam pembuluh darah.

Setelah membaca penjelasan mengenai hemolisis intravaskular dan ekstravaskular, jawablah

pertanyaan berikut :

Sebutkan minimal tiga perbedaan antara lisis ekstravaskular dan intravaskular.

No. Perbedaan Hemolisis ekstravaskular Hemolisis intravaskular

Reaksi hemolitik akut dapat terjadi melalui mekanisme lisis intravaskular maupun

ekstravaskular. Penyebab reaksi hemolitik akut, yang paling utama adalah inkompatibilitas

golongan darah ABO. Jenis inkompatibilitas ini, seringkali disebabkan karena kesalahan

interpretasi golongan darah atau adanya kesalahan penulisan label antara komponen darah

donor dan pasien.

Pada awalnya, gejala klinis hemolitik akut seringkali tidak spesifik. Jika reaksi terjadi pada

pasien dengan kondisi sadar, maka tubuh pasien menggigil, pasien akan merasakan panas di

area infus, nyeri di bagian dada, perut atau punggung, kepala pusing, mual dan muntah. Gejala

lainnya yang dapat terjadi pada pasien yang tidak sadarkan diri, seperti, demam (peningkatan

suhu tubuh > 10 C), perubahan kondisi kulit (seperti pembengkakan/oedem, pucat), takikardia

(detak jantung di atas normal), tekanan darah di bawah nilai normal (hipotensi), dan

perubahan warna urin menjadi kemerahan karena adanya Hemoglobin (Hb) pada urin. Pasien

dapat mengalami reaksi koagulasi intravaskular diseminata (disseminated intravascular

coagulation/DIC) karena adanya perdarahan cukup luas yang dapat memicu faktor koagulasi

pasien bekerja ekstra sehingga terbentuk bekuan dan menutup pembuluh darah. Selain itu

pasien dapat mengalami anuria karena ginjal tidak dapat memproduksi urin (gagal ginjal).

Kondisi ini dapat memicu kematian pasien.

Gejala klinis reaksi hemolitik akut intravaskular lebih berat dibandingkan hemolisis

ekstravaskular.

B.2. Febrile non hemolytic transfusion reaction (FNHTR)

FNHTR merupakan reaksi transfusi dengan gejala klinis yang ditimbulkan berupa demam

dan tidak diikuti dengan reaksi hemolisis sel darah merah. Reaksi FNHTR terjadi karena

dilepaskannya sitokin dari sel lekosit. Pelepasan sitokin dari sel lekosit dapat terjadi melalui

tiga mekanisme yang dapat dilihat pada Gambar 4.4, yaitu : (A) Sel lekosit donor yang dapat

mengaktivasi sistem imun pasien, sehingga lekosit pasien menghasilkan dan melepaskan

sitokin. (B) Reaksi antara Ab lekosit pada plasma pasien dengan komponen darah donor yang

mengandung Ag lekosit (HLA/HNA) yang sesuai. Ab akan bereaksi dengan lekosit membentuk

kompleks Ag – Ab dan memicu dilepaskannya sitokin. Mekanisme ketiga (C) yaitu sitokin

dilepaskan oleh sel lekosit selama proses penyimpanan komponen darah.

Sitokin yang dilepaskan melalui berbagai mekanisme ini akan merangsang

hipotalamus sehingga pasien merasakan demam. Mekanisme pelepasan sitokin dapat dilihat

pada Gambar 4.4.

Gambar 4.4. Mekanisme pelepasan sitokin pada reaksi FNHTR

Sumber. https://www.researchgate.net

FNHTR terjadi jika ada kenaikan suhu tubuh > 1O C pada saat atau selama 24 jam

paska transfusi yang disertai dengan gejala menggigil, demam, sakit kepala, nyeri otot. Selain

itu, pasien dapat menderita hipotensi, muntah dan pernapasan terganggu.

B.3. Alergi

Reaksi alergi merupakan jenis reaksi transfusi yang cukup sering terjadi. Reaksi ini terjadi

karena berbagai unsur yang bertindak sebagai alergen yang dapat mengaktifkan sel mast

maupun basofil. Mekanisme terjadinya reaksi alergi terbagi melalui tiga jalur, yaitu :

1. Allergen dependent pathway (yang ditunjukkan dengan warna pink pada Gambar 4.5.)

memiliki mekanisme yaitu alergen yang dapat berupa protein plasma, protein

makanan ataupun zat kimia seperti methylen blue akan terikat pada Ab (IgE/IgG) yang

kemudian akan menempel dan terikat pada reseptor (FcRs) sel mast maupun basofil. Sel

yang teraktivasi mengeluarkan substan kimia, seperti histamin maupun platelet activating

factor (PAF). Pada reaksi alergi yang melibatkan sel mast, (allergen-dependent-mast cell

mediated sub-pathway), unsur lain yang terlibat adalah IgE dan FcƐRs, sehingga sel mast

teraktifkan dan menghasilkan substan histamin . Pada reaksi alergi yang melibatkan sel

basofil (allergen-dependent-basophil mediated sub-pathway) , unsur lain yang terlibat

adalah IgG dan FcƳRs sehingga sel basofil teraktifkan dan melepaskan substan PAF.

2. Allergen independent pathway (yang ditunjukkan dengan warna biru muda pada Gambar

4.5. memiliki mekanisme alergen yang disebut dengan biological response modifiers

(BRMs) berupa sitokin yang dihasilkan selama proses penyimpanan komponen darah.

BRMs dapat terikat langsung ke reseptor (FcRs) sel mast maupun basofil, sehingga sel

teraktivasi. Mekanisme reaksi alergi dapat dilihat pada Gambar 4.5.

Gambar 4.5. Mekanisme reaksi alergi

Sumber. British Journal of Haematology

Pelepasan substan karena adanya aktivasi sel mast, yaitu histamin akan memicu

vasodilatasi (pelebaran pembuluh darah) yang ditandai dengan warna kulit kemerahan. Gejala

klinis lainnya yang dapat dirasakan pasien adalah gatal, pembengkakan pada area wajah,

termasuk bibir atau mulut. Jika kondisi semakin parah, pasien dapat kesulitan bernapas.

Reaksi alergi biasanya terjadi pada saat transfusi atau satu jam setelahnya.

B.4. Reaksi anafilaktik dan anaphylactoid

Reaksi anafilaktik dan anaphylactoid merupakan reaksi hipersensitivitas pada respon

sistem imun yang merupakan bagian dari reaksi alergi. Komplikasi ini jarang terjadi, namun

dapat membahayakan jiwa pasien. Reaksi dapat terjadi pada pasien dengan

defisiensi/kekurangan terhadap jenis Ab / immunoglobulin / protein tertentu, dalam hal ini

adalah defisiensi terhadap immunoglobulin A (IgA), sehingga ada Ab terhadap IgA karena

adanya riwayat paparan dengan IgA sebelumnya. Gejala klinis pasien akan terjadi setelah

Alergen yang dapat memicu reaksi alergi, bisa berasal dari darah donor ataupun

pasien yang akan bereaksi dengan Ab yang berasal dari darah pasien maupun

komponen darah donor.

transfusi beberapa mL plasma atau transfusi komponen darah yang ada plasma di

dalamnya.

Reaksi anafilaktik dan anaphylactoid dibedakan dari jenis IgA yang lebih spesifik dan

gejala klinisnya. Reaksi anafilaktik, yaitu reaksi terhadap pasien dengan defisiensi IgA,

sehingga memiliki anti-IgA dari paparan sebelumnya. Gejala klinis reaksi anafilaktik berupa

: batuk, sesak napas, mual, muntah, sakit di bagian dada, hipotensi, diare, bisa memicu

shock, hilang kesadaran yang dapat berujung pada kematian. Reaksi anaphylactoid terjadi

pada pasien dengan konsentrasi IgA normal, tetapi memiliki beberapa jenis IgA yang dapat

bereaksi dengan bagian rantai ringan (light chain) IgA donor. Reaksi anaphylactoid, biasanya

tidak separah reaksi anafilaktik, dengan gejala klinis berupa : urtikaria, sesak napas.

B.5. Transfusion related acute lung injury (TRALI)

TRALI merupakan reaksi transfusi yang dapat membahayakan jiwa pasien, hal ini

disebabkan karena organ yang diserang adalah paru-paru, sehingga pasien mengalami sulit

napas. Gejala klinis, biasanya terjadi pada kisaran 6 jam selama proses transfusi.

TRALI disebabkan oleh Ab terhadap lekosit (anti-HLA) atau Ab terhadap sel netrofil (anti-

HNA) pada plasma donor. Ab yang berasal dari donor diperoleh dari riwayat paparan Ag

sebelumnya pada donor, yang disebabkan, donor pernah transfusi darah sebelumnya atau

donor memiliki riwayat melahirkan beberapa kali (wanita multipara).

Ab yang ada di plasma dapat mengaktivasi netrofil pasien pada saat ditransfusikan.

Sel netrofil bermigrasi ke paru-paru dan menempel pada bagian kapiler paru, serta

melepaskan berbagai macam substan, seperti enzim proteolitik, oksigen yang bersifat radikal

bebas. Pelepasan berbagai macam substan ini akan merusak sel endotel kapiler paru,

yang berakibat pada kebocoran kapiler, sehingga cairan dan protein akan keluar menuju

alveoli dan berakibat pembengkakan pada paru-paru. Mekanisme reaksi TRALI dapat dilihat

pada Gambar 4.6. berikut. Gejala klinis yang timbul pada pasien berupa demam, hipotensi,

sesak napas, penurunan tekanan oksigen di dalam tubuh. Pada kondisi ini, pasien

membutuhkan suplai oksigen.

Gambar Mekanisme reaksi TRALI

Ket. gambar : Anti-HNA / anti-MHC kelas I / anti-HLA yang berasal dari komponen darah yang ditransfusikan

dapat mengaktivasi netrofil yang ada pada pembuluh darah kapiler. Anti MHC kelas I juga dapat langsung

mengenali dan menempel pada MHC kelas I di endotel pembuluh darah. Selain itu, kompleks imun antara anti

HNA / anti MHC kelas I dan HNA / MHC kelas I terlarut juga dapat mengaktifasi netrofil. Aktivasi netrofil pada

pembuluh darah kapiler memicu kerusakan sel endotel kapiler.

C. REAKSI IMUN TUNDA

C.1. Reaksi hemolitik tunda

Reaksi hemolitik tunda disebabkan karena respon imun sekunder terhadap Ag pada sel

darah merah donor. Hal ini terjadi karena pasien sudah pernah terpapar dengan jenis Ag yang

sama sebelumnya sehingga pasien sudah memiliki Ab terhadap Ag ini . Jenis Ab pada

respon imun sekunder, biasanya adalah jenis IgG yang berada pada jumlah maksimal selama

3 – 7 hari setelah paparan dengan Ag yang sesuai. Pada kisaran hari ini , sel darah merah

donor masih berada di aliran darah pasien, dan dapat dihancurkan secara cepat karena

bereaksi dengan Ab yang sesuai.

Ab yang dapat memicu reaksi hemolitik tunda , adalah Ab yang berasal dari sistem

Rh, Kidd, Duffy, Kell dan MNSs. Jenis Ab ini adalah anti-c, anti-E, anti-Jka, anti-K, anti-Fya,

anti-Jkb, anti-M, anti-s, anti-Fyb, anti-Fy3, anti-Kpa, anti-N dan anti-U.

Gejala klinis pada pasien dengan reaksi transfusi tunda lebih ringan dibandingkan reaksi

transfusi akut. Gejalanya antara lain : demam dan gejala anemia. Adanya penurunan Hb dan

ikterus dapat terjadi 1 minggu setelah transfusi, terkadang dapat terjadi hemoglobinuria,

namun tidak sampai terjadi gagal ginjal.

C.2. Aloimunisasi

Reaksi komplikasi jangka panjang karena transfusi, salah satunya adalah reaksi

aloimunisasi yaitu terbentuknya Ab terhadap paparan dengan Ag sel darah merah, lekosit

maupun trombosit sebelumnya. Reaksi aloimunisasi biasanya terjadi pada pasien yang

mendapat beberapa kali transfusi darah.

Gejala klinis yang timbul, biasanya tidak terlalu parah, seperti demam dan penurunan

konsentrasi Hb. Namun demikian, reaksi aloimunisasi dapat memiliki gejala klinis yang

berat jika terjadi perdarahan, sebagai contoh : pada transfusi trombosit terjadi reaksi antara

Ab trombosit pada pasien dengan trombosit yang ditransfusikan, sehingga terjadi penurunan

trombosit yang signifikan (trombositopenia), jika reaksi berlanjut dapat memicu

perdarahan. Jika allo Ab yang terbentuk memiliki reaksi yang kuat, efeknya dapat sulit

untuk menemukan komponen darah yang sesuai pada transfusi berikutnya.

Untuk deteksi ada tidaknya reaksi aloimunisasi, dapat dilakukan pemeriksaan Coomb’s

test maupun skrining dan identifikasi Ab.

C.3. Post transfusion purpura (PTP)

PTP merupakan reaksi transfusi yang melibatkan komponen trombosit. Kondisi ini

terjadi karena reaksi allo Ab terhadap trombosit yang ditransfusikan. Allo Ab trombosit

melekat pada permukaan trombosit yang memicu dekstruksi ekstravaskular oleh

retikuloendotelial sistem (RES), sehingga terjadi penurunan jumlah trombosit

(trombositopenia).

Gejala klinis pada pasien seperti demam, hipotensi berasal dari aktivitas sitokin yang

dilepaskan sel lekosit yang distimulus pada reaksi hemolisis intravaskular maupun

ekstravaskular.

Gejala klinis yang terjadi berupa purpura (kulit kemerahan) dan trombositopenia

sekitar 1 – 2 minggu setelah transfusi. Trombositopenia berat dapat terjadi dengan penurunan

jumlah trombosit sampai 10.000/µL darah. Reaksi ini dapat mendorong terjadinya

hematuria, perdarahan pada saluran pencernaan sehingga terjadi kondisi melena.

C.4. Transfusion-associated graft vs host disease (TA-GVHD)

Reaksi ini cukup jarang terjadi pada transfusi, namun dapat bersifat fatal. Reaksi yang

terjadi adalah limfosit T donor yang memicu sistem imun pasien. Sel limfosit donor dikenali

sebagai substan asing oleh sistem imun pasien, sehingga sel limfosit yang ditransfusikan

dihancurkan di dalam tubuh pasien.ada tiga faktor yang dapat mempengaruhi reaksi ini,

yaitu; status imun pasien, kecocokan HLA antara donor dan pasien, dan berapa banyak sel T

yang teraktifkan karena proses transfusi.

Jika darah yang mengandung limfosit ditransfusikan pada pasien dengan gangguan

sistem imun, seperti pasien AIDS atau pada pasien yang sedang terapi penyakit kanker, maka

reaksi TA-GVHD tidak terjadi. Namun demikian, pada kondisi ini , sel limfosit dapat

berproliferasi dan menimbulkan penyakit yang lebih serius. Sel limfosit donor juga tidak

dihancurkan di tubuh pasien, jika HLA donor dan pasien memiliki haplotype yang sama.

Reaksi TA-GVHD seringkali tidak dikenali dan salah diagnosis dengan reaksi sepsis atau

reaksi pengobatan. Gejala klinis terjadi 1 – 6 minggu setelah transfusi, yaitu berupa : diare,

sakit pada bagian perut, mual dan muntah. Jika organ hati terkena, maka terjadi peningkatan

konsentrasi bilirubin. Warna kulit kemerahan jika reaksi mempengaruhi kulit. Reaksi yang

paling fatal terjadi, jika melibatkan sumsum tulang.

D. PENCEGAHAN REAKSI TRANSFUSI IMUN

Terapi transfusi darah memiliki manfaat untuk menyembuhkan pasien bahkan dapat

menyelamatkan jiwa pasien, akan tetapi, proses transfusi memiliki resiko atau efek

samping. Upaya pencegahan-pun dilakukan untuk meminimalisir dan mencegah reaksi

ini .

Upaya yang dilakukan untuk pencegahan reaksi transfusi dimulai dari pengambilan

darah donor, kontrol kualitas komponen darah yang akan diberikan ke pasien sampai dengan

proses distribusi darah ke pasien. Setiap proses yang dilakukan harus terstandar dengan baik

dan dikontrol. Sebagai contoh, penentuan dan penulisan jenis golongan darah donor dan

pasien tidak boleh ada kesalahan, baik pada proses pemeriksaannya, maupun pelaporan dan

penulisan hasil, karena jika terjadi kesalahan dapat fatal akibatnya. Validasi pemeriksaan dan

crosscheck terhadap hasil golongan darah ABO pasien dan donor dapat mencegah kesalahan

penentuan golongan darah donor yang dapat memicu reaksi transfusi hemolitik akut.

Reaksi transfusi hemolitik tunda maupun reaksi aloimunisasi dapat dicegah dengan

melakukan pemeriksaan pre-transfusi yang disertai dengan pemeriksaan khusus skrining dan

identifikasi Ab sebelum proses transfusi dilakukan. Pemeriksaan ini dilakukan untuk

mengetahui ada tidaknya allo Ab yang terbentuk karena riwayat paparan dengan Ag sel darah

merah sebelumnya. Pemeriksaan harus dilakukan pada pasien yang memiliki riwayat

transfusi sebelumnya, terlebih pada pasien yang menjalani terapi transfusi rutin, seperti :

penderita thalasemia. Selain itu, baik dilakukan juga pada pasien yang beresiko terpapar oleh

Ag sel darah merah lain, yaitu pada pasien yang memiliki riwayat pernah melahirkan

beberapa kali (multipara). Pada pencegahan reaksi TRALI yang banyak disebabkan oleh anti-

HNA dapat dilakukan dengan meminimalisir wanita dengan riwayat multipara untuk donor

plasma.

Pembuatan dan pengolahan komponen darah untuk transfusi juga memegang peranan

penting untuk mencegah reaksi transfusi. Reaksi FNHTR, TRALI, PTP dapat dicegah dengan

memberikan komponen darah ‘miskin’ lekosit (leukopoor / leukoreduced), yaitu darah yang

diproses tertentu sehingga lekosit dapat berkurang secara efektif. Proses pengurangan atau

penyingkiran lekosit dapat dilakukan dengan proses penyaringan menggunakan filter khusus

yang ada pada bagian selang kantong darah (

Gambar proses filtrasi lekosit pada sel darah merah

Selain pembuatan komponen darah ‘miskin’ lekosit, cara lainnya untuk menyingkirkan

lekosit maupun trombosit, dapat dilakukan dengan pembuatan komponen ‘washed

erythrocyte’ (WE), yaitu sel darah merah yang dibuang bagian plasmanya dan dicuci dengan

larutan NaCl 0.9%. Komponen WE juga dapat diberikan untuk mencegah reaksi alergi setelah

transfusi. Pada pasien transfusi dengan indikasi alergi, dapat dilakukan tahapan pencegahan,

yaitu : penulisan / dokumentasi riwayat alergi sebelumnya, diberikan obat pencegah alergi,

sebelum transfusi dilakukan dan tranfusi dengan komponen darah yang leukopoor ataupun

komponen darah dengan pengurangan bagian plasma. Komponen darah miskin plasma , juga

baik dipakai untuk mencegah reaksi anafilaktik dan anaphylactoid.

Pasien dengan indikasi klinis ke arah gangguan sistem imun yang dapat mengalami

reaksi transfusi TA-GVHD dapat diberikan komponen darah yang diberi perlakuan radiasi sinar

gamma.

Proses penyimpanan komponen darah juga memberikan efek terhadap reaksi transfusi

darah. Hal ini berkaitan dengan proses metabolisme darah selama proses penyimpanan.

Tempat penyimpanan harus disesuaikan dengan suhu, kapasitas penampungan, supaya

mencegah atau meminimalisir kerusakan komponen darah dan teraktivasinya berbagai

substan sel darah selama penyimpanan. Penggunaan komponen darah PRC dengan masa

simpan < 14 hari dan trombosit < 2 hari dapat mengurangi efek aktivitas Ab, protein dan unsur

biologis lainnya yang ada di dalam plasma.

Dokumentasi terhadap reaksi transfusi baik dipakai untuk mencegah reaksi transfusi

pada pasien dengan kondisi khusus, yaitu : alergi pada protein plasma, reaksi aloimunisasi,

dan sebagainya. Dokumentasi ini dapat dipakai untuk rekomendasi terhadap

pemeriksaan pre-transfusi khusus seperti pemeriksaan skirining dan identifikasi Ab pada

reaksi aloimunisasi, pemeriksaan terhadap Ab HLA untuk mencegah reaksi PTP atau

pemberian komponen darah khusus, seperti komponen darah yang diberikan sinar radiasi

untuk mencegah reaksi TA-GVHD. Pengetahuan dan latihan untuk mengenali gejala klinis

terhadap reaksi transfusi juga dapat dipakai untuk mencegah kemungkinan reaksi transfusi

pada pasien.

Topik 2

Reaksi Transfusi Non Imun

A. KONSEP DASAR

Reaksi transfusi non imun yang dimaksud di sini adalah reaksi yang tidak melibatkan

sistem imun (reaksi Ag dan Ab) secara langsung. Reaksi transfusi non imun lebih banyak

disebabkan oleh efek pemberian komponen darah yang berpengaruh terhadap metabolisme

tubuh, seperti penumpukan zat besi (Fe) di dalam tubuh pasien, maupun efek karena

penyimpanan komponen darah yang menghasilkan berbagai macam substan yang

mempengaruhi metabolisme tubuh. Berdasarkan waktu munculnya gejala klinis pada pasien,

reaksi transfusi non imun dapat bersifat akut maupun tunda. Reaksi transfusi non imun yang

bersifat akut termasuk kontaminasi bakteri, oversirkulasi darah, dan reaksi fisik serta kimia

terkait penyimpanan komponen darah. Reaksi non imun yang bersifat tunda , yaitu adanya

infeksi menular lewat transfusi darah seperti infeksi virus dan parasit (akan dibahas tersendiri

di bab 5) serta akumulasi Fe di dalam darah.

B. REAKSI TRANSFUSI NON IMUN AKUT

B.1 Sepsis karena kontaminasi bakteri di dalam kantong darah

Sepsis merupakan reaksi tubuh terhadap infeksi yang cukup berat, jika tidak tertangani

dengan baik, maka dapat terjadi kerusakan organ. Kontaminasi bakteri merupakan penyebab

utama terjadinya infeksi pada pasien paska transfusi. Berdasarkan beberapa studi, diketahui

bahwa resiko kontaminasi bakteri pada komponen darah lebih besar dibandingkan infeksi

menular lewat transfusi darah, seperti : HIV, hepatitis C (HCV), hepatitis B (HBV). Jenis

komponen darah yang sering terkontaminasi bakteri adalah komponen trombosit.

Kontaminasi biasanya berasal dari bakteri kontaminan yang berasal dari kulit lengan

donor pada saat pengambilan darah. Proses antisepsis kulit donor yang kurang baik

memicu bakteri yang normal ada di kulit donor dapat ikut bersama dengan aliran

darah ke dalam kantong darah.

Proses pengolahan komponen darah, juga rentan terhadap kontaminasi bakteri dalam

kantong darah donor. Pembuatan komponen darah yang tidak aseptik memungkinkan bakteri

dapat tumbuh dan memperbanyak diri di dalam kantong komponen darah. Pada pembuatan

komponen wash erythrocyte (WE) kemungkinan darah di dalam kantong dapat kontak dengan

udara luar dan memperbesar resiko kontaminasi bakteri. Oleh karena itu, masa simpan

komponen darah ini pendek.

Kontaminasi juga bisa terjadi pada proses penyimpanan komponen darah. Seperti

diketahui, komponen darah untuk transfusi disimpan dalam kisaran suhu yang beragam,

sebagai contoh : komponen trombosit yang disimpan pada suhu 22±20 C. Kondisi ini

memungkinkan bakteri dapat tumbuh dan memperbanyak diri. Selain itu, jenis kantong

komponen trombosit yang berpori, dapat meningkatkan kemungkinan kontaminasi bakteri

dari lingkungan sekitar. Oleh karena itu, masa penyimpanan trombosit maksimal adalah lima

hari. Selain itu, jika komponen darah yang disimpan pada suhu dingin, kemudian ditaruh di

suhu ruang lebih dari 30 menit, maka dapat meningkatkan reaksi kontaminasi bakteri.

Komponen sel darah merah juga dapat terkontaminasi oleh bakteri yang berasal dari

donor, akan tetapi tidak menimbulkan gejala klinis pada donor, sehingga tidak terdeteksi pada

saat seleksi donor. Sebagai contoh, bakteri Yersinia enterolitica yang tidak terlalu

menampakkan gejala klinis, yaitu donor hanya menderita diare ringan. Yersinia enterolitica,

diketahui juga dapat memproduksi toksin pada suhu rendah.

Beberapa jenis bakteri dapat tumbuh dan berkembang pada suhu dingin, sehingga

memungkinkan komponen sel darah merah, dengan suhu simpan 4±2O C dapat

terkontaminasi bakteri. Jenis bakteri yang dapat mengontaminasi yaitu : Bakteri batang Gram

negatif (Yersinia enterocolitica, E.coli, Enterobacter/Pantoea sp, Serratia marcescens dan

S.liquifaciens, Pseudomonas sp) dan bakteri kokus Gram positif (Staph. Epidermidis,

Propionibacteria, Staph aureus). Kontaminasi bakteri juga dapat mencetus sel lekosit yang

ada di dalam kantong darah untuk memproduksi sitokin yang dapat memicu efek demam pada

pasien.

Gejala klinis pasien yang diakibatkan karena kontaminasi bakteri, yaitu : demam

(kenaikan suhu dapat > 20 C), menggigil, mual, muntah, hipotensi dan dapat terjadi shock.

Gejala ini dapat terjadi beberapa menit pada saat transfusi. Jika reaksi sepsis terjadi pada

pasien transfusi, dengan gejala kenaikan suhu tubuh > 20 C dan hipotensi, maka komponen

darah yang ditransfusikan perlu diperiksa dengan pewarnaan Gram dan kultur bakteri. Sampel

pasien setelah transfusi juga dikultur, untuk mengetahui kesamaan dari jenis bakteri yang

ada pada masing-masing sampel.

B.2. Efek transfusi terhadap komponen darah simpan

Komponen darah yang disimpan dalam jangka waktu tertentu, akan memberikan reaksi

transfusi terhadap pasien. Faktor fisik sel darah maupun faktor kimia dari komponen darah

dapat mempengaruhi kualitas komponen darah simpan. Faktor fisik diantaranya adalah :

kerusakan sel darah terutama sel darah merah (hemolisis) pada proses pengolahan komponen

darah dan penyimpanan. Faktor kimia terkait dengan unsur kimia yang teraktivasi pada proses

pengolahan maupun komponen darah, sebagai contoh, kalium yang keluar dari dalam sel

darah ke plasma selama proses penyimpanan darah.

Selama penyimpanan komponen darah, perubahan-perubahan metabolik terjadi baik

di dalam sel darah maupun di plasma. Perubahan yang terjadi dapat mempengaruhi efek

terapi dan pengobatan yang diberikan. Pada proses penyimpanan komponen darah tidak ada

keseimbangan antara produksi dan destruksi, sintesis dan pemecahan protein, hanya ada

destruksi tanpa ada produksi s

bank darah 3

Juni 21, 2023 bank darah 3

penanda harus dihilangkan agar tidak dipakai untuk penggunaan klinis atau manufaktur.

7) Semua unit reaktif harus ditandai jelas (dilabel) dan dihilangkan dari stok karantina dan

disimpan secara terpisah dengan aman sampai unit dibuang atau disimpan untuk tujuan

jaminan kualitas atau penelitian sesuai dengan kebijakan nasional.

Pengujian konfirmasi darah yang reaktif harus dilakukan untuk pemberitahuan donor,

konseling dan rujukan untuk pengobatan, penangguhan atau recall untuk sumbangan masa

depan, dan melihat kembali donasi.

Alat tes yang paling umum dipakai dirancang untuk mendeteksi antibodi, antigen

atau asam nukleat dari agen infeksi. Namun, tidak semua tes cocok dalam segala situasi dan

setiap pemeriksaan memiliki keterbatasan yang perlu dipahami dan dipertimbangkan ketika

memilih pemeriksaan ini .

Jenis utama dari uji yang dipakai untuk skrining darah adalah:

1) Immunoassays (IAS):

- Enzim immunoassay (EIAs)

- Chemiluminescent immunoassays (CLIAs)

- Hemaglutinasi (HA) / Tes partikel aglutinasi (PA)

- Tes cepat / sederhana sekali pakai (Rapid Test)

2) Tes teknologi amplifikasi asam nukleat (NAT).

Dalam konteks skrining darah, evaluasi yang tepat diperlukan dalam memilih jenis tes

untuk setiap infeksi menular lewat transfusi darah, berdasarkan pentingnya karakteristik

pemeriksaan, seperti sensitivitas dan spesifisitas, serta biaya dan kemudahan penggunaan.

-- Immunoassays (IAS)

Immunoassays adalah sistem uji yang tersedia dalam beberapa format yang dapat

dipakai untuk mendeteksi antibodi, antigen atau kombinasi dari keduanya. Umumnya, tes

yang paling sederhana untuk deteksi antibodi didasarkan pada penggunaan antigen amobil

(fase diam) yang menangkap setiap antibodi spesifik yang ada dalam sampel uji (IA tidak

langsung/indirect). Umumnya tes deteksi antigen dipakai didasarkan pada penggunaan

antibodi bergerak ke menangkap antigen patogen spesifik hadir dalam sampel.

Immunoassays dapat dipakai dalam situasi yang berbeda dari laboratorium dengan

otomatisasi penuh atau untuk laboratorium menengah dengan semi-otomasi, dan juga

laboratorium kecil, seperti di daerah-daerah terpencil yang melakukan sejumlah tes secara

manual.

2.3.2 Enzim immunoassay (EIAs) dan Immunoassays Chemiluminescent (CLIAs)

Enzim immunoassay (EIAs) dan Immunoassays Chemiluminescent (CLIAs) adalah tes

yang paling umum dipakai untuk skrining IMLTD darah donor . Desain EIAs dan CLIAs mirip

dan mereka hanya berbeda dalam cara deteksi kompleks imun dalam pembentukan

kompleks warna dalam EIAs dan pengukuran cahaya yang dihasilkan oleh reaksi bahan kimia

di CLIAs. Salah satu jenis dari pemeriksaan imunoserologi (Immunoassay/IA) dengan

sensitivitas tinggi, pada biasanya diperlukan mendeteksi penanda target infeksi dan harus

dievaluasi dengan benar untuk skrining darah serta menjaga kualitas mutu hasil pemeriksaan.

EIAs dan CLIAs cocok untuk jumlah besar sampel dan membutuhkan berbagai peralatan

khusus. Tes ini dapat dilakukan baik non manual atau sistem pengolahan uji otomatis (sistem

terbuka) dan sistem otomatis (sistem tertutup). EIAs dan CLIAs memiliki fase padat yang

berbeda untuk menangkap antigen atau antibodi. Paling umum, fase padat yang dipakai

adalah:

1) Dasar dan sisi dari microwell polystyrene

2) Permukaan polystyrene atau bahan lainnya

3) Micro-partikel

4) Permukaan perangkat pakai tertentu yang dipakai dalam sistem otomatis biasanya

polystyrene

5) Strips dari nilon atau membran nitro-selulosa, khusus dipakai di Western Blot dan line

assay.

Gambar Prinsip Kerja CLIA

Pada gambar prinsip kerja CLIA ke dalam well dimasukkan antibodi yang dicoated

dengan partikel magnetic, kemudian ditambahkan sampel yang mengandung target antigen

dan ditambahkan juga antibodi yang dilabel ALP. Inkubasi untuk terjadi reaksi imulogi.

Kemudian dipisahkan komponen yang tidak dibutuhkan dengan teknologi magnetisasi dan

kemudian ditambahkan substrat akridium ester yang mengakibatkan reaksi enzimatis dan

kemudian pendaran di deteksi dengan luminometer dengan panjang gelombang 461 nm.

Gambar. Prinsip Kerja ELISA/EIA

menunjukkan ke dalam well dilekatkan (coated) antibodi spesifik, kemudian

ditambahkan sampel yang mengandung target antigen dan dilakukan pencucian untuk

menghilangkan analit yang tidak bereaksi. Ditambahkan juga antibodi kedua yang dilabel

enzim dan kemudian ditambahkan substrat dan stop solution, maka akan terjadi perubahan

warna. Perubahan warna yang terbentuk diukur dengan fotometer dengan panjang

gelombang tertentu. Hasil reaktif jika nilai absorban > dari nilai cut off.

Berikut ini adalah perbedaan EIA dan CLIA berdasarkan tabel 18 di bawah ini.

Tabel 17. Perbedaan EIA dan CLIA

Perbedaan EIA CLIA

Pembawa

antigen/antibodi

Berupa permukaan well Mikropartikel

Substrat yang dipakai Enzim (TMB) Zat kimia (akridium ester)

Reaksi Tergantung suhu dan pH stabil

Deteksi hasil reaksi fotometer luminometer

Target molekul yang

ditangkap

Lebih sedikit sesuai

permukaan well

Lebih banyak, permukaan

pembawa antibodi/antigen

lebih luas dan berbentuk bulat

Sumber cahaya Panjang gelombang

tertentu

stabil

2.3.3 Tes aglutinasi partikel

Tes aglutinasi partikel mendeteksi keberadaan antibodi spesifik atau antigen di sampel

uji melalui aglutinasi partikel dilapisi dengan komplemen antigen tertentu atau antibodi

masing-masing. Tes aglutinasi, terutama tes antibodi menggunakan berbagai partikel

termasuk sel darah merah (haemagglutination) dan partikel inert seperti gelatin dan lateks.

Penggunaan partikel ini memiliki keuntungan mengurangi reaktivitas non-spesifik terhadap

reaksi silang antigen sel darah merah. Prinsip-prinsip dasar haemagglutination dan tes

partikel aglutinasi adalah sama, terlepas dari jenis partikel bebas. Tes aglutinasi partikel

masih dipakai secara luas untuk mendeteksi antibodi sifilis. aglutinasi partikel tidak

melibatkan beberapa langkah atau pencucian peralatan.

Gambar Prinsip Tes Partikel Aglutinasi

Pada gambar 5.3 menunjukkan antibodi spesifik dilapisi dengan partikel lateks, kemudian

ditambahkan serum atau plasma yang mengandung antigen maka akan terbentuk aglutinasi

yang dapat diamati langsung dengan bantuan partikel lateks ini . Hasil reaktif jika terjadi

aglutinasi.

2.3.4 Rapid Test

Rapid Test dipakai sekali dan dibuang. Banyak tes cepat didasarkan pada bentuk

imunokromatografi dimana sampel ditambahkan mengalir turun strip inert dan bereaksi

dengan sebelumnya reagen dengan fase gerak. Sampel bisa serum, plasma atau bahkan darah

lengkap dalam beberapa kasus. Reaksi positif divisualisasikan sebagai titik atau garis / band

yang muncul di strip. Sebagian besar tes juga mengharuskan timbulnya garis / band pada

daerah kontrol yang dipakai untuk memvalidasi hasil masing-masing perangkat.

Gambar . Prinsip Kerja Rapid Test

Gambar menggambarkan antibodi spesifik yang dicoated konjugat emas dilapiskan

pada membran selulosa, kemudian ditambahkan serum atau plasma yang mengandung

antigen maka akan terjadi ikatan antigen-antibodi+konjugat emas yang akan bergerak ke

daerah tes yang telah dilekatkan antibody spesifik kedua dan akan terbentu warna di bagian

test. Sisa antibodi spesifik yang dicoated konjugat emas akan terus bererak ke bagian kontrol

dan akan ditangkap oleh anti IgG sehingga terbentuk pita di bagian Kontrol.

Di bawah ini pada tabel 5.2 menjelaskan perbedaan EIA dan Rapid Tes, yaitu

Tabel 5.2. Perbedaan EIA dan Rapid Test

Perbedaan EIA Rapid Tes

Penggunaan Lebih banyak langkah Mudah

Waktu Lama Cepat

Spesifisitas Bisa terjadi false positif Lebih tinggi dari EIA

Sensitivitas Tinggi Lebih rendah dari EIA

Cara deteksi Menggunakan fotometer Pengamatan langsung

-- Tes Teknologi Amplifikasi Asam Nukleat

Teknologi amplifikasi asam nukleat (NAT), seperti yang diterapkan untuk skrining darah,

mendeteksi keberadaan asam nukleat virus berbentuk DNA atau RNA dalam darah donor.

Dalam teknologi ini, segmen RNA / DNA spesifik virus ditargetkan dan diperkuat secara in-

vitro. Langkah amplifikasi memungkinkan dapat mendeteksi titer virus yang rendah dalam

sampel asli dengan meningkatkan jumlah yang target yang hadir spesifik untuk titer yang

mudah dideteksi. Kehadiran asam nukleat spesifik menunjukkan kehadiran virus itu sendiri

dan bahwa sumbangan ini mungkin menular.

Pada gambar menunjukkan pada prinsip kerja NAT RNA atau DNA virus di amplifikasi

dengan bantuan enzim reverse trankriptase untuk mendapatkan DNA virus atau agen infeksi

murni. Tes NAT baik dapat dilakukan pada donor pasien (ID) atau mini-pool (MP) untuk

mendeteksi asam nukleat dari agen infeksi. Selain tes NAT yang menargetkan asam nukleat

virus, multipleks tes skrining NAT yang dikembangkan dapat mendeteksi DNA atau RNA dari

beberapa virus secara bersamaan.

Topik 1

HEPATITIS B

A. STRUKTUR DAN MORFOLOGI

Hepatitis B merupakan suatu penyakit hati yang disebabkan oleh virus Hepatitis B, yaitu

salah satu virus termasuk anggota famili hepadnavirus yang dapat memicu peradangan

hati akut atau kronis yang dapat berlanjut menjadi sirosis hati atau kanker hati. Hepatitis B

akut jika perjalanan penyakit kurang dari 6 bulan sedangkan Hepatitis B kronis bila penyakit

menetap, tidak menyembuh secara klinis atau laboratorium atau pada gambaran patologi

anatomi selama 6 bulan.

Gambar Struktur virus Hepatitis B

Virus Hepatitis B (VHB) adalah virus (Deoxyribo Nucleic Acid) DNA terkecil berasal dari

genus Orthohepadnavirus famili Hepadnaviridae berdiameter 40-42 nm. Masa inkubasi

berkisar antara 15-180 hari dengan rata-rata inkubasi 60-90 hari. Bagian luar dari virus ini

adalah protein envelope lipoprotein, sedangkan bagian dalam berupa nukleokapsid atau core.

Genom virus hepatitis B merupakan molekul DNA sirkular untai-ganda parsial dengan 3200

nukleotida . Genom berbentuk sirkuler dan memiliki empat Open Reading Frame (ORF) yang

saling tumpang tindih secara parsial protein envelope yang dikenal sebagai selubung HBsAg

seperti large HBs (LHBs), medium HBs (MHBs), dan small HBs (SHBs) disebut gen S, yang

merupakan target utama respon imun host, dengan lokasi utama pada asam amino 100-160.

HBsAg dapat mengandung satu dari sejumlah subtipe antigen spesifik, disebut d atau y, w atau

r. Subtipe HbsAg ini menyediakan penanda epidemiologik tambahan. Gen C yang mengkode

protein inti (HBcAg) dan HBeAg, gen P yang mengkode enzim polimerase yang dipakai

untuk replikasi virus, dan terakhir gen X yang mengkode protein X (HBx), yang memodulasi

sinyal sel host secara langsung dan tidak langsung mempengaruhi ekspresi gen virus ataupun

host, dan belakangan ini diketahui berkaitan dengan terjadinya kanker hati.

Gambar . Genom virus Hepatitis B

Infeksi VHB merupakan penyebab utama hepatitis akut, hepatitis kronis, sirosis, dan

kanker hati di dunia. Infeksi ini endemis di daerah Timur Jauh, sebagian besar kepulaan Pasifik,

banyak negara di Afrika, sebagian Timur Tengah, dan di lembah Amazon. Center for Disease

Control and Prevention (CDC) memperkirakan bahwa sejumlah 200.000 hingga 300.000 orang

(terutama dewasa muda) terinfeksi oleh VHB setiap tahunnya. Hanya 25% dari mereka yang

mengalami ikterus, 10.000 kasus memerlukan perawatan di rumah sakit, dan sekitar 1-2%

meninggal.

Sepertiga penduduk dunia diperkirakan telah terinfeksi oleh VHB dan sekitar 400 juta

orang merupakan pengidap kronik Hepatitis B, sedangkan prevalensi di Indonesia dilaporkan

berkisar antara 3-17%. Virus Hepatitis B diperkirakan telah menginfeksi lebih dari 2 milyar

orang yang hidup saat ini selama kehidupan mereka. Tujuh puluh lima persen dari semua

pembawa kronis hidup di Asia dan pesisir Pasifik Barat. Prevalensi pengidap VHB tertinggi ada

di Afrika dan Asia. Hasil Riset Kesehatan Dasar tahun 2007 menunjukkan bahwa Hepatitis klinis

terdeteksi di seluruh provinsi di Indonesia dengan prevalensi sebesar 0,6% (rentang: 0,2%-

1,9%). Hasil Riskesdas Biomedis tahun 2007 dengan jumlah sampel 10.391 orang

menunjukkan bahwa persentase HBsAg positif 9,4%. Persentase Hepatitis B tertinggi pada

kelompok umur 45- 49 tahun (11,92%), umur >60 tahun (10.57%) dan umur 10-14 tahun

(10,02%), selanjutnya HBsAg positif pada kelompok laki-laki dan perempuan hampir sama

(9,7% dan 9,3%). Hal ini menunjukkan bahwa 1 dari 10 penduduk Indonesia telah terinfeksi

virus Hepatitis B.

B. CARA PENULARAN

Penularan virus hepatitis B (VHB) adalah melalui parenteral dan menembus membran

mukosa, terutama berhubungan seksual. Penanda HBsAg telah diidentifikasi pada hampir

setiap cairan tubuh dari orang yang terinfeksi yaitu saliva, air mata, cairan seminal, cairan

serebrospinal, asites, dan air susu ibu. Beberapa cairan tubuh ini (terutama semen dan saliva)

telah diketahui infeksius dan dapat menularkan virus VHB.

Jalur penularan infeksi VHB yang terbanyak di Indonesia adalah secara parenteral yaitu

secara vertikal (transmisi) mateRNAl-neonatal atau horisontal (kontak antar pasien yang

sangat erat dan lama, seksual, infeksi nosokomial akibat prosedur diagnostik (iatrogenik),

penggunaan jarum suntik bersama). Virus Hepatitis B dapat dideteksi pada semua sekret dan

cairan tubuh manusia, dengan konsentrasi tertinggi pada serum.

Infeksi VHB berlangsung dalam dua fase. Selama fase proliferatif, DNA VHB ada

dalam bentuk episomal, dengan pembentukan virion lengkap dan semua antigen terkait.

Ekspresi gen HBsAg dan HBcAg di permukaan sel disertai dengan molekul MHC kelas I

memicu pengaktifan limfosit T sitotoksik (CD8+). Selama fase integratif, DNA virus

meyatu kedalam genom pejamu. Seiring dengan berhentinya replikasi virus dan munculnya

antibodi virus, infektivitas berhenti dan kerusakan hati mereda. Namun risiko terjadinya

karsinoma hepatoselular menetap. Hal ini sebagian disebabkan oleh disregulasi pertumbuhan

yang diperantarai protein X VHB. Kerusakan hepatosit terjadi akibat kerusakan sel yang

terinfeksi virus oleh sel sitotoksik (CD8+).

Gambar . Patogenesis imun pada virus hepatitis B

Proses replikasi VHB berlangsung cepat, sekitar 1010-1012 virion dihasilkan setiap hari.

Siklus hidup VHB dimulai dengan menempelnya virion pada reseptor di permukaan sel hati

). Setelah terjadi fusi membran, partikel core kemudian ditransfer ke sitosol dan

selanjutnya dilepaskan ke dalam nucleus (genom release), selanjutnya DNA VHB yang masuk

ke dalam nukleus mula-mula berupa untai DNA yang tidak sama panjang yang kemudian akan

terjadi proses DNA repair berupa memanjangnya rantai DNA yang pendek sehingga menjadi

dua untai DNA yang sama panjang atau covalently closed circle DNA (cccDNA).

Gambar Siklus replikasi virus hepatitis B (

Proses selanjutnya adalah transkripsi cccDNA menjadi pre-genom RNA dan beberapa

messenger RNA (mRNA) yaitu mRNA, LHBs, MHBs, dan mRNA SHBs. Semua RNA VHB

kemudian ditransfer ke sitoplasma dimana proses translasi menghasilkan protein envelope,

core, polimerase, polipeptida X dan pre-C, sedangkan translasi mRNA LHBs, MHBs, dan mRNA

SHBs akan menghasilkan protein LHBs, MHBs, dan SHBs. Proses selanjutnya adalah

pembuatan nukleokapsid di sitosol yang melibatkan proses encapsidation yaitu

penggabungan molekul RNA ke dalam HBsAg. Proses reverse transcription dimulai, DNA virus

dibentuk kembali dari molekul RNA. Beberapa core yang mengandung genom matang

ditransfer kembali ke nukleus yang dapat dikonversi kembali menjadi cccDNA untuk

mempertahankan cadangan template transkripsi intranukleus. Akan tetapi, sebagian dari

protein core ini bergabung ke kompleks golgi yang membawa protein envelope virus. Protein

core memperoleh envelope lipoprotein yang mengandung antigen surface L, M, dan S, yang

selanjutnya ditransfer ke luar sel.

Sel hati manusia merupakan target organ bagi virus Hepatitis B. Virus Hepatitis B mula-

mula melekat pada reseptor spesifik di membran sel hepar kemudian mengalami penetrasi ke

dalam sitoplasma sel hepar. Virus melepaskan mantelnya di sitoplasma, sehingga melepaskan

nukleokapsid. Selanjutnya nukleokapsid akan menembus sel dinding hati. Asam nukleat VHB

akan keluar dari nukleokapsid dan akan menempel pada DNA hospes dan berintegrasi pada

DNA ini . Proses selanjutnya adalah 17 DNA VHB memerintahkan sel hati untuk

membentuk protein bagi virus baru. Virus Hepatitis B dilepaskan ke peredaran darah, terjadi

mekanisme kerusakan hati yang kronis disebabkan karena respon imunologik penderita

terhadap infeksi.

Proses replikasi virus tidak secara langsung bersifat toksik terhadap sel, terbukti banyak

carrier VHB asimtomatik dan hanya memicu kerusakan hati ringan. Respon imun host

terhadap antigen virus merupakan faktor penting terhadap kerusakan hepatoseluler dan

proses klirens virus, makin lengkap respon imun, makin besar klirens virus dan semakin berat

kerusakan sel hati. Respon imun host dimediasi oleh respon seluler terhadap epitop protein

VHB, terutama HBsAg yang ditransfer ke permukaan sel hati. Human Leukocyte Antigen (HLA)

class I-restricted CD8+ cell yang mengenali fragmen peptida VHB setelah mengalami proses

intrasel dan dipresentasikan ke permukaan sel hati oleh molekul Major Histocompability

Complex (MHC) kelas I. Proses berakhir dengan penghancuran sel secara langsung oleh

Limfosit T sitotoksik (CD8+).

C. GEJALA KLINIS

Manifestasi klinis infeksi VHB pada pasien hepatitis akut cenderung ringan. Hepatitis B

sulit dikenali karena gejala-gejalanya tidak langsung terasa dan bahkan ada yang sama sekali

tidak muncul. sebab itulah, banyak orang yang tidak menyadari bahwa dirinya telah

terinfeksi. Virus ini biasanya berkembang selama 1-5 bulan sejak terjadi pajanan terhadap

virus sampai kemunculan gejala pertama. Kondisi asimtomatis ini terbukti dari tingginya

angka pengidap tanpa adanya riwayat hepatitis akut. Apabila menimbulkan gejala hepatitis,

gejalanya menyerupai hepatitis virus yang lain tetapi dengan intensitas yang lebih berat.

Beberapa gejala umum hepatitis B antara lain :

− Kehilangan nafsu makan.

− Mual dan muntah.

− Nyeri di perut bagian bawah.

− Sakit kuning (dilihat dari kulit dan bagian putih mata yang menguning).

− Gejala yang mirip pilek, misalnya lelah, nyeri pada tubuh, dan sakit kepala.

Gejala hepatitis akut terbagi dalam 4 tahap, yaitu:

1) Fase Inkubasi

Merupakan waktu antara masuknya virus dan timbulnya gejala atau ikterus. Fase inkubasi

Hepatitis B berkisar antara 15-180 hari dengan rata-rata INKUBASI 60-90 hari.

2) Fase prodromal (pra ikterik)

Fase diantara timbulnya keluhan-keluhan pertama dan timbulnya gejala ikterus.

Awitannya singkat atau insidous ditandai dengan malaise umum, mialgia, artalgia, mudah

lelah, gejala saluran napas atas dan anoreksia. Diare atau konstipasi dapat terjadi. Nyeri

abdomen biasanya ringan dan menetap di kuadran kanan atas atau epigastrum, kadang

diperberat dengan aktivitas akan tetapi jarang menimbulkan kolestitis.

3) Fase ikterus

Ikterus muncul setelah 5-10 hari, tetapi dapat juga muncul bersamaan dengan munculnya

gejala. Banyak kasus pada fase ikterus tidak terdeteksi. Setelah timbul ikterus jarang

terjadi perburukan gejala prodromal, tetapi justru akan terjadi perbaikan klinis yang

nyata.

4) Fase konvalesen (penyembuhan)

Diawali dengan menghilangnya ikterus dan keluhan lain, tetapi hepatomegali dan

abnormalitas fungsi hati tetap ada. Muncul perasaan sudah lebih sehat dan kembalinya

nafsu makan. Sekitar 5-10% kasus perjalanan klinisnya mungkin lebih sulit ditangani,

hanya <1% yang menjadi fulminan ,

Hepatitis B kronis didefinisikan sebagai peradangan hati yang berlanjut lebih dari enam

bulan sejak timbul keluhan dan gejala penyakit. Perjalanan hepatitis B kronik dibagi menjadi

tiga fase penting yaitu :

1) Fase Imunotoleransi

Sistem imun tubuh toleren terhadap VHB sehingga konsentrasi virus tinggi dalam darah,

tetapi tidak terjadi peradangan hati yang berarti. Virus Hepatitis B berada dalam fase

replikatif dengan titer HBsAg yang sangat tinggi.

2) Fase Imunoaktif (Clearance)

Sekitar 30% pasien persisten dengan VHB akibat terjadinya replikasi virus yang

berkepanjangan, terjadi proses nekroinflamasi yang tampak dari kenaikan konsentrasi

ALT. Fase clearance menandakan pasien sudah mulai kehilangan toleransi imun terhadap

VHB.

3) Fase Residual

Tubuh berusaha menghancurkan virus dan menimbulkan pecahnya sel-sel hati yang

terinfeksi VHB. Sekitar 70% dari pasien ini akhirnya dapat menghilangkan sebagian

besar partikel virus tanpa ada kerusakan sel hati yang berarti. Fase residual ditandai

dengan titer HBsAg rendah, HBeAg yang menjadi negatif dan anti-HBe yang menjadi

positif, serta konsentrasi ALT normal.

D. METODE PEMERIKSAAN

Virus Hepatitis B ada dalam aliran darah dengan titer virus itu sendiri bervariasi.

Dalam orang yang baru terinfeksi, DNA virus biasanya terdeteksi meskipun tidak selalu pada

titer tinggi. Pada pasien kronis, bila ditemukan DNA virus hepatitis B maka darah donor

ini infeksius atau jika tidak ditemukan DNA virus dan viremia dengan titer sangat rendah

atau tidak ada sama sekali, maka darah donor ini tidak infeksius.

Skrining untuk antigen permukaan hepatitis B (HBsAg) menunjukkan infeksi dengan

VHB, tetapi tidak dengan sendirinya membedakan antara infeksi baru dan kronis. Perbedaan

antara infeksi akut dan kronis tidak relevan dengan penyaringan darah, semua sumbangan

HBsAg positif harus dianggap berisiko tinggi transmisi VHB dan tidak akan dikeluarkan untuk

transfusi. Beberapa penelitian menunjukkan ketika HBsAg negatif pada beberapa pasien

dengan titer DNA virus rendah yang terdeteksi oleh Nucleic Acid Test (NAT), maka darah

ini dapat memicu infeksi pada resipien / penerima. Infeksi kemudian memiliki

probabilitas yang lebih tinggi untuk maju ke sirosis dan karsinoma hepatoseluler.

Serologi virus hepatitis B adalah kompleks. Sejumlah tanda serologi yang berbeda

mengembangkan selama infeksi, termasuk antigen permukaan hepatitis B (HBsAg) dan

antibodi hepatitis B inti (anti-HBc). Metode yang dipakai untuk mengidentifikasi

keberadaan VHB menggunakan target skrining berikut:

-- Metode serologis:

− Antigen permukaan Hepatitis B (HBsAg) : 3 minggu setelah infeksi.

− Hepatitis B inti (Hbc) antibodi ( anti-HBs dengan titer ≥ 100 mIU/mL, maka dianggap

aman)

-- Asam nukleat virus: HBV DNA.

Untuk meminimalkan risiko infeksi penularan virus hepatitis B melalui transfusi, maka

direkomendasikan oleh WHO sebagai berikut :

1) Skrining harus dilakukan dengan menggunakan sangat sensitif dan spesifik yaitu HBsAg

immunoassay (EIA / CLIA).

2) Skrining menggunakan HBsAg rapid test yang sangat sensitif dan spesifik atau

pemeriksaan partikel aglutinasi dapat dilakukan di laboratorium yang kecil, di daerah

terpencil atau dalam situasi darurat.

3) Skrining untuk anti-HBc tidak dianjurkan sebagai rutinitas. Negara harus menentukan

kebutuhan untuk skrining anti-HBc berdasarkan prevalensi dan kejadian infeksi HBV.

4) Skrining untuk ALT tidak dianjurkan.

 Pemeriksaaan HBsAg metode rapid Test

Prinsip pemeriksaan :

HBsAg dalam sampel akan berikatan dengan anti-HBs colloidal

gold konjugat membentuk komplek yang akan bergerak melalui membran area tes

yang telah dilapisi oleh anti-HBsAg. Kemudian terjadi reaksi membentuk garis berwarna

merah muda keunguan yang menunjukkan hasil positif pada area tes. Apabila dalam

sampel tidak ada HBsAg maka tidak akan menimbulkan garis merah pada area tes.

Kelebihan anti-HBs colloidal gold konjugat akan terus bergerak menuju area kontrol (C)

yang telah dilapisi anti IgG tikus dari serum kambing (anti-mouse IgG antibody), sehingga

berikatan dan membentuk garis merah pada area kontrol yang menunjukkan hasil

pemeriksaan valid.

Cara kerja :

1) Disiapkan alat dan bahan yang akan dipakai .

2) Dilakukan pengambilan sampel.

3) Dimasukan darah kedalam tabung reaksi, diamkan selama 30 menit, kemudian di

sentrifus selama 15 menit dengan kecepatan 3000 rpm.

4) Serum/plasma terbentuk kemudian dipindahkan ke tabung kosong lainnya

5) Celupkan reagen strip kedalam tabung yg telah di isi sampel tadi sampai tanda batas

pada strip,biarkan selama 15 menit.

6) Pengamatan hasil tidak boleh dibaca lebih dari 20 menit.

interpretasi Hasil :

− Positif (+)

Selain timbul garis merah pada daerah control (C), akan muncul 1 (satu) garis merah

yang nyata di daerah test (T), hasil positif menyatakan adanya HBsAg.

− Negatif (-)

Timbul 1 (satu) garis merah pada bagian kontrol (C), dan tidak ada garis merah di

daerah test (T).

− Invalid

Sama sekali tidak muncul warna merah baik pada daerah test (T), maupun kontrol

(C), merupakan adanya indikasi adanya kesalahan prosedur atau reagen test yang

rusak.

 Pemeriksaaan HBsAg metode ELISA / CHLIA

Gambar Prinsip Pemeriksaan HBsAg Metode ELISA

Prinsip pemeriksaan : Antibodi ganda “sandwich” imunosai yang menggunakan

antibodi anti-HBsAg spesifik: antibodi monklonal HBsAg yang berada di dasar sumur

mikrotiter dan antibodi poliklonal HBsAg ditambahkan dengan Horseradish Peroxidase

(HRP) sebagai larutan konjugat. Selama pemeriksaan, adanya HBsAg dalam spesimen

akan bereaksi dengan antibodi-antibodi ini untuk membentuk kompleks imun

“antibodi-HBsAg-antibodi- HRP”. Setelah materi yang tidak terikat tercuci selama

pemeriksaan, substrat ditambahkan untuk menunjukkan hasil tes. Munculnya waRNA

biru di sumur mikrotiter mengindikasikan HBsAg reaktif. Tidak adanya waRNA

menunjukkan hasil non reaktif di spesimen

Alat dan Bahan :

- Alat

1. Mikrotiter well

2. Mikropipet

3. Tip Kuning dan Tip Biru

4. Inkubator

5. ELISA Reader

6. ELISA Washer

- Reagen

1. Enzim Konjugat

2. Kontrol Positif

3. Kontrol Negatif

4. Sampel diluent

5. Color A dan B

6. Stop Solution

7. Wash Buffer

- Sampel serum pasien

Cara Kerja :

a. Pembuatan Wash Buffer

1. Wash buffer pekat dicampurkan dengan aquadest perbandingan (1:19)

2. Campuran yang sudah jadi disimpan pada suhu ruang selama seminggu

b. Prosedur Pemeriksaan

1) Semua reagen dan specimen dikondisikan pada suhu ruang.

2) Siapkan nomor yang dibutuhkan untuk sumur, yang terdiri dari 1 sumur blanko, 2

sumur control positif, 2 sumur untuk control negatif dan 1 sumur untuk setiap

specimen. Tulis nomor seri untuk control dan specimen pada kolom.

3) Spesimen diluents ditambahkan sebanyak 20µl pada masing-masing sumur.

4) Spesimen, control negative, control positif ditambahkan sebanyak 100µl sesuai

dengan kolom data. (sediakan 1 sumur untuk blanko)

5) Kemudian dihomogenkan

6) Plate diinkubasi pada incubator suhu 37°C ± 1 jam

7) Enzyme conjugate ditambahkan pada setiap sumur ± 50µl.

8) Plate diinkubasi pada incubator suhu 37°C ± 30 menit.

9) Setiap sumur dicuci dengan wash buffer dengan prosedur :

-- Pencucian yang dilakukan harus sesuai dengan petunjuk apabila ada

pencucian yang tidak sempuRNA maka akan mempengaruhi hasil.

-- Semua isi sumur dimasukkan pada labu cuci. Kemudian ditambahkan wash buffer

350/lebih.

-- Pastikan tidak ada cairan di dalam tip dan setelah pemipetan terakhir.

10) Color A & B dimasukkan pada setiap sumur sebanyak 50µl

11) Plate diinkubasi pada waterbath/inkubator 37° C± 30 menit

12) Hentikan reaksi dengan penambahan 50µl stopping solotion disetiap sumur

13) Absorbansi setiap sumur dibaca pada 450nm & 630nm λ λ

14) Perhitungan

- Single wave length (λ=450nm)

OD = OD450 ±ODBC450

= sampel – control

- Dual wave length (λ=630nm)

Hasil pemeriksaan valid jika :

1) Nilai OD blanko kurang dari 0.100 ( sumur dari kontrol blanko hanya berisi

kromogen dan stop solution)

2) Nilai OD kontro negatif harus sama atau kurang dari () 0.100. Dieliminasi kontrol negatif

dengan nilai OD lebih besar dari () 0.100. Jika 2 nilai keluar dari batas, pemeriksaan

invalid dan harus di ulangi.

3) Nilai OD kontrol positif sama atau lebih besar () 0.500. Jika nilai OD kurang dari 0.500,

pemeriksaan invalid dan harus di ulangi

Perhitungan kontrol :

Nilai cut-off (CO) = NCx . 2,1

NCx : nilai absorbansi rata-rata kontrol negative (jika NCx  0.05 , NCx harus dihitung 0.05)

Interpretasi hasil :

1) Spesimen dengan absorbansi kurang dari (<) nilai cut-off dinyatakan negatif.

2) Spesimen dengan nilai absorbansi lebih besar atau sama dengan () nilai cut-off

dinyatakan positif.

Topik 2

Human Immunodeficiency Virus (HIV)

A. STRUKTUR DAN MORFOLOGI

Sejarah HIV dimulai pada tahun 1981 di Amerika Serikat melaporkan kasus Gay Related

Immune Deficiency (GRID), yaitu penurunan kekebalan tubuh yang dihubungkan dengan kaum

gay/homoseksual. Pada tahun 1982 , CD–USA (Centers for Disease Control) Amerika Serikat

untuk pertama kali membuat definisi AIDS dan juga ditemukan penyebab kelainan ini adalah

LAV (Lymphadenophaty Associated Virus) oleh Luc Montagnier dari Pasteur Institut Paris.

Tahun 1983, Jean Claude Chermann dan Françoise Barré-Sinnousi melakukan isolasi dari

penderita sindrom limfadenopati. Tahun 1984, Robert Gallo dari Amerika Serikat, meneliti

virus penyebab AIDS yaitu HTLV-III. Tahun 1986, InteRNAtional Committe on Taxonomi of

Viruses, memutuskan nama penyebab penyakit AIDS adalah Human Immunodeficiency Virus

(HIV) yang mengganti nama LAV dan HTLV III. Pada tanggal 15 April 1987, pertama kali AIDS

di Indonesia yaitu pasien beRNAma Edward Hop berumur 44 tahun dari Belanda, meninggal

di Rumah Sakit Sanglah Bali dan pada akhir tahun 1987 ada 6 orang yang didiagnosis HIV

positif, dua di antara mereka mengidap AIDS.

HIV (Human Immunodeficiency Virus) merupakan suatu retrovirus dengan materi

genetik (RNA) yang dapat mentransfer informasi genetik RNA ke DNA dengan menggunakan

enzim yang disebut reverse transcriptase. HIV menginfeksi berbagai sel sistem imun antara

lain : Sel T helper (CD4+), Makrofag dan sel dendritik. Infeksi HIV memicu penurunan

kekebalan tubuh yang berhubungan dengan infeksi oportunistik dan tumor ganas disebut

AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome). Virus HIV dibagi dua tipe, yaitu : HIV-1 dan HIV-

2. HIV-1 lebih cepat memicu AIDS dan bersifat akut, sedangkan HIV-2 memicu

AIDS lebih lambat dan bersifat kronik. Menurut data WHO 2010, angka kejadian HIV dari 119

negara secara global menurut mencapai 35.000.000 orang terinfeksi HIV (sekitar 33.200.000-

37.200.000 orang) dan 15.000.000 0rang meninggal .

Struktur HIV-1 (gambar 5.6.), diameter virion mencapai 100 nm, tersusun dari dua strand

RNA yang identik (viral genom) dengan panjang 9749 nukleotida yang mengkode bermacam-

macam enzim diantaranya enzim reverse transcriptase, integrase, protease yang dibungkus

dalam cone shapped core (lapisan berbantuk kerucut) yang tersusun dari protein capsid p24

dan bagian dalam protein matrix p17 yang berasal dari membran fosfolipid host yang

memeiliki protein membran gp 41 dan gp 120 yang akan berikatan dengan CD4 dan Reseptor

kemokin.

Gambar 5.13 Struktur Human Immunodeficiency Virus (HIV I)

Sumber : Cellular and Molecular Immunology.7th ed. 2012

Ekspresi gen HIV dibagi menjadi 2 tahap ekspresi gen,yaitu:

1) Early gen , mengekspresikan gen rev, tat, nef yang akan memproduksi protein yang

dikode gen ini segera setelah virus menginfeksi sel.

2) Late gen, mengekspresikan gen env, gag, dan pol, yang mengkode komponen struktural

HIV.

Gambar Genom Human Immunodeficiency Virus (HIV I)

Secara morfologi HIV-2 sama dengan HIV-1, tetapi kurang patogenik. Kedua tipe tesebut

dapat dibedakan melalui adanya atau tidak adanya antibodi yang spesifik pada HIV-2.

Meskipun reaktivitas (cross reactivity) terjadi antara protein inti kedua virus, tetapi protein

pembungkus (envelope) mereka berbeda.

B. CARA PENULARAN

Gambar 5.15 Cara Penularan HIV

Cara penularan HIV saat ini semakin jelas, meskipun virus dapat disiolasi dari banyak

hasil sekresi tubuh, infeksi ditularkan dari satu pasien ke pasien lain melalui tiga jalur

utama, yaitu :

1) Kontak seksual (hubungan seks), merupakan cara penularan paling besar terutama pada

kelompok heteroseksual dan homoseksual (laki-laki).

2) Penularan dari ibu ke anak, terjadi selama kehamilan melalui saluran plasenta dan setelah

melahirkan dari asi.

3) Inokulasi pasien oleh darah penderita HIV atau produk darah transfusi dari donor pemakai

obat/ narkoba melalui jarum suntik dan transfusi darah yang terinfeksi HIV

Penularan HIV melalui hubungan seksual merupakan jalur yang sangat penting. Di Afrika

dampak penularan secara heteroseksual, menunjukkan peningkatan jumlah wanita yang

terinfeksi dan menularkan infeksinya ke anak mereka. Dengan demikian peningkatan populasi

yang terinfeksi terjadi dari dua sisi, yaitu : pada orang dewasa (penularan secara horizontal)

dan pada bayi (penularan secara vertikal).

HIV ditularkan melalui kontak seksual, paparan darah yang terinfeksi atau sekret dari

kulit yang terluka, dan oleh ibu yang terinfeki ke janinnya atau melalui laktasi. Siklus replikasi

HIV dimulai dari ikatan antara HIV’s gp120 binding protein yang terletak di permukaan virus

dengan reseptor CD4+. Molekul gp 41 akan menetrasi membrane plasma sel target kemudian

membawa virion masuk kedalam sel target.

Sebuah kompleks preintegrasi virus yang terdiri dari RNA dan enzim virus dilepaskan ke

dalam sitoplasma sel target. Kompleks ini akan mencapai nukleus dan mempromosikan

transkripsi dari genom RNA menjadi DNA oleh enzim reverse transcriptase. Kompleks protein

coat akan menghasilkan double stranded DNA. Pada proses ini, genom viral rentan terhadap

faktor imunitas seluler yang menghambat progresifitas infeksi. DNA virus akan terintegrasi ke

dalam kromosom host oleh enzim integrase.

Telah diketahui bahwa sejumlah mekanisme untuk menurunkan CD4+ dapat diinduksi

oleh infeksi langsung dan destruksi oleh HIV. Kombinasi dari patogenitas virus dan respon

kekebalan tubuh yang terjadi selama infeksi mempengaruhi perkembangan stadium lanjut

penyakit yang merupakan suatu kompleks dan bervariasi.

Transfusi darah juga dapat menjadi jalur penularan HIV yang penting dan efisiensi

penularan HIV diperkirakan lebih dari 90%. Satu transfusi positif HIV rata-rata dapat

memicu kematian setelah jangka waktu dua tahun pada anak-anak dan lima tahun pada

orang dewasa. meskipun demikian, sejauh mana transfusi darah menjadi jalur penularan

utama tergantung pada prevalensi dari inidividu yang terinfeksi dala suatu populasi dan

efektivitas dari program uji saring yang dipakai . Jika dalam suatu populasi dimana

prevalensi pasien yang terinfeksi rendah dan program uji saring baik, maka penularan

melalui transfusi darah menjadi jarang dan dapat disimpulkan transfusi darah bukan

merupakan penularan HIV yang utama. Sebaliknya jika dalam suatu populasi ada

prevalensi pasien yang terinfeksi tinggi dan program uji saring jelek atau bahkan tidak ada,

maka penularan HIV lewat transfusi darah sangat mungkin terjadi dan merupakan jalur

penularan utama dalam populasi ini .

Langkah pertama untuk mencegah penularan melalui transfusi darah adalah dengan

menyeleksi donor, sehingga mendapat donor yang memiliki resiko rendah terhadap infeksi

yang ditularkan. Darah dari seorang donor yang aman akan memberikan darah donasi yang

aman untuk resipien. Meskipun demikian, tetap harus dilakukan atau melaksanakan program

uji saring antibodi HIV agar darah yang terinfeksi dapat diidentifikasi dan dibuang.

C. GEJALA KLINIS

Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) merupakan kumpulan gejala atau

penyakit yang disebabkan oleh menurunnya kekebalan tubuh akibat infeksi oleh virus HIV.

AIDS merupakan stadium ketika sistem imun penderita jelek dan penderita menjadi rentan

terhadap infeksi yang dinamakan infeksi oportunistik. Pada pasien yang terinfeksi HIV

dengan jumlah CD4 < 200μL juga merupakan definisi AIDS meskipun tanpa adanya gejala yang

terlihat atau infeksi oportunistik. Infeksi oportunistik merupakan infeksi yang tidak terkontrol

dari penyebab infeksi yang ada dan tidak dapat dikendalikan. Infeksi-infeksi umum ini

mencakup :

1) Pnemonia yang disebabkan oleh Pneumocytis carinii.

2) Tuberkulosis yang disebabkan oleh Mycobacterium tuberculosis atau Mycobacterium

avium / intracellularis.

3) Kriptosporidiosis kronis

4) Toxoplasmosis

5) Infeksi-infeksi virus lain, seperti Cytomegalovirus.

Kanker sekunder diantaranya sarkoma kaposi dan limfoma non-Hodgkins merupakan

kondisi lain yang kadangkala ditemukan pada pasien-pasien AIDS. Kanker ini biasanya ganas

dan tidak merespon secara baik pemberian kemoterapi standar. Beberapa negara di dunia,

ada pasien yang mengidap ARC (AIDS Related Complex) atau AIDS dengan diare berat.

Adanya infeksi oportunistik atau kanker-kanker sekunder hanya dapat ditentukan setelah

penelitian klinis dan hasil laboratorium.

Ada 2 klasifikasi yang sampai sekarang sering dipakai untuk remaja dan dewasa yaitu

klasifikasi menurut WHO dan Centers for Disease Control and Preventoin (CDC) Amerika

Serikat. Di negara-negara berkembang menggunakan sistem klasifikasi WHO dengan memakai

data klinis dan laboratorium, sementara di negara-negara maju dipakai sistem klasifikasi

CDC. Klasifikasi menurut WHO dipakai pada beberapa Negara yang pemeriksaan limfosit

CD4+ tidak tersedia. Klasifikasi stadium klinis HIV/AIDS WHO dibedakan menjadi 4 stadium,

yaitu :

Tabel 18. Stadium HIV menurut WHO

STADIUM GEJALA KLINIS

I -- Tidak ada penurunan berat badan

-- Tanpa gejala atau hanya Limfadenopati Generalisata Persisten

II -- Penurunan berat badan <10%

-- ISPA berulang: sinusitis, otitis media, tonsilitis, dan faringitis

STADIUM GEJALA KLINIS

-- Herpes zooster dalam 5 tahun terakhir

-- Luka di sekitar bibir (Kelitis Angularis)

-- Ulkus mulut berulang

-- Ruam kulit yang gatal (seboroik atau prurigo)

-- Dermatitis Seboroik

-- Infeksi jamur pada kuku

III -- Penurunan berat badan >10%

-- Diare, demam yang tidak diketahui penyebabnya >1 bulan

-- Kandidiasis oral atau Oral Hairy Leukoplakia

-- TB Paru dalam 1 tahun terakhir

-- Limfadenitis TB

-- Infeksi bakterial yang berat: Pneumonia, Piomiosis

-- Anemia (<8 gr/dl), Trombositopeni Kronik (<50109 per liter)

IV -- Sindroma Wasting (HIV)

-- Pneumoni Pneumocystis

-- Pneumonia Bakterial yang berat berulang dalam 6 bulan

-- Kandidiasis esofagus

-- Herpes Simpleks Ulseratif >1 bulan

-- Limfoma

-- Sarkoma Kaposi

-- Kanker Serviks yang invasif

-- Retinitis CMV

-- TB Ekstra paru

-- Toksoplasmosis

-- Ensefalopati HIV

-- Meningitis Kriptokokus

-- Infeksi mikobakteria non-TB meluas

-- Lekoensefalopati multifokal progresif

-- Kriptosporidiosis kronis, mikosis meluas

Di Indonesia, pada tahun 2007 oleh KPA (Komisi Penanggulangan AIDS) diagnosis AIDS

dengan kriteria WHO dipakai untuk keperluan surveilans epidemiologi. Dalam hal ini

seseorang dapat didiagnosis berdasarkan gejala klinis, yang terdiri dari gejala mayor dan

minor. Pasien yang dikatakan AIDS jika menunjukan hasil tes HIV positif disertai minimal

ada 2 gejala mayor atau ada 2 (dua) gejala minor dan 1 (satu) gejala mayor. Tabel

5.2 menunjukkan Gejala mayor dan gejala minor infeksi HIV / AIDS

Tabel 19. Gejala mayor dan minor infeksi HIV/AIDS

GEJALA MAYOR GEJALA MINOR

-- Berat badan turun >10% dalam 1 bulan

-- Diare kronik, berlangsung > 1 bulan

-- Demam berkepanjangan > 1 bulan

-- Penurunan Kesadaran

-- Demensia/HIV ensefalopati

-- Batuk menetap > 1 bulan

-- Dermatitis generalisata

-- Herpes Zooster multisegmental dan

berulang

-- Kandidiasis orofaringeal

-- Herpes simpleks kronis progresif

-- Limfadenopati generalisata

-- Infeksi jamur berulang pada alat

kelamin wanita

-- Retinitis Cytomegalovirus

D. METODE PEMERIKSAAN

Secara umum diagnosis HIV dibagi menjadi dua prinsip pendeteksian, yaitu deteksi

antibodi dan deteksi virus . RNA virus HIV dapat di deteksi menggunakan Nucleic Acid Test

(NAT) sekitar 11 hari setelah terinfeksi. Pemeriksaan skrining antibodi HIV dipakai untuk

diagnosis primer yang diikuti dengan tes konfirmasi jika hasil positif/reaktif pada hal hasil

pemeriksaan skrining. Selain metode ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) dan juga

dipakai pemeriksaan partikel aglutinasi. Tes ELISA yang disetujui mengandung antigen HIV-

1 kelompok M, khususnya HIV-1 M: B, kelompok O dan HIV-2. Tergantung pada pabrikan,

antigen yang diturunkan dari reverse transcriptase dan protein p24 ditambahan dalam sistem

pemeriksaan. Selain itu, pemeriksaan bergantung pada respon imun dan titer antibodi. Infeksi

dapat dideteksi secara serologis setelah 3 minggu tapi biasanya setelah 4-5 minggu. Dalam

kasus yang jarang terjadi, orang yang terinfeksi HIV dengan imunosupresi lengkap

kemungkinan antibodi HIV-negatif, tetapi mereka memiliki gejala klinis khas HIV dan titer virus

yang terukur dalam darah.

Langkah pertama untuk mendiagnosis HIV/AIDS adalah anamnesis secara keseluruhan

kemudian ditemukan adanya faktor resiko dan menemukan temuan klinis pada pemeriksaan

fisik. Tes diagnostik untuk HIV yang sampai sekarang masih dipakai adalah ELISA (enzyme-

linked immunoabsorbent assay), rapid test, Western Blot, dan PCR (Polymerase chain

reaction) dengan sampel whole blood, dried bloodspots, saliva dan urin.

Rapid test disarankan untuk kasus kecelakaan kerja bagi petugas yang terpapar darah

penderita HIV/AIDS atau pada penderita yang kemungkinan tidak mau datang kembali untuk

menyampaikan hasil tes HIV. Tes ELISA merupakan pemeriksaan yang umum dilakukan karena

praktis dan sensitifitasnya tinggi. Rekomendasi WHO jika tes ELISA dengan 3 reagen yang

berbeda hasilnya postif semua atau rapid test dengan 3 reagen hasilnya positif semua maka

tidak dianjurkan tes Western Blot (WB). Berikut ini adalah algoritma untuk pemeriksaan HIV

pada donor

 Pemeriksaan HIV 1/2 Metode Rapid Tet

Prinsip :

Pemeriksaan rapid tes ini merupakan uji kualitatif untuk mendeteksi antibodi spesifik

untuk HIV 1 (IgG, IgM, IgA) termasuk subtipe O dan atibodi HIV-2 dalam serum, plasma

atau darah lengkap. Pada bagian tes (T) membaran strip dilekatkan antigen

recombinant HIV-1 capture antigen (gp41, p24) pada daerah garis tes 1 dan antigen

recombinant HIV-2 capture antigen (gp36) pada daerah garis tes 2. Antigen

recombinan HIV-1/2 (gp41, p24 and gp36) dan colloid gold conjugate di bagian well

sampel akan berikatan dengan antibodi HIV1/2 pada sampel dan bergerak pada

membran kromatografi menuju daerah tes (T), sehingga apa bila ada antibodi HIV

1/2 akan membentuk garis nyata berwarna ungu pada daerah tes (T) yang merupakan

ikatan komplek antigen – antibodi – antigen gold partikel dengan spesisfisistas dan

sensitivitas yang tinggi . Kelebihan Antigen recombinan HIV-1/2 (gp41, p24 and gp36)

dan colloid gold conjugate akan terus bergerak menuju area kontrol (C) yang telah

dilapisi antibodi HIV1/2 rekombinan, sehingga berikatan dan membentuk garis merah

pada area kontrol yang menunjukkan hasil pemeriksaan valid. Hasil reaktif harus

dikonfirmasi menggunakan pemeriksaan HIV metode ELISA atau Western Blot.

Alat dan Bahan :

4) HIV 1/2 Rapid test ( test strip , diluent dan pipet kapiler)

5) Mikropipet (10 µL, 20 µL)

6) Tip kuning

7) Timer

8) Sampel pasien (serum atau plasma atau darah lengkap)

Cara kerja :

1) Siapakan alat dan bahan yang diperlukan,kemudian simpan pada suhu kamar.

2) Buka kemasan kit pemeriksaan pada permukaan yang datar dan kering.

3) Untuk sampel menggunakan pipet kapiler, dipipet 20µL sampel darah dan

masukkan ke dalam sampel well (S). Untuk sampel yang menggunakan mikropipet,

dipipet 10 µL untuk serum atau plasma dan jika menggunakan sampel darah

dipipet 20 µL , kemudian masukkan kedalam sampel well (S)

4) Tambahkan 4 tetes larutan diluent secara vertikal ke dalam sampel well (S).

Perhatian: jika meneteskan tidak vertikal maka akan mempengaruhi keakuratan

hasil, dianjurkan hanya 4 tetes, apabila berlebih (5-6 tetes) akan mempengaruhi

terbentuknya garis menjadi tidak jelas. .

5) Baca hasil pengamatan 10-20 menit. Peringatan : jangan membaca hasil lebih dari

20 menit

Interpretasi Hasil

- Negatif : hanya terbentuk satu garis pada daerah kontrol (C).

- Positif :

b) Positif HIV-1 : Terbentuk dua garis ungu, satu garis di daerah tes 1 (T1)

dan satu garis di daerah kontrol (C).

c) Positif HIV-2 : Terbentuk dua garis ungu, satu garis di daerah tes 2 (T2)

dan satu garis di daerah kontrol (C).

- Invalid : Tidak terbentuk garis pada daerah kontrol (C).

Catatan : apabila terbentuk 3 garis yaitu di daerah Tes 1 (T1), Tes 2 (T2) dan kontrol

(C), maka harus dikonfirmasi dengan western Blot untuk penentuan jenis virus.

 Pemeriksaan HIV 1/2 Metode ELISA

Prinsip :

Gambar Prinsip pemeriksaan HIV 1/2 metode ELISA

Test Microlisa HIV merupakan test berbasis Indirect ELISA. Protein HIV envelope gp41,

gp 120 untuk HIV-1, dan gp 36 untuk HIV-2 yanga merupakan epitop imunodominan

dilekatkan pada sumur mikrotiter. Sampel dan kontrol ditambahkan ke dalam sumur

dan di inkubasi. Apabila pada sampel ada antibodi HIV-1 dan HIV 2 maka akan

berikatan dengan antigen spesifik yang telah dilekatkan pada permukaan sumur. Plate

kemudian dicuciuntuk menghilangkan komponen yang tidak berikatan. Horseradish

peroxidase (HRP) konjugat dan antihuman IgG ditambahkan ke dalam setiap well.

Konjugat akan berikatan dengan komplek HIV antigen-antibody yang terbentuk.

Selanjutnya larutan substrat yang mengandung kromogen dan hidrogen peroksida

ditambahkan pada setiap sumur dan diinkubasi. Warna biru yang terbentuk sebanding

dengan jumlah antibodi HIV-1 dan atau antibodi HIV-2 yang ada pada sampel.

Kemudian perubahan warna yang terbentuk dihentikan oleh stop solution. Warna yang

terbentuk dibaca pada ELISA reader dengan panjang gelombang 450 nm. Apabila

sampel tidak mengandung antibodi HIV-1 dan atau antibodi HIV-2, maka tidak akan

terbentuk warna biru pada sumur.

Alat dan bahan :

1) ELISA Kit untuk deteksi antibodi HIV-1/2

2) Mikropipet

3) Timer Elisa

4) reader Elisa

5) Washer ELISA

6) Inkubator370C

7) Vortex

8) Sarung tangan

9) Tisu atau kertas saring

10) Sampel (serum atau plasma)

Cara kerja

1) Dipipet 100 µl sample diluent dan masukkan ke sumur A-1 well sebagai blank.

2) Dipipet 100 µl kontrol negatif dan masukkan ke setiap sumur dengan nomor B-1 dan

C-1. Perhatian : negatif kontrol siap dipakai tidak perlu diencerkan.

3) Dipipet 100 µl Positif kontrol dan masukkan pada sumur D-1, E-1 & F-1. Perhatian :

negatif kontrol siap dipakai tidak perlu diencerkan.

4) Dipipet 100 µl sample diluent dan masukkan ke setiap sumur dimulai dari G-1 diikuti

dengan penambahan sampel sebanyak 10µl.

5) Tutup plate.

6) Inkubasi pada 37°C ± 2°C selama 30 menit ± 2 menit.

7) Selama inkubasi siapkan larutan pencuci (wash buffer) dan larutan kerja konjugat

spesifik.

8) Keluarkan plate dari inkubator dan cuci 5 kali dengan larutan pencuci (wash buffer)

9) Tambahkan 100 µl larutan HRP konjugat pada setiap sumur dari mulai A-1.

10) Tutup plate

11) Inkubasi pada 37°C ± 2°C selama 30 menit ± 2 menit

12) Buang dan cuci seperti prosedur no 8

13) Tambahkan 100 µl TMB substrat pada setiap sumur dari mulai A-1

14) Inkubasi pada suhu ruang (20 - 30ºC) selama 30 menit pada keadaan gelap

15) Tambahkan 100 µl of larutan stop pada setiap sumur.

16) Baca absorban pada panjang gelombang 450 nm dalam waktu 30 menit pada ELISA

READER setelah blanking sumur A-1.

Tes validitas :

1) Nilai absorban Blanko harus lebih kecil dari 0,100

2) Nilai absorban Negatif kontrol harus < 0,150

3) Nilai absorban Positif kontrol ha> 0,50

Interpretasi Hasil

1) Spesimen dengan absorbansi kurang dari (<) nilai cut-off dinyatakan negatif.

2) Spesimen dengan nilai absorbansi lebih besar atau sama dengan () nilai cut-off

dinyatakan positif.

Topik 3

Hepatitis C

A. STRUKTUR DAN MORFOLOGI

Hepatitis C adalah jenis yang paling berbahaya dari semua jenis virus hepatitis, karena

infeksi ini biasanya tidak menimbulkan gejala sampai di tahapan akhir infeksi kronis.

Kebanyakan orang tidak menyadari bahwa mereka terinfeksi hepatitis sampai akhirnya

menderita kerusakan hati permanen beberapa tahun kemudian, saat dilakukan tes medis

rutin.

Pada tahun 1980-an timbul sejumlah kasus hepatitis yang menyebar melalui transmisi

parenteral. Virus ini tidak dapat dikatagorikan dalam kelompok atau tipe virus hepatitis yang

ada saat itu, yaitu virus hepatitis A, B dan Delta. Seiring dengan perkembangan teknologi,

ditemukanlah metode isolasi dan karakterisasi RNA virus. Virus ini kemudian dikenal dengan

virus hepatitis C dan merupakan penyebab dominan kasus infeksi akibat virus hepatitis non A

dan non B (NANBH). Hepatitis C adalah peradangan hati yang disebabkan oleh virus hepatitis

C (hepatitis C virus/HCV), yaitu virus yang bergenom RNA untai tunggal dan dikatagorikan ke

dalam kelompok Flaviviridae . Dalam perjalanan penyakitnya hepatitis C dapat menjadi infeksi

akut dan infeksi kronis, dimana dari infeksi kronis ini dapat berkembang menjadi fibrosis

dan kanker hati . Hepatitis C juga berpotensi menjadi kejadian luar biasa (KLB). Oleh sebab itu

penyakit hepatitis C masih termasuk dalam masalah kesehatan utama di indonesia.

Patogenesis infeksi HCV hingga memicu hepatitis C tidak lepas dari peran struktur

genom yang dimilikinya. Sekitar 9600 nukleotida menyusun sebuah Untranslated Region dan

Open Reading Frame (ORF). Open Reading Frame akan mengkode sejumlah protein fungsional

yang berperan dalam membentuk struktur virus serta berperan dalam patogenesis infeksi,

terutama dalam hal mekanisme replikasi virus dalam sel inang. Struktur genom virus hepatitis

C, partikel HCV (virion) terdiri berukuran 40-70 nm. Virion terdiri dari bagian inti (core) yang

mengandung materi genetik berupa satu untai RNA yang dikelilingi oleh lapisan protein

pelindung dengan struktur ikosahedral yang disebut nukleokapsid. Pada bagian luar

nukleokapsid ada lapisan lipid dan glikoprotein yang membentuk struktur envelop. Open

Reading Frame mengkodekan sekitar 3000 asam amino, poliprotein ini kemudian menjadi 10

protein fungsional pascatranslasi melalui proses yang melibatkan sejumlah proteinase milik

sel inang dan virus.

Gambar 5.18 Genom Virus Hepatitis C

Pada bagian ujung terminal 5’ dan 3’ ada daerah yang disebut Untraslated Region

(UTR). Daerah ini tidak mengkodekan protein apapun, namun berperan penting dalam inisiasi

traskripsi dan translasi. Bagian yang terletak di ujung 5’ disebut daerah 5’UTR, sedangkan yang

terletak di ujung 3’ disebut 3’UTR. poliprotein post tranlasi terdiri dari protein struktural

(terletak di dekat ujung amino) dan protein non struktural (terletak di dekat ujung karboksil).

protein struktural adalah protein yang berperan dalam pembentukan struktur virus, yaitu

protein core, E1, E2 dan P7. protein non struktural terdiri dari NS2, NS3, NS4 dan NS5.

Beberapa dari protein ini akan dipotong menjadi protein berukuran kecil yang berperan dalam

replikasi virus. rantai poliprotein yang terbentuk akan dipotong melalui mekanisme yang

disebut chopping. pemotongan ini dilakukan oleh sejumlah protease.

B. CARA PENULARAN

Pada biasanya cara penularan HCV adalah parental. Semula penularan HCV

dihubungkan dengan transfusi darah atau produk darah, melalui jarum suntik. Tetapi setelah

ditemukan bentuk virus dari hepatitis, makin banyak laporan mengenai cara penularan

lainnya, yang biasanya mirip dengan cara penularan HBV, yaitu:

1) Penularan horizontal

Penularan HCV terjadi terutama melalui cara parental, yaitu tranfusi darah atau

komponen produk darah, hemodialisa, dan penyuntikan obat secara intravena.

2) Penularan vertikal

Penularan vertikal adalah penularan dari seseorang ibu pengidap atau penderita

Hepatitis C kepada bayinya sebelum persalinan, pada saat persalinan atau beberapa saat

persalinan.

Jika masuk ke dalam darah maka HCV akan segera menuju hepatosit (sel hati) dan dan

juga sel limfosit B. Hanya dalam sel hati HCV bisa berkembang biak. sebab sulitnya

membiakkan HCV pada kultur, juga tidak adanya model binatang non-primata telah

memperlambat lajunya riset HCV. Berikut ini adalah daur hidup HCV (Gambar 5.11).

Gambar 5.19. Siklus hidup virus hepatitis C

Melalui gambar skematis di atas, proses siklus kehidupan HCV digambarkan secara alur

skematis.

1) HCV masuk ke dalam hepatosit dengan mengikat suatu reseptor permukaan sel yang

spesifik. Reseptor ini belum teridentifikasi secara jelas, namun protein permukaan CD8+

adalah suatu HCV binding protein yang memainkan peranan dalam masuknya virus. Salah

satu protein khusus virus yang dikenal sebagai protein E2 menempel pada reseptor site di

bagian luar hepatosit.

2) Kemudian protein inti dari virus menembus dinding sel dengan suatu proses kimiawi

dimana selaput lemak bergabung dengan dinding sel dan selanjutnya dinding sel akan

melingkupi dan menelan virus serta membawanya ke dalam hepatosit. Di dalam

hepatosit, selaput virus (nukleokapsid) melarut dalam sitoplasma dan keluarlah RNA virus

(virus uncoating) yang selanjutnya mengambil alih peran bagian dari ribosom hepatosit

dalam membuat bahan-bahan untuk proses reproduksi.

3) Virus dapat membuat sel hati memperlakukan RNA virus seperti miliknya sendiri. Selama

proses ini virus menutup fungsi normal hepatosit atau membuat lebih banyak lagi

hepatosit yang terinfeksi kemudian menbajak mekanisme sintesis protein hepatosit

dalam memproduksi protein yang dibutuhkannya untuk berfungsi dan berkembang biak.

4) RNA virus dipergunakan sebagai cetakan (template) untuk memproduksi masal

poliprotein (proses translasi).

5) Poliprotein dipecah dalam unit-unit protein yang lebih kecil. Protein ini ada 2 jenis yaitu

protein struktural dan regulatori. Protein regulatori memulai sintesis kopi virus RNA asli.

6) Sekarang RNA virus mengopi dirinya sendiri dalam jumlah besar (miliaran kali) untuk

menghasilkan bahan dalam membentuk virus baru. Hasil kopi ini adalah bayangan cermin

RNA orisinil dan dinamai RNA negatif. RNA negatif lalu bertindak sebagai cetakan

(template) untuk memproduksi serta RNA positif yang sangat banyak yang merupakan

kopi identik materi genetik virus.

7) Proses ini berlangsung terus dan memberikan kesempatan untuk terjadinya mutasi

genetik yang menghasilkan RNA untuk strain baru virus dan subtipe virus hepatitis C.

Setiap kopi virus baru akan berinteraksi dengan protein struktural, yang kemudian akan

membentuk nukleokapsid dan kemudian inti virus baru. Amplop protein kemudian akan

melapisi inti virus baru.

8) Virus dewasa kemudian dikeluarkan dari dalam hepatosit menuju ke pembuluh darah

menembus membran sel.

Keluaran dan derajat keparahan dari infeksi virus hepatitis bergantung pada jenis virus,

jumlah virus dan faktor dari host.

C. GEJALA KLINIS

Manifestasi klinis hepatitis virus C dikenal mulai dari hepatitis akut, fulminan, kronis,

yang dapat berkembang menjadi sirosis atau kanker hati.

1) Infeksi Akut

Umumnya infeksi akut HCV tidak memberi gejala atau hanya bergejala minimal. Hanya

20-30% kasus yang menunjukkan tanda-tanda hepatitis akut 7 – 8 minggu (berkisar 2 – 26

minggu) setelah terjadinya paparan.

Infeksi virus hepatitis terbagi 3 fase, yaitu fase prodormal, fase ikterik, dan fase

convalescent. Pada fase prodormal, onset terjadi pada hari 1-14, namun rata-rata timbul pada

hari 5-7 setelah paparan. Keluhan yang sering yaitu malaise, fatique, mual dan muntah,

kehilangan selera makan, demam , gejala flu , dan kebanyakan pasien mengeluh adanya nyeri

pada perut kanan atas.

Pada fase ikterik, gejala yang sering ditimbulkan yaitu warna kuning pada mukosa sklera

pada awalnya dan berlanjut pada perubahan warna pada kulit. Durasi ikterik bervariasi,

biasanya antara 4 hari sampai beberapa bulan, namun rata-rata 2-3 minggu. Urin menjadi

gelap, feses berwarna seperti dempol (pucat). Selama fase ini, setengah penderita

menunjukkan gejala gatal-gatal.

Pada fase convalescent, kebanyakan gejala di atas menghilang (resolve). Ikterik tidak

ditemukan, warna pada kulit, urin dan feses kembali ke warna yang semula. Kembalinya nafsu

makan dan adanya peningkatan berat badan menunjukkan sudah adanya tahap

penyembuhan.

Umumnya secara klinik gejala HCV akut lebih ringan daripada hepatitis virus akut

lainnya. Masa inkubasi HCV terletak antara HAV dengan HBV, yaitu sekitar 2 – 26 minggu,

dengan rata-rata 8 minggu. Pada penderita hepatitis akut ditemukan Anti HCV positif pada

75,5% HNANB pasca-tranfusi, 35% pada HNANB sporadik dan hanya 2,4 pada HBV. Sebagian

besar penderita yang terserang HCV akut akan menjurus menjadi kronis.

RNA virus hepatitis C dapat terdeteksi sebelum gejala muncul, namun level dari viremia

pada 6 bulan pertama dapat dorman dan tidak terdeksi walaupun orang ini sedang

dalam infeksi yang persisten. Gejala awal yang ditunjukkan tergantung dari usia saat

terjadinya paparan, sistem imun penderita, adanya penyakit hati sebelumnya dan tingkat

inokulasi virus.

Level serum dari enzim hati seperti alanin aminotransferase (ALT) meningkat 10 kali

lebih tinggi dari pada normal, kemudian menurun, dan untuk orang dengan infeksi yang

persisten didapatkan kadar ALT naik turun (fluktuatif). Serum bilirubin juga dapat meningkat

setelah beberapa minggu gejala pertama muncul, namun akhirnya kembali ke level yang

normal. Secara garis besar, angka mortalitas pada infeksi akut tergolong rendah.

2) Infeksi Kronis

Infeksi akan menjadi kronik pada 70 – 90% kasus dan sering kali tidak menimbulkan

gejala apapun walaupun proses kerusakan hati berjalan terus. Adapun kriteria dari hepatitis

kronis adalah naiknya kadar transaminase serum lebih dari 2 kali nilai normal, yang

berlangsung lebih dari 6 bulan. Hilangnya HCV setelah terjadinya hepatitis kronis sangat jarang

terjadi. Jangka waktu dimana berbagai tahap penyakit hati berkembang sangat bervariasi.

Diperlukan waktu 20 – 30 tahun untuk terjadinya sirosis hati yang sering tejadi pada 15 – 20%

pasien hepatitis C kronis. Progresivitas hepatitis kronik menjadi sirosis hati tergantung

beberapa faktor resiko yaitu: asupan alkohol, ko-infeksi dengan virus hepatitis B atau Human

Immunodeficiency Virus (HIV), jenis kelamin laki-laki, usia tua saat terjadinya infeksi dan kadar

CD4+ yang sangat rendah. Bila telah terjadinya sirosis, maka risiko terjadinya karsinoma

hepatoselular adalah sekitar 1-4% pertahun. Karsinoma hepatoseluler dapat terjadi tanpa

diawali dengan sirosis, namun hal ini jarang terjadi.

3) Hepatitis C Fulminan

Hepatitis fulminan jarang terjadi. ALT (alanine amino-transferase) meninggi sampai

beberapa kali diatas batas atas normal tetapi biasanya tidak sampai lebih dari 1000 U/L.

Selain memiliki manifestasi hepatik, ada beberapa manifestasi ektrahepatik HCV yang penting

a) Mixed Cryoglobulinaemic vasculitis

Pada 50% pasien HCV biasanya terdeteksi cryoglobulin pada serum darah, dan

Kriopresipitat biasanya mengandung sejumlah besar antigen dan antibodi HCV, namun

hanya sebagian kecil pasien (10-15%) yang memiliki gejala. Gejala-gejala biasanya terkait

dengan vaskulitis, yaitu lemah, atralgia dan purpura.

b) Membranoproliferative glomerulonephritis

Pada kasus ini, telah terjadi peranan dari persarafan dan otak sehingga gejala yang

timbul lebih berat.

c) Poliarteritis Nodosa

d) Papular Acrodermatitis (Gianotti syndrome)

D. METODE PEMERIKSAAN

Penegakan diagnosis pada hepatitis virus C berdasarkan uji serologi untuk memeriksa

antibodi dan Uji HCV RNA.

1) Uji serologi

Uji serologi yang berdasarkan pada deteksi antibodi telah membantu mengurangi risiko

infeksi terkait transfusi. Sekali pasien pernah mengalami serokonversi, biasanya hasil

pemeriksaan serologi akan tetap positif, namun kadar antibodi anti-HCV akan menurun

secara gradual sejalan dengan waktu pada sebagian pasien yang infeksinya mengalami reaksi

spontan.

Antibodi terhadap HCV biasanya dideteksi dengan metode enzyme immunoassay yang

sangat sensitif dan spesifik. Enzyme immunoassay generasi k-3 yang banyak dipergunakan

saat ini mengandung protein core dan protein struktural-struktural yang dapat mendeteksi

keberadaan antibodi dalam waktu 4-10 minggu infeksi. Antibodi anti-HCV masih tetap dapat

terdeteksi selama terapi maupun setelahnya tanpa memandang respon terapi yang telah

dialami, sehingga pemeriksaan anti-HCV tidak perlu dilakukan kembali apabila sudah pernah

dilakukan sebelumnya. Uji immunoblot rekombinan (recombinant immunoblot assay, RIBA)

dapat dipakai untuk mengkonfirmasi hasil uji enzyme immunoassay yang

positif. Penggunaan RIBA untuk mengkonfirmasi hasil hanya direkomendasikan untuk setting

populasi resiko rendah seperti pada bank darah. Namun dengan tersedianya metode enzyme

immunoassay yang sudah diperbaiki dan uji deteksi RNA yang lebih baik saat ini, maka

konfirmasi denga RIBA telah menjadi kurang diperlukan.

2) Uji HCV RNA

HCV RNA dapat terdeteksi dan diukur dengan teknik amplifikasi termasuk reverse

transcription polymerase chain reation (RT-PCR). Genotip HCV dapat dinilai dengan analisis

phylogenetic dari rantai nukleotida atau deteksi mutasi point spesifik subtipe pada RT-PCR

amplifikasi RNA. HCV RNA dideteksi dalam waktu 2 minggu infeksi dan juga dipakai untuk

konfirmasi terjadinya infeksi akut. Bagaimanapun uji HCV RNA yang rutin tidak dianjurkan

secara langsung karena standarisasi uji ini yang masih rendah.

3) Biopsi Hati

Biopsi hati secara umum direkomendasikan untuk penilaian awal seorang pasien dengan

infeksi HCV kronis. Biopsi berguna untuk menentukan derajat beratnya penyakit (tingkat

fibrosis) dan menentukan derajat nekrosis dan inflamasi.1 Pemeriksaan ini juga bermanfaat

untuk menyingkirkan kemungkinan adanya penyebab hati yang lain, seperti fitur

alkoholik, non-alcoholic steatohepatits (NASH), hepatitis autoimun, penyakit hati drug-

induced atau overload besi.

 Pemeriksaan HIV 1/2 Metode Rapid Tet

Prinsip : Pemeriksaan rapid tes ini merupakan uji kualitatif untuk mendeteksi antibodi

spesifik untuk HCV dalam serum atau plasma. Pada bagian sampel (S) membran strip

dilekatkan antigen recombinant HCV dan colloid gold conjugate yang berikatan dengan

antibodi HCV pada sampel, kemudian bergerak pada membran kromatografi menuju

daerah tes (T) yang telah dilekatkan antigen rekombinan HCV(antigen HCV Core, NS3, NS4,

NS5), sehingga apabila ada antibodi HCV pada sampel akan membentuk garis nyata

berwarna ungu pada daerah tes (T) yang merupakan ikatan komplek antigen – antibodi –

antigen gold partikel dengan spesisfisistas dan sensitivitas yang tinggi . Kelebihan Antigen

recombinan HCV dan colloid gold conjugate akan terus bergerak menuju area kontrol (C)

yang telah dilapisi antibodi HCV rekombinan, sehingga berikatan dan membentuk garis

merah pada area kontrol yang menunjukkan hasil pemeriksaan valid.

Alat dan Bahan :

 HCV Rapid test ( test strip , diluent dan pipet kapiler)

 Mikropipet (10 µL)

 Tip kuning

 Timer

 Sampel pasien (serum atau plasma)

Cara kerja :

1) Siapakan alat dan bahan yang diperlukan,kemudian simpan pada suhu kamar.

2) Buka kemasan kit pemeriksaan pada permukaan yang datar dan kering.

3) Untuk sampel menggunakan pipet kapiler atau mikropipet, dipipet 10µL sampel

darah dan masukkan ke dalam sampel well (S).

4) Tambahkan 3 tetes larutan diluent secara vertikal ke dalam sampel well (S).

5) Baca hasil pengamatan 5-20 menit. Peringatan : jangan membaca hasil lebih dari 20

menit

Interpretasi Hasil

- Negatif : hanya terbentuk satu garis pada daerah kontrol (C).

- Positif : Terbentuk dua garis ungu, satu garis di daerah tes (T) dan satu garis di

daerah kontrol (C).

Derajat warna yang terbentuk pada hasil positif

- Invalid : Tidak terbentuk garis pada daerah kontrol (C).

 Pemeriksaan HCV Metode ELISA

Prinsip :

Test Microlisa HIV merupakan test berbasis Indirect ELISA. Protein recombinant HCV

Core, protein NS3 dan sintetis peptida yang memiliki segmen antigenik, NS4 and NS5

regions dari virus hepatitis C dilekatkan pada sumur mikrotiter. Sampel dan kontrol

ditambahkan ke dalam sumur dan di inkubasi. Apabila pada sampel ada antibodi

HCV maka akan berikatan dengan antigen spesifik yang telah dilekatkan pada

permukaan sumur. Plate kemudian dicuciu ntuk menghilangkan komponen yang tidak

berikatan. Horseradish peroxidase (HRP) konjugat dan antihuman IgG ditambahkan ke

dalam setiap well. Konjugat akan berikatan dengan komplek HCV antigen-antibodi

yang terbentuk. Selanjutnya larutan substrat yang mengandung kromogen dan

hidrogen peroksida ditambahkan pada setiap sumur dan diinkubasi. Warna biru yang

terbentuk sebanding dengan jumlah antibodi HCV yang ada pada sampel.

Kemudian perubahan warna yang terbentuk dihentikan oleh stop solution. Warna yang

terbentuk dibaca pada ELISA reader dengan panjang gelombang 450nm / 630 nm.

Apabila sampel tidak mengandung antibodi HCV, maka tidak akan terbentuk warna

biru pada sumur.

Alat dan bahan :

a. Reagen ELISA untuk deteksi antibodi HCV

b. Mikropipet

c. Timer Elisa

d. reader Elisa

e. Washer ELISA

f. Inkubator370C

g. Vortex

h. Sarung tangan

i. Tisu atau kertas saring

j. Sampel (serum atau plasma)

Cara Kerja :

1) Siapkan alat dan bahan yang dibutuhkan. Simpan pada suhu kamar sebelum

dipakai .

2) Beri label setiap well. Label diberikan pada satu sumur (A1) sebagai blanko dan

dua sumur (B1 & C1) sebagai negatif kontrol dan tiga sumur (D1, E1 & F1) sebagai

positif kontrol

3) Tambahkan 100µl positif dan negatif kontrol (langsung dipakai )sesuai label

pada sumur.

4) Tambahkan 100 µl larutan pengencer pada setiap sumur untuk sampel

5) Tambahkan 10µl sampel pada sumur yang ada larutan pengencer tadi dan

homogenkan

6) Tutup mikroplate dan inkubasi pada suhu kamar (25-30°C) selama 30 menit

7) Cuci mikroplate sebanyak 5 kali dengan penambahan 300µl setiap sumur dengan

larutan buffer pencuci. Hati-hati jangan sampai kontaminasi

8) Tambahkan 100µl larutan HRP konjugat pada setiap sumur.

9) Tutup mikroplate dan inkubasi pada suhu kamar (25-30°C) selama 30 menit

10) Cuci mikroplate sebanyak 5 kali dengan penambahan 300µl setiap sumur dengan

larutan buffer pencuci. Hati-hati jangan sampai kontaminasi.

11) Tambahkan 100µl larutan TMB substrat pada setiap sumur.

12) Tutup mikroplate dan inkubasi pada suhu kamar (25-30°C) selama 30 menit

(keadaan gelap)

13) Hentikan reaksi dengan penambahan 100ul of the stop solution pada setiap

sumur.

14) Baca absorban pada panjang gelombang 450nm/630nm dalam waktu 30 menit

pada ELISA READER Dipipet 100 µl sample diluent dan masukkan ke sumur A-1 well

sebagai blank.

Tes validitas :

4) Nilai absorban Blanko harus lebih kecil dari 0,150

5) Nilai absorban Negatif kontrol harus < 0,250

6) Nilai absorban Positif kontrol harus > 0,60

Interpretasi Hasil

1) Spesimen dengan absorbansi kurang dari (<) nilai cut-off dinyatakan negatif.

2) Spesimen dengan nilai absorbansi lebih besar atau sama dengan () nilai cut-off

dinyatakan positif.

Topik 4

Sifilis

A. STRUKTUR DAN MORFOLOGI

Sifilis merupakan penyakit kronis dan bersifat sistemik yang disebabkan oleh treponema

palidum. Angka kejadian sifilis mencapai 90% dinegara-negara berkembang. World Health

Organization (WHO) memperkirakan sebesar 12 juta kasus baru terjadi di afrika, Asia Selatan,

Asia Tenggara, Amerika Latin dan Caribbean. Angka kejadian Sifilis di Indonesia berdasarkan

laporan Survey Terpadu dan Biologis Perilaku (STBP) tahun 2011 Kementrian Kesehatan RI

terjadi peningkatan angka kejadian Sifilis di tahun 2011 dibandingkan tahun 2007.

Treponema pallidum merupakan spesies treponema dari famili Spirochaeta, ordo

Spirochaetales, taksonomi dapat dilihat pada tabel 21.

Tabel 20. Taksonomi Treponema pallidum

TINGKATAN NAMA

Kingdom Bacteria

Phylum Spirochaetes

Ordo Spirochaetales

Family Spirochaetaceae

Genus Treponema

Species T. Pallidum

Subspecies Pallidum

Treponema pallidum berbentuk spiral, gram negatif dengan panjang kisaran 11 µm

dengan diameter antara 0,09 – 0,18 µm. ada dua lapisan, sitoplasma merupakan lapisan

dalam mengandung mesosom, vakuol ribosom dan bahan nukleoid, lapisan luar yaitu bahan

mukoid.

Gambar Struktur Treponema pallidum

B. CARA PENULARAN

Treponema palidum masuk melalui selaput lendir yang utuh, atau kulit yang mengalami

abrasi, menuju kelenjar limfe, kemudian masuk ke dalam pembuluh darah, dan diedarkan ke

seluruh tubuh. Biasanya dapat ditularkan melalui hubungan sekseual (membran mukosa atau

uretra), kontak langsung dengan lesi atau luka yang terinfeksi, transfusi darah dan juga dari

ibu yang menderita sifilis ke janin yang dikandung melalui plasenta pada stadium akhir

kehamilan.

Setelah beredar beberapa jam, infeksi menjadi sistemik walaupun tanda-tanda klinis dan

serolois belum jelas. Sekitar satu minggu setelah terinfeksi Treponema palidum, ditempat

masuknya akan timbul lesi primer berupa ulkus. Ulkus akan muncul selama satu hingga lima

minggu dan kemudian menghilang. Uji serologis masih akan negatif ketika ulkus pertama kali

muncul dan baru akan reaktif setelah satu sampai empat minggu berikutnya. Enam minggu

kemudian, timbul erupsi seluruh tubuh pada sebagian kasus sifilis sekunder dan ruam ini akan

hilang kisaran dua sampai enam minggu, karena terjadi penyembuhan spontan. Perjalanan

penyakit menuju ke tingkat laten, dimana tidak ditemukan tanda-tanda klinis, kecuali hasil

pemeriksaan serologis yang reaktif. Masa laten dapat berlangsung bertahun-tahun atau

seumur hidup.

C. GEJALA KLINIS

Stadium sifilis dalam perjalanannya dibagi menjadi tiga stadium yaitu sifilis stadium

primer, sekunder dan tersier yang terpisah oleh fase laten dimana waktu bervariasi, tanpa

tanda klinis infeksi. Interval antara stadium primer dan sekunder berkisar dari beberapa

minggu sampai beberapa bulan. Interval antara stadium sekunder dan tersier biasanya lebih

dari satu tahun.

 Sifilis Primer

Lesi awal sifilis berupa papul yang muncul di daerah genitalia kisaran tiga minggu setelah

kontak seksual. Papul membesar dengan ukuran 0,5 – 1,5 cm kemudian mengalami ulserasi,

membentuk ulkus. Ulkus sifilis yang khas berupa bulat, diameter 1-2 cm , tidak nyeri, dasar

ulkus bersih tidak ada eksudat, teraba indurasi, soliter tetapi dapat juga multipel. Hampir

sebagian besar disertai pembesaran kelenjar getah bening inguinal medial unilateral atau

bilateral. Gambaran chancre sifilis primer dapat dilihat pada gambar .

Gambar chancre sífilis primer pada penis

Chancre sífilis primer sering terjadi pada genitalia, perineal, atau anus dikarenakan

penularan paling sering melalui hubungan seksual, tetapi bagian tubuh yang lain dapat juga

terkena. Ulkus jarang terlihat pada genitalia eksterna wanita, karena lesi sering pada vagina

atau serviks. Dengan menggunakan spekulum, akan terlihat lesi di serviks berupa erosi atau

ulserasi yang dalam. Tanpa pengobatan lesi primer akan sembuh spontan dalam waktu 3

sampai 6 pekan. Diagnosis banding sifilis primer yaitu ulkus mole yang disebabkan

Haemophilus ducreyi, limfogranuloma venereum, trauma pada penis, fixed drug eruption,

herpes genitalis.

 Sifilis Sekunder

Manifestasi akan timbul pada beberapa minggu atau bulan, muncul gejala sistemik

berupa demam yang tidak terlalu tinggi, malaise, sakit kepala, adenopati, dan lesi kulit atau

mukosa. Lesi sekunder yang terjadi merupakan manifestasi penyebaran Treponema pallidum

secara hematogen dan limfogen. Manifestasi klinis sifilis sekunder dapat berupa berbagai

ruam pada kulit, selaput lendir, dan organ tubuh. Lesi kulit biasanya simetris, dapat berupa

makula, papula, folikulitis, papuloskuamosa, dan pustul, jarang disertai keluhan gatal. Lesi

dapat ditemukan di trunkus dan ekstermitas, termasuk telapak tangan dan kaki. Papul

biasanya merah atau coklat kemerahan, diskret, diameter 0,5 – 2 cm, biasanya berskuama

tetapi kadang licin. Lesi vesikobulosa dapat ditemukan pada sifilis kongenital.

Kondiloma lata merupakan istilah untuk lesi meninggi (papul), luas, putih atau abu-abu

di daerah yang hangat dan lembab. Lesi sifilis sekunder dapat muncul pada waktu lesi sifilis

primer masih ada. Diagnosis sifilis sekunder ditegakkan berdasarkan hasil pemeriksaan

serologis yang reaktif dan pemeriksaan lapangan gelap positif. Treponema pallidum banyak

ditemukan pada lesi selaput lendir atau basah seperti kondiloma lata.

Ruam kulit pada sifilis sekunder sukar dibedakan dengan pitiriasis rosea, psoriasis,

terutama jika berskuama, eritema multiforme dan erupsi obat. Diagnosis sifilis sekunder

cukup sulit. Pada biasanya diagnosis ditegakkan berdasarkan kelainan khas lesi kulit sifilis

sekunder ditunjang dengan pemeriksaan serologis.

 Sifilis Laten

Sifilis laten yaitu apabila pasien dengan riwayat sifilis dan pemeriksaan serologis reaktif

yang belum mendapat terapi sifilis dan tanpa gejala atau tanda klinis. Sifilis laten terbagi

menjadi dini dan lanjut, dengan batasan waktu kisaran satu tahun. Dalam perjalanan penyakit

sifilis akan melalui tingkat laten, selama bertahun-tahun atau seumur hidup. Tetapi

bukan bearti penyakit akan berhenti pada tingkat ini, sebab dapat berjalan menjadi sifilis

tersier.

 Sifilis Tersier

Sifilis tersier terdiri dari tiga grup sindrom yang utama yaitu neurosifilis, sifilis

kardiovaskular, dan sifilis benigna lanjut. Pada perjalanan penyakit neurosifilis dapat

asimptomatik dan sangat jarang terjadi dalam bentuk murni. Pada semua jenis neurosifilis,

terjadi perubahan berupa endarteritis obliterans pada ujung pembuluh darah disertai

degenerasi parenkimatosa yang mungkin sudah atau belum menunjukkan gejala saat

pemeriksaan.

Sifilis kardiovaskular disebabkan terutama karena nekrosis aorta yang berlanjut ke

katup. Tanda-tanda sifilis kardiovaskuler adalah insufisiensi aorta atau aneurisma, berbentuk

kantong pada aorta torakal. Bila komplikasi ini telah lanjut, akan sangat mudah dikenal.

Sifilis benigna lanjut atau gumma merupakan proses inflamasi proliferasi granulomatosa

yang dapat memicu destruksi pada jaringan yang terkena. Disebut benigna sebab jarang

memicu kematian kecuali bila menyerang jaringan otak. Gumma mungkin terjadi akibat

reaksi hipersensitivitas infeksi Treponema palidum. Lesi sebagian besar terjadi di kulit dan

tulang. Lesi pada kulit biasanya soliter atau multipel, membentuk lingkaran atau setengah

lingkaran, destruktif dan bersifat kronis, penyembuhan di bagian sentral dan meluas ke

perifer. Lesi pada tulang biasanya berupa periostitis disertai pembentukan tulang atau osteitis

gummatosa disertai kerusakan tulang. Gejala khas ialah pembengkakan dan sakit. Lokasi

terutama pada tulang kepala, tibia, dan klavikula. Pemeriksaan serologis biasanya reaktif

dengan titer yang tinggi.

 Sifilis Kongenital

Penyakit yang ditularkan kepada janin dalam uterus dari ibu yang positif menderita

sifilis. Infeksi sifilis terhadap janin dapat terjadi pada setiap stadium sifilis dan setiap masa

kehamilan. Dahulu beberapa pendapat menyatakan infeksi tidak dapat terjadi sebelum janin

berusia 18 minggu, karena lapisan Langhans yang merupakan pertahanan janin terhadap

infeksi sebelum atrofi. Tetapi kenyataannya dengan pengamatan menggunakan mikroskop

elektron dapat ditemukan Treponema pallidum pada janin berusia 9-10 minggu.

D. METODE PEMERIKSAAN

ada dua jenis uji serologi untuk diagnosis Treponema pallidum, yaitu :

6) Uji non-treponemal, merupakan uji yang paling sering dilakukan adalah sebagai

berikut

- Uji Venereal Disease Research Laboratory (VDRL)

- Uji Rapid Plasma Reagin.

Kedua pemeriksaan ini dipakai untuk mendeteksi antobodi terhadap antigen yang

terdiri dari kardioplin, kolesterol dan lesitin yang sudah terstandarisasi.

7) Uji treponemal, terdiri dari :

- Treponema pallidum Haem Aglutination (TPHA)

- Treponema pallidum Particle Agglutination (TP-PA)

- Flouresencent Treponemal Antibody Absorption (FTA-ABS)

- Micro Hemagglutination Assay for antibodies to Treponema pallidum (MHA-TP)

- Treponemal Enzyme Immuno Assay (EIA) untuk deteksi imunoglobulin G (IgG),

imunoglobulin G dan M (IgG dan IgM) atau imunoglobulin M (IgM)

Pemeriksaan ini mendeteksi antibodi terhadap antigen treponemal dan memilki

sensitivitas yang lebih tinggi dibandingkan dengan uji nontreponemal terutama sifilis

lanjut.

 Pemeriksan VDRL / RPR

Pemeriksaan Venereal Disease Research Laboratory (VDRL) / Serum atau

Cerebrospinal Fluid (RPR) merupakan satu-satunya pemeriksaan laboratorium untuk

neunurosipilis yang disetujui oleh Centers for Disease Control. Pemeriksaan VDRL serum

bisa memberikan hasil negatif palsu pada tahap late sipilis dan kurang sensitif dari RPR.

Pemeriksaan VDRL merupakan pemeriksaan penyaring atau Skrining Test, dimana apabila

VDRL positif maka akan dilanjutkan dengan pemeriksaan TPHA (Trophonema Phalidum

Heamaglutinasi). Hasil uji serologi tergantung pada stadium penyakit misalnya pada infeksi

primer hasil pemeriksaan serologi biasanya menunjukkan hasil non reaktif. Troponema

palidum dapan ditemukan pada chancre. Hasil serologi akan menunjukan positif 1-4

minggu setelah timbulnya chancre. Dan pada infeksi sekunder hasil serelogi akan selalu

pisitif dengan titer yang terus meningkat. Pasien yang terinfeksi bakteri treponema akan

membentuk antibody yang terjadi sebagai reaksi bahan-bahan yang dilepaskan karena

kerusakan sel-sel. Andibody ini disebut reagin.

a. Tujuan : Untuk mendeteksi adanya antibody nontreponema atau Reagin.

b. Metode Pemeriksaan : Slide

c. Prinsip Pemeriksaan : Adanya antibody pada serum pasien akan bereaksi dengan

antigen yang terdiri dari kardioplin, kolesterol dan lesitin yang sudah terstandarisasi

membentuk flokulasi ( gumpalan) atau aglutinasi.

d. Spesimen Pemeriksaan : Serum atau cairanotak

e. Alat dan Bahan Pemeriksaan

1. Slide pemeriksaan berlatar belakan putih

2. Mikroskop

3. Mikropipet

4. Tip kuning

5. Rotator

6. Timer

7. Batang pengaduk

f. Cara Kerja

a) Kualitatif

o Siapkan alat dan bahan yad dibutuhkan.

o Ke dalam lingkaran slide dipipet 50 ul serum.

o Tambahkan 50 ul atau 1 tetes antigen (reagen VDRL ).

o Homogenkan dengan batang pengaduk.

− Putar pada rotator kecepatan 100 rpm selama 4-8 menit.

− Amati ada tidaknya flokulasi.

b) Kuantitatif

o Siapkan alat dan bahan yang dibutuhkan.

o Lakukan pengenceran berseri pada slide dengan cara 50 ul serum + 50 ul saline

dihomogenkan kemudian hari campuran ini dipipet 50 ul dan diletakkan

pada lingkaran ke dua pada slide yang sama kemudian tambahkan 50 ul salin dan

homogenkan kembali lalu lakukan hal yang sam seperti pada lingkaran pertama

sampai lingkaran terakhir dima pada pengenceran terakhir hasil pengenceran

dibuang sebanyak 50 ul. Maka hasil pengenceran adalah 1/2 , 1/4 , 1/8, 1/16,

1/32, 1/64, 1/128.

o Kepada masing-masing pengenceran tambahkan 1 tetes ( 50 ul ) antigen VDRL (

reagen).

o Kemudian dihomogenkan dan diputar dengan rotator kecepatan 100 rpm selam

5-8 menit.

o Amati ada tidaknya flokulasi setiap pengenceran dan tentukan titer

pemeriksaannya ( yaitu pengenceran trerakhir yang masih menunjukkan

flokulasi )

g. Interpretasi Hasil

c) Kualitatif

Hasil pengamatan cukup menyebutkan non-reaktif, reaktif lemah atau reaktif

Gambar . Interpretasi hasil Pemeriksaan VDRL

Keterangan :

REAKTIF : Bila tampak gumpalan sedang atau besar

REAKTIF LEMAH: Bila tampak gumpalan kecil-kecil

NON REAKTIF : Bila tidak tampak flokulasi/gumpalan

d) Kuantitatif

Tentukan titernya (amati pngenceran trakhir yang masih menunjukkan flokulasi),

misalnya 1/64.

 Pemeriksaan TPHA

1) Tujuan : Untuk mendeteksi adanya antibody terhadap Treponema palidum dalam

serum dan plasma pasien secara kualitatif dan semi-kuantitatif

2) Metode Pemeriksaan : Hemaaglutinasi tidak langsung (indirek hemaaglutinasi)

3) Prinsip Pemeriksaan : adanya antibodi Treponema palidum akan bereaksi dengan

antigen treponemal yang menempel pada eritrosit ayam kalkun/ domba sehingga

terbentuk aglutinasi dari eritrosit-eritrosit ini .

Gambar .Prinsip Uji TPHA

4) Spesimen Pemeriksaan : Serum

5) Alat dan Bahan Pemeriksaan

1) Mikroplate tipe U

2) Mikropipet (25µL , 75µl dan 100µL)

3) Automati vibrator

4) Reagen kit TPHA (R1 : Test sel - R2 : Control sel - R3 : Diluent - R4 : Control positif

- R5 : Control negatif)

6) Cara Kerja

e) Kualitatif

a) Alat dan bahan disiapkan

b) Setiap komponen kit dan sampel dikondisikan pada suhu kamar.

c) Semua reagen dihomogenkan perlahan.

d) Diluents ditambahkan sebanyak 190 µl dan sampel ditambahkan sebanyak 10µl

pada sumur 1 lalu dihomogenkan

e) Campuran pada sumur 1 dipipet sebanyak 25 µl dan ditambahkan pada sumur 2

dan 3

f) Control sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur 2 lalu dihomogenkan.

g) Test sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur 3 lalu dihomogenkan

h) Sumur diinkubasi pada suhu ruang selama 45 – 60 menit.

i) Aglutinasi yang terjadi diamati.

j) Sampel yang menunjukan hasil aglutinasi positif dilanjutkan ke uji semi kuantitatif.

Catatan : control positif dan negatif selalu disertakan dalam setiap uji tanpa perlu

diencerkan.

f) Kuantitatif

o Alat dan bahan disiapkan.

o Setiap komponen kit dan sampel dikondisikan pada suhu kamar.

o Semua reagen dihomogenkan perlahan.

o Sumur mikrotitrasi disiapkan dan diberi label no. 1 sampai 8.

o Pengenceran sampel dibuat pada sumur yang berbeda dengan sumur mikrotitrasi

dengan mencampur 190 µl diluents dan 10 µl sampel

o Sumur mikrotitrasi no. 1 dikosongkan

o Sumur mikrotitrasi no. 2 – 8 ditambahkan 25µl diluent

o Pada sumur mikrotitrasi no. 1 dan 2 ditambahkan 25 µl sampel yang telah

diencerkan.

o Campuran pada sumur 2 dipipet 25 µl dan ditambahkan pada sumur 3, lalu

dihomogenkan. Begitu seterusnya sampai sumur 8.

o Campuran pada sumur 8 dipipet 25 µl dan dibuang

o Control sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur mikrotitrasi no. 1 lalu

dihomogenkan.

o Tes sel sebanyak 75 µl ditambahkan pada sumur mikrotitrasi no. 2-8 lalu

dihomogenkan.

o Sumur diinkubasi pada suhu ruang selama 45 – 60 menit.

o Aglutinasi yang terjadi dibaca, dan ditentukan titernya

7) Interpretasi Hasil

g) Kualitatif

Hemaglutinasi positif ditandai dengan adanya bulatan berwarna merah dipermukaan

sumur, hasil negatif terlihat seperti titik berwarna merah di tengah dasar sumur.

Derajat hemaglutinasi :

+4 : bulatan merah merata pada seluruh permukaan sumur

+3 : bulatan merah ada di sebagian besar permukaan sumur

+2 : bulatan merah yang terbentuk tidak besar dan tampak seperti cincin

+1 : bulatan merah kecil dan tampak cincin terang

+/- : tampak cincin dengan warna bulatan merah yang samar

- : Tampak titik berwarna merah didasar sumur

Gambar 5.24 Derajat Hemaglutinasi pemeriksaan TPHA

h) Kuantitatif

Titer : pengenceran tertinggi yang masih menunjukkan aglutinasi

Sumur 1 2 3 4 5 6 7 8

Titer Control

cell

1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1/2560 1/5120

Glosarium

Open Reading Frame (ORF) : bagian dari susunan DNA yang siap ditranslasikan tanpa kodon

stop, sehingga protein yang dihasilkan dalam jumlah besar (overexpression.

Nucleid Acid Test (NAT) : teknik molekuler yang dipakai untuk menyaring darah donor

dengan tujuan mengurangi infeksi yang ditularkan lewat transfusi darah pada pasien.

Colodial gold conjugate : merupakan molekul yang tersusun dari beberapa partikel koloid

emas yang bermuatan negatif dan memiliki afinitas kuat untuk beberapa protein yang

cenderung bermuatan positif, pH netral atau fisiologis.

Bab 6

PEMERIKSAAN IMUNOHEMATOLOGI

(PEMERIKSAAN PRE TRANSFUSI)

Transfusi darah merupakan ilmu tentang golongan darah manusia dalam hubungannya

dengan proses pemindahan darah / komponen-komponen darah dari donor kepada resipien.

Dalam bab ini akan dibahas tentang pemeriksaan Imunohematologi atau yang lebih dikenal

sebagai pemeriksaan pre-transfusi, diantaranya pemeriksaan golongan darah ABO & Rhesus,

Crossmatch, Coomb’s Test, skrining dan identifikasi antibodi. Tujuan pemeriksaan pre-

transfusi adalah memilih darah atau komponen darah yang kompatibel, sehingga dapat

menyelamatkan jiwa seseorang dengan tidak merusak darah pasien atau merugikan pasien.1

Selama pemeriksaan ada beberapa hal yang harus diperhatikan dalam pemeriksaan

pretransfusi, antara lain :

A. Sampel darah pasien.

Apabila pasien memerlukan transfusi darah, maka pasein harus diambil darah sekitar

5-10 mL yang dimasukkan ke dalam tabung kering untuk mendapatkan serum / plasma

yang cukup banyak sebagai bahan pemeriksaan pre-transfusi. Selain itu sampel harus

diberi pengenal yang jelas, meliputi nama pasien, tanggal lahir pasien dan nomor

registrasi/barcode pasien. Kemudian dikirim secepatnya ke laboratorium bersamaan

dengan formulir permintaan darah.

Pengambilan sampel darah pasien dengan pemberian label yang benar merupakan hal

kritis yang perlu diperhatikan. Apabila ada contoh darah pasien yang tidak memiliki

identitas yang jelas, maka harus mengambil contoh darah pasien baru untuk

mengabsahkan identitas pasien. Selain itu sampel darah pasien tidak boleh hemolisis,

karena dapat mengganggu pemeriksaan pre transfusi.

B. Formulir permintaan darah

Formulir permintaan darah harus ditandatangani oleh dokter yang merawt pasien.

Formulir permintaan darah berisikan informasi sebagai berikut :

1) Tanggal permintaan

2) Nama lengkap pasien

3) Tanggal lahir atau usia

4) Jenis kelamin

5) Nomor registrasi rumah sakit

6) Ruang rawat / bangsal

7) Alamat pasien

8) Diagnosis pasien

9) Golongan darah apabila sudah diketahui.

10) Keberadaan setiap antibodi, apabilah telah diketahui

11) Riwayat transfusi sebelumnya

12) Riwayat reaksi transfusi.

13) Jumlah dan jenia darah atau produk darah yang dibutuhkan.

14) Tanggal dan waktu dibutuhkan.

15) Tanda tangan dokter yang meminta darah.

Catatan : Lakukan konfirmasi identitas sampel darah pasien di bank darah.

C. Penyimpanan sampel darah

Sampel darah pasien dan donor harus ditutp dan disimpan dengan baikpada suhu 2-6°C

minimal 7 hari setelah transfusi, tujuannya untuk pemeriksaan ulang apabila ada laporan

terjadinya reaksi transfusi.

D. Pendataan

Setiap permintaan darah dan pemeriksaan darah harus ada pendataan yang lengkap, agar

dapat dilakukan penelusuran kembali bila dibutuhkan sewaktu-waktu.

E. Pemeriksaan pre transfusi

pemeriksaan pre-transfusi pada sampel darah donor dan pasien yang meliputi

pemeriksaan golongan darah ABO & Rhesus, Crossmatch, Coomb’s Test, skrining dan

identifikasi antibodi

Pada Bab ini mahasiswa akan melalukan praktikum Imunohematologi, untuk itu

mahasiswa diwajibkan mematuhi tata tertib Praktikum di laboratorium, sebagai berikut

:Larangan :

a) Dilarang makan, minum, dan merokok selama praktikum di laboratorium.

b) Dilarang membuang sampah ke dalam wastafel / meja kerja dan di dalam ruangan

laboratorium.

c) Dilarang membawa telepon genggam / handphone selama praktikum, kecuali memakai

cover / plastik disposible.

Kewajiban :

a) Praktikan harus menggunakan alat pelindung diri (APD) selama praktikum di

laboratorium.

b) Praktikan harus mengisi daftar hadir dan melaporkan hasil pengamatan kepada dosen /

asisten pengawas praktikum.

c) Praktikan harus melaporkan setiap kerusakan alat yang dipakai dan menggantinya

dengan spesifikasi yang sesuai.

d) Bersihkan sisa praktikum pada setiap meja / wastafel tempat Anda bekerja.

e) Peralatan yang telah selesai dipakai dikembalikan pada dosen pengawas dalam keadaan

bersih dan kering.

f) Setiap kelompok praktikum diwajibkan membawa kain lap bersih / tisu, kertas label, dan

spidol permanen.

g) Untuk persiapan sebelum praktikum dan pengawasan alat setelah praktikum, dosen

pengawas akan dibantu oleh kelompok piket yang bertugas secara bergantian setiap

minggunya.

Topik 1

Persiapan Alat, Reagensia dan Sampel

A. PERSIAPAN ALAT

Peralatan yang diperlukan untuk pemeriksaan imunohematologi / pretransfusi,

diantaranya :

1. Sentrifuse untuk pemisahan darah menggunakan tabung reaksi (table top centrifuge).

2. Sentrifuse untuk pemeriksaan golongan darah metode tabung (serological centrifuge).

3. Sentrifuse untuk pemeriksaan metode gel tes (gel test centrifuge).

4. Inkubator 37°C (waterbath atau dry incubator)

5. Inkubator 37° untuk pemeriksaan gel tes

6. Lemari es (refrigerator)

7. Tabung reaksi ukuran 12 x 7,5 mm

8. Rak tabung reaksi

9. Pipet pasteur plastik

10. Blood Grouping Plate (BGP)

11. Coomb gel tes

12. Pipet adjustable ukuran 200 – 1000 µL

13. Pipet adjustable ukuran 5 – 50 µL

14. Tissue

15. Objek glass

16. Mikrokop

17. Tips kuning

18. Tip Biru

19. Label

20. Spidol permanen

21. Kontainer / wadah penampung

22. Sarung tangan

23. Masker

24. Jas laboratorium

25. Gunting

26. Kantung plastik limbah.

B. PERSIAPAN REAGENSIA

Bahan dan Reagen yang diperlukan untuk pemeriksaan imunohematologi / pretransfusi,

diantaranya :

a. Sampel darah pasien

b. Sampel darah donor

c. Anti-A

d. Anti-B

e. Anti-D IgM

f. Anti-D IgG

g. Bovine albumin 22% dan 6%

h. Anti Human Globulin / Serum Coombs

i. Larutan saline (0,9%)

j. Aquadest

k. Larutan alseiver

l. Low Ionic Strenght Saline (LISS) : Larutan garam faali 0,2% dan larutan sukrosa 7%

m. Desinfektan (hipochlorit 0,5%)

n. Detergen

C. PERSIAPAN SAMPEL

Preparasi contoh darah harus dilakukan sebelum melakukan pemeriksaan lebih lanjut

untuk mendapatkan hasil pemeriksaan yang optimal. Ada beberapa hal yang harus

diperhatikan dalam hal ini, diantaranya :

1) Pemisahan serum / plasma dari sel darah

1) Prinsip : Darah sitrat / darah EDTA dengan pemutaran akan terjadi pemisahan

antara plasma dan sel-sel darah.

2) Tujuan : Memisahkan plasma dari sel-sel darah

3) Kegunaan :

1) Persiapan pembuatan suspensi darah

2) Persiapan penentuan antigen golongan darah

4) Cara Kerja :

-- Siapkan contoh darah dengan antikoagulan EDTA dalam tabung.

-- Sentrifugasi darah dalam tabung dengan kecepatan 3000 rpm selama 2 menit.

-- Siapkan 1 tabung yang bersih untuk menampung plasma.

-- Pisahkan plasma sebanyak-banyaknya dari sel darah merah pekat dan masukan

ke dalam tabung yang sudah disiapkan.

-- Beri identitas pada masing-masing tabung sel darah merah pekat dan plasma

Gambar 6.1 Skema pemisahan serum/plasma daeri sel darah merah

2) Pencucian sel darah merah

5) Prinsip : Dengan penambahan larutan saline (NaCl 0,9%) dan pemutaran maka

antibodi di sekitar sel darah merah akan hilang..

6) Tujuan :

1. Menghilangkan sisa protein pada sel darah merah

2. Menghilangkan sel-sel darah yang rapuh

3. Menghilangkan auto cold antibody

4. Menghilangkan formasi Rouleaux

7) Kegunaan :

1. Persiapan pembuatan suspensi darah

2. Persiapan penentuan antigen golongan darah

8) Cara Kerja :

a) Lakukan pencucian sel darah merah pekat dengan mengambil ± 8 tetes dan

masukan kedalam tabung reaksi 12 x 75 mm.

b) Tambahkan NaCl 0,9% (saline) sebanyak ± 4,5ml atau sampai ¾ tabung kedalam

sel darah merah pekat tadi.

c) Tutup tabung dengan parafilm, kocok dengan perlahan agar larutan menjadi

homogen.

d) Sentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 2 menit.

e) Buka penutup parafilm dan buang supernatan dengan menggunakan pipet

(pencucian ke 1).

f) Lakukan pencucian sebanyak 3 kali dengan mengulangi langkah ke b hingga ke e

sesuai kebutuhan.

g) Sel darah merah yang sudah dicuci merupakan suspensi 100 %.

Gambar 6.2 Skema pencucian sel darah merah

3) Pembuatan suspensi sel darah merah

Sel darah merah yang sudah dicuci kemudian dibuat suspensi yang sesuai kebutuhan,

yaitu :

Tabel 21. Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah

% Suspensi

Suspensi

SEL DARAH

MERAH

100%

Medium

(Larutan Saline)

Penggunaan

(1/20)

1 bagian a) bagian a) Pemeriksaan golongan darah (tube

test)

b) Pemeriksaan silang serasi

(crossmatching)

10%

(1/10)

1 bagian 9 bagian Pemeriksaan golongan darah ABO (slide

test/bioplate)

40%

(2/5)

1 bagian 3 bagian Pemeriksaan golongan darah rhesus

(slide test/ bioplate)

4) Untuk pembuatan Test Sel Golongan darah A,B,O untuk pemeriksaan antibodi pada serum,

dilakukan pooling dari darah donor suspensi 100% yang telah diketahui golongan darahnya :

1 Test Sel A => Dibuat dari 3 golongan darah A yang di pooling sama banyak (A1, A2, A3),

kemudian dibuat suspensi 5% dan 10% .

2 Test Sel B => Dibuat dari 3 golongan darah B yang di pooling sama banyak (B1, B2, B3),

kemudian dibuat suspensi 5% dan 10%.

3 Test Sel O => Dibuat dari 3 golongan darah O yang di pooling sama banyak (O1, O2, O3),

kemudian dibuat suspensi 5% dan 10%.

Tabel 22. Cek List Perawatan Contoh Darah

Memisahkan serum/plasma dengan sel darah merah

Contoh darah dalam tabung

↓

Putar 3000 rpm selama 2 menit

↓

Hasil → supernatan dan sedimen sel

↓

Siapkan 2 tabung beri label

↓

Pisahkan supernatan (plasma/serum) kedalam tabung

↓

Serum jernih dan sek darah merah pekat

↓

Sel darah merah pekat

Pencucian sel darah merah pekat dengan saline

Sel darah merah pekat dengan ambil ± 8 tetes

↓

Tambahkan NaCl 0,9% (saline) sebanyak ± 4,5mL atau sampai ¾ tabung

↓

Tutup tabung dengan parafilm

↓

kocok perlahan agar larutan homogeny (bolak balik tabung)

↓

Putar 3000 rpm selama 2 menit

↓

Buka penutup →buang supernatan saline (pencucian I)

↓

Lakukan pencucian sebanyak 3 kali dengan mengulangi point 2-6

↓

Hasil →sel darah merah pekat 100% yang bebas protein/globulin (WPRC)

5) PembuatanCOOMB’S CONTROL CELLS (CCC)

COOMB’S CONTROL CELLS (CCC) adalah suspensi sel darah merah golongan O Rhesus

positif yang sudah disensitasi (dicoated) oleh anti –D IgG ( inkomplit).

1. Tujuan :

a) Dapat menguji reagen Coomb’s Serum, masih valid/ invalid

b) Dapat menguji hasil negative dari pemeriksaan uji silang, Direct Coomb’s Test dan

indirect Comb’s Test, hasil negative ini valid/invalid.

2. Prinsip : Antigen + antibodi D IgG (inkomplit)→ Antigen sensitasi ( coated ) antibodi D

inkomplit

3. Metoda: Tube test

4. Pembuatan Coomb’s Control Cells :

-- Nyalakan dan atur suhu inkubator pada 37⁰C.

-- Siapkan reagensia pada suhu kamar sebelum dipakai dan disimpan kembali pada

suhu 2⁰C - 8⁰C setelah dipakai .

-- Siapkan contoh darah yang memakai antikoagulan golongan O Rhesus positif.

-- Pembuatan suspensi sel 5%, 40% dari darah golongan O Rhesus positif

-- Pemeriksaan titer anti-D IgG ( inkomplit )

a) Siapkan 10 tabung reaksi masing-masing tabung beri indentitas : ½, ¼, 1/8, 1/16,

1/32, 1/64, 1/128, 1/256, 1/512, 1/1024

b) Tabung 1 s/d 10 teteskan saline sebanyak 2 tetes.

c) Isi tabung no.1 teteskan anti-D IgG sebanyak 2 tetes.

d) Kocok perlahan dengan menggunakan pipet, ambil 2 tetes campuran masukan

kedalam tabung no.2

e) Lakukan pemindahan enceran berkala sampai tabung no.10, pada tabung no. 10

buang 2 tetes enceran anti-D tsb.

f) Kocok semua tabung hingga cairan tercampur

g) Inkubasi pada suhu 37⁰C selama 15 menit semua tabung

h) Angkat semua tabung, putar 3000rpm selama 15”, baca hasil reaksi.

i) Tabung yang hasilnya negative dicuci sebanyak 3x dengan saline

j) Pada pencucian terakhir buang supernatant sebanyak banyaknya.

k) Tambahkan 2 tetes comb’s serum (AHG).

l) Kocok perlahan hingga cairan tercampur

m) Putar 3000rpm Selama 15”, baca hasil reaksi

Tabel 23. Lembar hasil titer anti – D IgG ( inkomplit ).

Tabung

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

½ ¼ 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024

37⁰C

selama 15

menit

neg Neg Neg Neg Neg Neg Neg Neg Neg Neg

Hasil

(contoh)

4+ 4+ 3+ 3+ 2+ + + Neg Neg Neg

a) Membuat enceran anti –D IgG yang dipakai adalah dengan hasil kekuatan titer : 2. Yaitu

pada titer 32.

b) Suspensi yang dipakai adalah suspensi 40% agar tidak telalu banyak dalam

penetesan.

Tabel 24. Modifikasi Suspensi Sel Darah Merah Untuk Pembuatan CCC

Suspensi sel darah merah

( modifikasi )

Enceran anti-D IgG dengan saline

5% 32 → 1 tetes anti-D IgG + 31 saline

10 % 16 → 1 tetes anti-D IgG + 15 saline

40% f) → 1 tetes anti-D IgG + 7 saline

− Buatlah suspensi sel O Rh positif (yang sudah dicuci 1 kali) menjadi 40% dalam saline

− Buat pengenceran anti –D (IgG) dengan titer 1:7 dalam saline.

− Kedalam enceran anti –D, tambahkan suspensi sel O Rh positif 40% sebanyak 4 tetes.

− Kocok perlahan hingga tercampur, inkubasi 37⁰C selama 15 menit (coated/sensitasi).

− Putar 2 menit 3000rpm kemudian supernatant dibuang.

− Cuci selnya dengan saline sebanyak 3x .

− Endapan sel darah merah dibuat suspensi 5% → Coomb’s Control Cells (CCC) akan

diperoleh 32 tetes CCC dengan perhitungan sebagai berikut :

P1 . V1 = P 2 . V 2

40% . 4 tetes = 5% . V 2

V 2 = 32 tetes

− Jika saline yang tersisa di tabung sekitar 3 tetes, maka saline yang ditambahkan

sebanyak 29 tetes.

- VALIDASI REAGEN

Pereaksi atau sering disebut juga reagensia (inggris : reagent) adalah suatu zat

yangberperan dalam suatu reaksi kimia atau diterapkan untuk tujuan analisis. Istilah reagen

jugadipakai untuk menunjuk pada zat kimia dengan kemurnian yang cukup untuk sebuah

analisisatau percobaan. Sebelum dipakai untuk analisis, suatu reagen harus melalui proses

validasi dahulu untuk mengetahui kualitas dari reagen ini . Validasi reagen adalah suatu

tindakanyang dilakukan untuk menunjukan tingkat kevalidan atau kesahihan suatu reagen.

Validasi reagen merupakan salah satu pemantapan mutu internal. Pemantapan mutu internal

adalah kegiatan pencegahan dan pengawasan yang dilaksanakan oleh setiap laboratorium

secara terus-menerus agar diperoleh hasil pemeriksaan yang tepat.

Uji validitas reagen adalah suatu langkah pengujian yang dilakukan terhadap isi

(content)dari suatu reagen, dengan tujuan untuk mengukur ketepatan reagen yang dipakai

dalam suatu pemeriksaan. Untuk mengetahui apakah tes itu valid atau tidak harus dilakukan

melalui pengujian dari reagen itu sendiri agar hasil dari pemeriksaan dapat berlangsung

dengan baik dan benar. Dengan melakukan uji validitas reagen juga bermanfaat untuk

mengetahui kondisi reagen.

Jadi, tujuan validasi reagen adalah untuk menguji validitas suatu reagen sehingga dapat

diketahui kualitas dari reagen sebelum dipakai untuk pemeriksaan dan juga untuk

menetapkan reagen yang dipakai valid atau invalid sehingga diperoleh hasil pemeriksaan

yang akurat. Oleh karena itu, validitas reagen penting dilakukan sebelum melakukan

pemeriksaan menggunakan reagen ini .

Dalam praktikum ini, dilakukan uji validitas reagen, khususnya reagen yang dipakai

pada pemeriksaan golongan darah untuk tujuan transfusi darah. Uji kualitas reagen harus

dilakukan pada:

a) Setiap kali batch larutan kerja (working solution) dibuat.

b) Setiap minggu

c) Bila sudah mendekati masa kadaluarsa

d) Bila ditemukan/terlihat tanda tanda kerusakan ( timbul kekeruhan, perubahan warna,

timbul endapan)

e) Bila ada kecurigaan hasil pemeriksaan

Reagen yang akan divalidasi dalam praktikum ini adalah

1. antisera A,B dan D

2. test sel ABO

3. Bovine Albumin 22%

4. Comb’s Serum

5. CCC ( Comb’s Control Cell)

Sebelum memulai proses validasi, masing-masing reagen

bank darah 3,

bank darah 3

ARTICLE

POPULAR

TRANSLATE

Privacy Policy for sakitx.blogspot.com

Log Files

Google DoubleClick DART Cookie

Our Advertising Partners

Privacy Policies

Third Party Privacy Policies

Children's Information

Online Privacy Policy Only

Consent

Terms and Conditions

Cookies

License

Hyperlinking to our Content

iFrames

Content Liability

Reservation of Rights

Removal of links from our website

Disclaimer

viewer

Penulis

SEARCH

archive

bank darah 3,

bank darah 3

Social Profiles

ARTICLE

POPULAR

TRANSLATE

Privacy Policy for sakitx.blogspot.com

Log Files

Google DoubleClick DART Cookie

Our Advertising Partners

Privacy Policies

Third Party Privacy Policies

Children's Information

Online Privacy Policy Only

Consent

Terms and Conditions

Cookies

License

Hyperlinking to our Content

iFrames

Content Liability

Reservation of Rights

Removal of links from our website

Disclaimer

viewer

Penulis

SEARCH

archive